錸-188標(biāo)記分子探針的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分188Re標(biāo)記胰島素樣生長(zhǎng)因子-1類似物(IGF-1A)的實(shí)驗(yàn)研究 一、188Re-IGF-1A的制備 目的:研究標(biāo)記率高且穩(wěn)定的188Re標(biāo)記胰島素樣生長(zhǎng)因子-1類似物(IGF-1A)的方法學(xué)。方法:1．采用直接標(biāo)記法標(biāo)記經(jīng)修飾的IGF-1A，改變標(biāo)記條件：Tween80的用量從2～10μ L、SnCl2·2H2O濃度變化從0．75～25mg/mL、IGF-1A的用量從20～100μ g、淋洗液的體積從10～5

2、00μ L；分別在不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定標(biāo)記率。2．標(biāo)記物中加入生理鹽水或人血清后不同時(shí)間點(diǎn)測(cè)定其標(biāo)記率。結(jié)論:用直接標(biāo)記法進(jìn)行埔188Re標(biāo)記IGF-1A，標(biāo)記率高且穩(wěn)定性良好。 二、188Re-IGF-1A與胰腺癌細(xì)胞結(jié)合及細(xì)胞殺傷效應(yīng)實(shí)驗(yàn) 目的:研究188Re-IGF-1A與胰腺癌細(xì)胞的特異性結(jié)合及其對(duì)胰腺癌細(xì)胞的殺傷效果。方法:1．測(cè)定188Re-IGF-1A與胰腺癌Patu8988細(xì)胞的結(jié)合率。2．用MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)給藥

3、后細(xì)胞增殖情況，將1×104/孔細(xì)胞接種于96孔板上，細(xì)胞分為對(duì)照組、IGF-1A組(1、5、10、20μ g)、188ReO4-組(0．37、1．85、3．70、7．40MBq)和。188Re-IGF-1A組(0．37、0．74、1.85MBq)，另設(shè)空白調(diào)零組。3．188ReO4-組和188Re-IGF-1A組接種后，分別在給藥后1～7d，每天采用MTT比色法測(cè)定其OD值，IGF-1A組分別在給藥后1～6d，每天采用MTT比色法測(cè)定

4、其OD值。根據(jù)各組OD值，計(jì)算生存率和抑制率。4．將細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶中，分188ReO4-組和188Re-IGF-1A組(1．85、3．70、7．40MBq)，在給藥后3d用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。結(jié)論:188Re-IGF-1A能與胰腺癌Patu8988細(xì)胞特異性結(jié)合，并對(duì)胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。 三、188Re-IGF-1A在荷瘤裸鼠體內(nèi)分布、顯像和吸收劑量估算 目的:研究188Re-IGF-

5、1A在荷人胰腺癌裸鼠體內(nèi)的分布、顯像和劑量估算。方法:1．建立荷人胰腺癌Patu8988裸鼠模型。2．將66只荷人胰腺癌裸鼠隨機(jī)分2組，188Re-IGF-1A組36只，188ReO4-組30只。采取瘤內(nèi)注射給藥方式，注射188Re-IGF-1A或188ReO4-0．03mL，同時(shí)取0．05mL188ReO4-洗脫液做標(biāo)準(zhǔn)源。在瘤內(nèi)注射后即刻行SPECT平面顯像，通過(guò)裸鼠全身與標(biāo)準(zhǔn)源的ROI計(jì)數(shù)比值，換算每個(gè)荷瘤裸鼠總注射劑量。3．18

6、8Re-IGF-1A組于注射后15min、1、4h、1、3、5d顯像并處死裸鼠。188ReO4-組于注射后15min、1、2、4、24h顯像并處死裸鼠。解剖后取所需組織稱量并測(cè)量其60s的放射性計(jì)數(shù)，計(jì)算各組織的每克組織百分注射劑量率(％ID/g)，并計(jì)算腫瘤與血、心、腦、甲狀腺、肝、脾、肺、腎、胃、腸、胰、骨、肌肉的比值(T/NT)。4．根據(jù)各組織不同時(shí)間點(diǎn)的平均％ID/g，通過(guò)放射性藥物內(nèi)照射劑量計(jì)算軟件計(jì)算出吸收劑量(mGy/MB

7、q)。結(jié)論:瘤內(nèi)注射188Re-IGF-1A后，在腫瘤部位積聚較高，可望作為胰腺癌經(jīng)動(dòng)脈灌注治療的藥物，并能在體外觀察其分布。 第二部分188Re標(biāo)記反基因肽核酸(AGPNA)的實(shí)驗(yàn)研究 一、k-ras-AGPNA抑制k-ras基因表達(dá)實(shí)驗(yàn) 目的:探索自主設(shè)計(jì)的與胰腺癌k-ras點(diǎn)突變基因特異性結(jié)合的反基因肽核酸(AGPNA)的生物活性。方法:1.設(shè)計(jì)并合成與胰腺癌k-ras點(diǎn)突變基因特異性結(jié)合的k-ras-AG

8、PNA。2.應(yīng)用RT-PER檢測(cè)轉(zhuǎn)染k-ras—AGPNA前后胰腺癌Patu8988細(xì)胞k-ras癌基因的mRNA表達(dá)水平，分對(duì)照組、k-ras-AGPNA組、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染k-ras-反基因寡核苷酸(AGON)組、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染k-ras-反義寡核苷酸(ASON)組。3.應(yīng)用流式細(xì)胞儀測(cè)定轉(zhuǎn)染k-ras-AGPNA前后胰腺癌Patu8988細(xì)胞的k-ras蛋白表達(dá)水平。結(jié)論:自主設(shè)計(jì)并合成的k-ras-AGPNA能抑制k-ras基因在mRNA

9、和蛋白水平的表達(dá)。 二、188Re-k-ras-AGPNA的制備及其胰腺癌細(xì)胞內(nèi)化實(shí)驗(yàn)研究 目的:制備188Re-k-ras-AGPNA并研究其與胰腺癌Patu8988細(xì)胞結(jié)合的特性。方法:1.用188Re直接標(biāo)記經(jīng)修飾的k-ras-AGPNA。2.預(yù)實(shí)驗(yàn)中其他標(biāo)記條件不變，將SnCl2·2H2O濃度改為20mg/mL，k-ras-AGPNA的用量改為20μ L(40μ g)后分別進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。3.在標(biāo)記后不同時(shí)間點(diǎn)15、3

10、0min、1、2、4、6h測(cè)定標(biāo)記率。4.測(cè)定標(biāo)記物在人血清和生理鹽水中5min～24h不同時(shí)間點(diǎn)的標(biāo)記率。5.胰腺癌Patu8988細(xì)胞攝取188Re-k-ras-AGPNA的內(nèi)化實(shí)驗(yàn)。結(jié)論:188Re直接標(biāo)記k-ras-AGPNA方法簡(jiǎn)便、標(biāo)記率較高，能與胰腺癌細(xì)胞結(jié)合并轉(zhuǎn)染入細(xì)胞核。 三、188Re-k-ras-AGPNA誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和荷瘤裸鼠體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn) 目的:研究188Re-k-ras-AGPNA的誘導(dǎo)凋亡效應(yīng)

11、和在荷人胰腺癌裸鼠體內(nèi)的分布、顯像和劑量估算。方法:1.胰腺癌Patu8988細(xì)胞給予188Re-k-ras-AGPNA和188ReO4-3～5d后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。2.將28只荷人胰腺癌裸鼠分7組，每組4只。采取瘤內(nèi)注射給藥方式，注射188Re-k-ras-AGPNA0.03mL。3.注射后15min、1、4h、1、3、5、7d顯像并處死裸鼠，解剖后取所需組織稱量并測(cè)量其60s的放射性計(jì)數(shù)，計(jì)算各組織的％ID/g和腫瘤與其

12、他組織的比值(T/NT)，并根據(jù)各組織不同時(shí)間點(diǎn)的平均％ID/g計(jì)算出吸收劑量(mGy/MBq)。結(jié)論:瘤內(nèi)注射188Re-k-ras-AGPNA后，腫瘤部位攝取高、清除緩慢，腫瘤吸收劑量高，可望作為胰腺癌治療的藥物。 第三部分188Re-錫硫膠體介入治療荷VX2肝癌兔的體內(nèi)生物分布研究 目的:研究188Re-錫硫膠體(TSC)的制備及其經(jīng)肝動(dòng)脈灌注給藥后在兔VX2肝腫瘤模型體內(nèi)的生物學(xué)分布特征，探討其作為放射性介入治療

13、劑的可行性。方法:1.改變標(biāo)記條件制備188Re-TSC和188Re-聚合白蛋白(MAA)，檢測(cè)標(biāo)記物在人血清中的穩(wěn)定性，測(cè)定188Re-TSC的顆粒大小。2.建立32只VX2肝腫瘤模型，均經(jīng)CT或DSA證實(shí)，1例行病理學(xué)檢查。3.31只荷瘤兔分188Re-TSC(n=12)、188Re-MAA(n=15)和188ReO4-(n=4)3組，將放射性藥物經(jīng)肝動(dòng)脈注射入腫瘤內(nèi)，分別在注射后15min、1h和24h分別進(jìn)行SPECT平面顯像，