烏骨藤提取物C21甾體對人胃癌BGC-823裸鼠移植瘤的作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　探討天然植物烏骨藤的主要活性成分—烏骨藤提取物C21甾體對人胃癌細(xì)胞株BGC-823裸鼠皮下移植瘤的抗腫瘤作用及其機(jī)制，為研制低毒、耐藥、高效的抗胃癌藥物，提供理論依據(jù)、指導(dǎo)方法以及實(shí)驗(yàn)材料。
　　方法：
　　建立人胃癌細(xì)胞株BGC-823裸鼠皮下移植瘤模型進(jìn)行體內(nèi)動物實(shí)驗(yàn)，釆用隨機(jī)數(shù)字法隨機(jī)（相同窩別、相同性別、相同周齡、體重18-22g）分為：
　　A：陰性對照組（無菌生理鹽水）；
　　B：

2、烏骨藤C21甾體低劑量治療組（5 mg/kg）；
　　C：烏骨藤C21甾體高劑量治療組（15 mg/kg）；
　　D：5-Fu治療組（20mg/kg）；每組各8只，每日1次，每次0.4ml，采取瘤周皮下注射，共給藥10天，每日稱鼠體重量，測量腫瘤體積，末次給藥后次日頸椎脫臼處死荷瘤鼠，完整分離瘤體，將腫瘤組織用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　包括：
　　①稱量瘤重及測量體積，計算烏骨藤提取物C21甾體的抑瘤率；
　?、贖

3、E染色光鏡形態(tài)學(xué)觀察；
　　③免疫組化方法檢測VEGF、YAP、Bcl-2、Bax的表達(dá)，并分析它們在抗腫瘤作用的信號通路上對相關(guān)蛋白調(diào)控靶點(diǎn)的作用；
　?、躓estern Blot檢測烏骨藤C21甾體誘導(dǎo)胃癌腫瘤組織Hippo-YAP和PTEN-AKT-mTOR信號通路的變化。
　　結(jié)果：
　　①烏骨藤C21甾體對腫瘤組織具有明顯的抑制作用，低劑量組、高劑量組的抑瘤率分別為14.24％和30.70%，與生理鹽水

4、組對比具有顯著的差異（ P＜0.05），且各組濃度之間，隨著藥物濃度的增加，抑瘤率顯著增高（P＜0.05）。
　?、诠忡R顯示下，烏骨藤C21甾體組腫瘤細(xì)胞顯現(xiàn)出不同程度的退行性變，核固縮、深染，單個細(xì)胞死亡及局灶性壞死。
　?、巯啾汝幮詫φ战M（生理鹽水），烏骨藤C21甾體治療組分別作用10天后，Bax主要位于胞漿中，并且在胃癌中的表達(dá)水平，比對照組瘤組織中的表達(dá)顯著上調(diào)，VEGF、Bcl-2主要位于胞漿中，并且在胃癌中的表達(dá)

5、水平，比對照組瘤組織中的表達(dá)顯著下調(diào)，而YAP的表達(dá)在治療組中也顯著下調(diào)。
　?、芤浦擦鑫赴┲蠵I3K-AKT-mTOR信號通路的AKT磷酸化水平較對照組降低。Hippo-YAP信號通路中，p-YAP與對照組相比，顯著上調(diào)。
　　結(jié)論：
　　我們的體外移植瘤研究表明：烏骨藤C21甾體能夠顯著抑制腫瘤細(xì)胞增殖，具有較顯著的抗腫瘤作用。其中烏骨藤C21甾體是烏骨藤的有效活性成分，其作用可能是通過上調(diào)Bax、p-YAP及下調(diào)