EZH2在卵巢癌細(xì)胞系A(chǔ)2780及LSL K-rasG12D-p53fl-fl轉(zhuǎn)基因小鼠腫瘤形成中的作用研究.pdf

1、卵巢癌(ovarian cancer，OC)是婦科腫瘤中致死率最高的腫瘤，嚴(yán)重威脅婦女的健康和生命。表觀遺傳學(xué)在卵巢癌研究中的進(jìn)展越來(lái)越引起重視。EZH2是一種甲基化酶，屬于PRC復(fù)合物中重要的催化亞基，能夠使組蛋白27位賴氨酸發(fā)生3甲基化，從而發(fā)揮表觀遺傳學(xué)的作用。組蛋白H3的27位賴氨酸(H3K27)的3甲基化能夠誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄抑制，并參與所調(diào)控基因的表達(dá)。文獻(xiàn)報(bào)道，EZH2在乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤組織中表達(dá)異常增高。

2、DZNep是EZH2的抑制劑，因其對(duì)腫瘤潛在的治療作用備受關(guān)注。轉(zhuǎn)基因小鼠是研究腫瘤發(fā)生發(fā)展的良好模型?；蚯贸夹g(shù)為在小鼠體內(nèi)研究某一特定基因的功能提供了可行性。
　　 第一部分:EZH2對(duì)卵巢癌細(xì)胞系A(chǔ)2780增殖、集落形成能力的影響及機(jī)制研究
　　 研究背景:目前，對(duì)卵巢癌生物學(xué)特性、臨床治療方案以及醫(yī)療技術(shù)等方面的研究都獲得了較大進(jìn)展，但卵巢癌的病發(fā)率和病死率依然居高不下。EZH2是一種甲基化酶，屬于PRC復(fù)合物

3、中重要的催化亞基。它使組蛋白H3的27位賴氨酸發(fā)生3甲基化，從而發(fā)揮表觀遺傳學(xué)的作用。多種文獻(xiàn)報(bào)道，EZH2在多種腫瘤組織中有高表達(dá)，例如乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、結(jié)腸癌等。EZH2可能參與到腫瘤的增殖、凋亡、遷移、侵襲、轉(zhuǎn)移等過(guò)程。據(jù)此，EZH2可能會(huì)與卵巢癌細(xì)胞A2780的增殖，集落形成等功能有關(guān)。
　　 目的:通過(guò)shRNA技術(shù)下調(diào)A2780細(xì)胞系EZH2的表達(dá)，研究EZH2對(duì)A2780細(xì)胞系增殖、克隆形成能力的影響，探索

4、EZH2在卵巢癌發(fā)生過(guò)程中的作用。
　　 方法:慢病毒感染方法構(gòu)建穩(wěn)定下調(diào)EZH2的A2780細(xì)胞系;MTT檢測(cè)穩(wěn)定下調(diào)EZH2的A2780細(xì)胞系A(chǔ)2780-shEZH2增殖情況;集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)A2780-shEZH2的克隆形成能力;實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測(cè)A2780-shEZH2細(xì)胞系中，EZH2、相關(guān)抑癌癥基因CDKN2A、DAB2IP的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:(1) A2780-shEZH2穩(wěn)定細(xì)胞系的構(gòu)建及鑒定:

5、構(gòu)建穩(wěn)定A2780-shEZH2細(xì)胞系A(chǔ)2780shEZH2-1和A2780shEZH2-2，并有效沉默EZH2的表達(dá)。(2) MTT檢測(cè)A2780-shEZH2穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞的增殖:MTT檢測(cè)顯示A2780shEZH2-1和A2780shEZH2-2在24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)的抑制率分別是72.9±4.13％和64.9±3.26％、49.9±3.37％和49±4.05％、56.1±2.18％和57.9±2.17％。與對(duì)照組相比，差異具有

6、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(3)克隆形成能力的研究:A2780shEZH2-1和A2780shEZH2-2兩組卵巢癌細(xì)胞的克隆形成能力明顯下降(P＜0.05）。轉(zhuǎn)染對(duì)照組、A2780shEZH2-1和A2780shEZH2-2的克隆形成率分別是為9.8±0.07％，2.0±0.02％和1.9±0.03％。(4)實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測(cè):A2780shEZH2-1和A2780shEZH2-2中EZH2、CDKN2A、DAB2IP mRNA

7、分別是對(duì)照組的62.8±8.12％和65.3±5.31％，230±4.31％和237±4.42％，269±7.62％和297±6.52％。A2780shEZH2-1和A2780shEZH2-2中CDKN2A和DAB2IP的mRNA明顯上調(diào)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）。
　　 結(jié)論:(1)構(gòu)建穩(wěn)定下調(diào)EZH2的A2780-shEZH2細(xì)胞系，可作為良好的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，深入研究EZH2表達(dá)調(diào)控與卵巢癌生物學(xué)功能的關(guān)系。(2)長(zhǎng)效