P162通過抑制CHK1-2表達來增加食管癌細胞株Eca109放射敏感性的研究.pdf

1、分類號：U D C ：密級：猷漠神撥夫·肇學位論文P 1 6 2 通過抑制C H K l ／2 表達來增加食管癌細胞株E c a l 0 9 放射敏感性的研究T h eR e s e a r c ho fP 1 6 2 I n c r e a s eR a d i o s e n s i t i v i t yo fT h eE s o p h a g e a lC a n c e rC e l lL i n e s E c

2、a l 0 9b y ‘I n h i b i t i n g ’C h k l ／2 E x p r e s s i o n張 紅指導教師姓名：申請學位級別：論文定稿日期：學位授予單位：學位授予日期：吳清明教授答辯委員會主席： 余保平教授評 閱 人：武漢科技大學碩士學位論文 第1 頁摘要目的：細胞周期檢測點激酶l ( C h k l ) 和細胞周期檢測點激酶2 ( C h k 2 ) 是D N A 損傷修復信號轉導通路中非常重要的蛋白

3、激酶。全新多肽P 1 6 2 對食管癌細胞株E c a l 0 9 有明顯的抗癌、放射增敏作用。它是否通過抑制細胞周期檢測點信號轉導通路增加食管癌細胞株的放射敏感性呢? 本文擬檢測它對C h k l 和C h k 2 是否有抑制作用、對細胞周期的影響來進一步了解其放射增敏的機制。方法：1 、誘導抗拒株E c a l 0 9 R 的形成：采用小劑量放射線反復照射E c a l 0 9 細胞株，累計照射劑量達至' J 6 0 G y

4、 ，使其初步具有放射抗拒性；2 、應用M T T 法檢N 2 、4 、6 、8 G y 放射劑量對細胞的生長抑制率，確定最合適的放射劑量；3 、C C K 一8 法檢N 5 、1 0 、2 0 、4 0 、6 0 m g ／L 不同濃度的P 1 6 2 對E c a l 0 9 R 細胞株的生長抑制率，以明確P 1 6 2 最佳實驗濃度；4 、免疫熒光法檢鋇J J C h k l 與C h k 2 在細胞株中的陽性表達；5 、將實驗分為

5、不j J [ I P l 6 2 不照射組、j J [ I P l 6 2 不照射組、不j J [ I P l 6 2 照射組及j J [ I P l 6 2 照射四大組，每組分別包含E c a l 0 9 及E c a l 0 9 R - - 種細胞株；6 、W e s t e r nb l o t 檢測四組細胞株中C h k l 與C h k 2 蛋白表達的動態(tài)變化；7 、流式細胞儀檢測四組細胞株細胞周期的變化。結果：1 、將細胞株

6、未經(jīng)照射組及照射2 、4 、6 、8 G y 組消化鋪板，制成單細胞懸液，以未照射組為對照組，2 、4 、6 、8 G y 為實驗組，分別在2 4 h 、4 8 h 、7 2 h N ' J O D 值，計算細胞的生長抑制率，達到半數(shù)抑制率的劑量為后期實驗的合適劑量。測得在6 G y 的放射劑量時，細胞的生長抑制率在5 0 ％左右，故取6 G y 為后續(xù)實驗的放射劑量。2 、C C K 一8 選取E c a l 0 9 R 的最

7、適的藥物濃度，以5 、1 0 、2 0 、4 0 、6 0 m g ／L 為實驗組，不加藥組為對照組，在2 4 h 、4 8 h 、7 2 h 瀕J J O D 值，計算細胞的生長抑制率，達到半數(shù)抑制率的濃度為后期試驗的藥物濃度。測得P 1 6 2 在2 0 m g ／L 的濃度下，細胞生長抑制率在5 0 ％左右，故后續(xù)試驗的濃度選取2 0 m g ／L ．另外，在實驗過程發(fā)現(xiàn)，隨著P 1 6 2 齊, J 量加大，細胞生長抑制率增加，

8、說明P 1 6 2 對細胞抑制作用與劑量呈正相關。3 、免疫熒光顯示：食管癌E c a l 0 9 及E c a l 0 9 R 細胞株中都存在少量的C h k l 及C h k 2 表達，在細胞核與細胞質(zhì)中均有表達，而且E c a l 0 9 R 細胞株中C h k l 、C h k 2 的平均熒光強度高于E c a l 0 9 細胞株，提示E c a l 0 9 R 中C h k l 、C h k 2 的表達高于E c a l 0