miR-370在小鼠發(fā)育階段功能初探.pdf

1、MicroRNA是非編碼RNA的重要家族成員之一，廣泛存在于動(dòng)植物中，大小約為22個(gè)堿基，是一類在進(jìn)化上高度保守的內(nèi)源性的小分子RNA。本課題所研究的miR-370位于位于小鼠12號(hào)染色體(12qF1)，對(duì)應(yīng)人14號(hào)染色體(14q32)。miR-370的成熟體包含20個(gè)核苷酸，位于Dlk1-Dio3印記基因簇的Gtl2下游。miR-370在胚胎中特異性表達(dá)，對(duì)miR-370的異常表達(dá)進(jìn)行深入研究，對(duì)小鼠胚胎發(fā)育、個(gè)體生長(zhǎng)、疾病發(fā)生調(diào)控生

2、命活動(dòng)具有重要意義。
　　為了闡明miR-370對(duì)小鼠發(fā)育的影響，本課題通過(guò)建立過(guò)表達(dá)miR-370轉(zhuǎn)基因小鼠模型，以野生型FVB鼠和轉(zhuǎn)基因鼠的胚胎和成年小鼠為研究對(duì)象，利用實(shí)時(shí)定量PCR、蘇木精-伊紅染色和亞硫酸鹽測(cè)序等方法，檢測(cè)野生鼠和轉(zhuǎn)基因鼠胚胎和成鼠中miR-370的表達(dá)情況、組織形態(tài)變化和DNA甲基化水平，并觀察雄性小鼠的精子活力和雌性小鼠的動(dòng)情周期，以此分析miR-370過(guò)表達(dá)對(duì)小鼠各個(gè)組織尤其是生殖腺的影響和對(duì)小鼠胚

3、胎發(fā)育及性成熟后發(fā)育的影響。
　　形態(tài)學(xué)觀察顯示miR-370轉(zhuǎn)基因小鼠每胎產(chǎn)子數(shù)降低，異常死亡情況增多，雌雄比例異常。雄鼠在胚期18.5天和出生后體重均有所增加。實(shí)時(shí)定量RT-PCR結(jié)果表明相對(duì)野生型小鼠，miR-370在轉(zhuǎn)基因鼠各組織中表達(dá)水平均有所上升。HE染色結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因鼠胚期肺臟出現(xiàn)大量瘀血。腎臟皮質(zhì)發(fā)育尚可，髓質(zhì)部分發(fā)育不完全，皮髓交界處不清晰。胎盤三層界限不清晰，成膠質(zhì)細(xì)胞層和蛻膜層明顯減少，血竇擴(kuò)張，存在淤血。成

4、體轉(zhuǎn)基因鼠肺臟間質(zhì)大量出血，肺泡斷裂融合，瘀血嚴(yán)重，局部出現(xiàn)實(shí)變。腎臟大量瘀血，血管擴(kuò)張，腎小球內(nèi)出血。精巢中曲細(xì)精管的間隙增大，出現(xiàn)曲細(xì)精管萎縮和生精細(xì)胞減少現(xiàn)象，并伴隨精子活力降低，畸形率升高，質(zhì)膜完整率下降的情況。卵巢顆粒細(xì)胞層減少，卵泡內(nèi)卵母細(xì)胞放射冠消失，顆粒細(xì)胞排列疏松，間隙增寬，核固縮以及卵泡囊性擴(kuò)張，同時(shí)動(dòng)情周期出現(xiàn)紊亂。
　　綜合以上結(jié)果可知，miR-370過(guò)表達(dá)對(duì)小鼠胚胎、胎盤和成體各組織的發(fā)育均產(chǎn)生影響，為進(jìn)