蛋白酶Corin與妊娠期高血壓疾病的研究.pdf

1、妊娠期高血壓疾病嚴重影響母嬰健康，是孕產婦及圍生兒發(fā)病及死亡的主要原因之一。近來研究發(fā)現(xiàn)，抗血管生成因子sFlt-1，sEng的升高，促血管生成因子胎盤生長因子（PlGF）的下降可能參與妊娠期高血壓疾病的形成及進展。我們課題組研究發(fā)現(xiàn)Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白酶Corin在調節(jié)高血壓和心功能方面有非常重要的作用，與高血壓、心肌肥厚及心力衰竭的發(fā)病有關。妊娠期高血壓疾病為高血壓的特殊類型，有研究表明Corin可能在妊娠高血壓發(fā)病中起作用。

2、　　目的：以妊娠期高血壓疾病患者為研究對象，通過檢測育齡女性血漿Corin水平及血管生成因子，分析血漿中可溶性Corin與妊娠期高血壓疾病的關系，并對妊娠期高血壓疾病疾病患者Corin基因進行分析，發(fā)現(xiàn)與疾病相關的基因突變，探討妊娠期高血壓發(fā)病的分子機制，并為妊娠期高血壓疾病的診斷提供新方法。
　　方法：
　　1、應用酶聯(lián)免疫吸附法（EnzymeLinkedImmunosorbentAssay,ELISA）檢測實驗組及對照組

3、共計456人血漿中Corin、sEng、sFlt-1、PlGF、sFlt-1/PlGF水平。
　　2、對子癇前期患者Corin基因進行測序，通過Chromas軟件將測序結果與Corin基因序列NM_006587.2進行比對。根據(jù)檢測到的突變位點，采用定點突變的方法構建突變質粒K317E-Corin。
　　3、將野生型質粒wt-Corin及Corin突變體轉染HEK293細胞及穩(wěn)定表達人pro-ANP重組蛋白的HEK293細胞

4、，收集上清及裂解液,通過Westernblot分析突變體K317E突變對Corin的表達及功能的影響。
　　結果：
　　1、血漿中可溶性Corin水平，妊娠女性顯著高于正常未孕組；妊娠組中，子癇前期組顯著高于正常孕婦（1.31±0.06vs0.95±0.03ng/mL,p<0.001）；單純妊娠期高血壓組及單純蛋白尿組分別為1.07±0.04ng/mL和1.25±0.06ng/mL，單純蛋白尿組顯著高于正常妊娠組（p<0.0

5、01）。
　　2、子癇前期患者組，血漿PlGF值顯著低于正常育齡孕婦組（39.1±9.2vs96.0±10.0pg/mL，p=0.001），血漿sFlt-1值顯著高于正常育齡孕婦組（16.0±1.5vs8.4±0.4ng/mL,p<0.001），sFlt-1/PlGF比率顯著高于正常育齡孕婦組（1352.5±236.0vs261±25.9,p<0.001），血漿sEng值顯著高于正常育齡孕婦組（17.6±0.5vs14.9±0.3

6、ng/mL，p<0.001）。
　　3、對子癇前期患者組Corin基因進行測序分析，發(fā)現(xiàn)其中一患者的第七號外顯子出現(xiàn)改變，致使Corin蛋白317號氨基酸由賴氨酸K變?yōu)楣劝彼酔,即K317E。在其他患者及正常人中未發(fā)現(xiàn)此改變，認定其為基因突變。
　　4、將野生型Corin（wt-Corin）及K317E表達載體轉染HEK293細胞或穩(wěn)定表達人pro-ANP的HEK293細胞，發(fā)現(xiàn)K317E表達量未受明顯影響，但活化pro-A

7、NP為ANP的能力降至wt-Corin的36±6％。
　　結論：
　　1、血漿可溶性Corin在子癇前期患者中顯著升高，提示可作為診斷該病的分子標志。
　　2、在子癇前期患者發(fā)現(xiàn)Corin的基因突變，使第317號氨基酸由賴氨酸K變?yōu)楣劝彼酔（K317E），該突變國內外未見報道，為新發(fā)現(xiàn)的基因突變。
　　3、體外細胞實驗研究顯示，K317E突變影響Corin的活化及對pro-ANP的剪切能力，是妊娠期高血壓疾病的潛