輪枝鐮刀菌過(guò)氧化物酶體PEX5基因功能研究.pdf

1、輪枝鐮刀菌(Fusarium verticillioides)是一種重要的經(jīng)濟(jì)作物病原真菌，能引起玉米穗腐病等，從而導(dǎo)致農(nóng)作物減產(chǎn)，輪枝鐮刀菌在致病過(guò)程中所生成的伏馬毒素(Fumonisins, FBs)，具有很強(qiáng)的致癌作用，嚴(yán)重威脅著農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)的發(fā)展和人類的安全。
　　本文通過(guò)生物信息學(xué)分析比對(duì)，預(yù)測(cè)在F. verticillioides過(guò)氧化物酶體代謝途徑中起著關(guān)鍵作用的FvPex5基因的功能。采用同源重組技術(shù)獲取FvPex

2、5基因缺失菌株△Fvpex5，再結(jié)合各方面的表型鑒定分析輪枝鐮刀菌 FvPex5的基因功能。
　　表型分析表明：FvPex5基因缺失突變菌株氣生菌絲減少，生長(zhǎng)速率下降，孢子產(chǎn)量下降，在孢子形態(tài)上，△Fvpex5與Fv7600無(wú)明顯差別。滲透壓脅迫結(jié)果表明，與野生型菌株Fv7600相比，△Fvpex5對(duì)氯化鈉的滲透壓敏感性增強(qiáng)。細(xì)胞抑制劑結(jié)果表明，△Fvpex5對(duì)過(guò)氧化氫(0.05％)、熒光增白劑卡弗魯爾白(0.3 mg/L)以及剛

3、果紅(0.3 mg/L)的敏感性增強(qiáng)，熒光增白劑染色表明孢子的隔膜受到影響，對(duì)十二烷基硫酸鈉(0.01%)敏感性下降，生存能力顯著降低，相對(duì)生長(zhǎng)速率提高。與氧化物酶體的標(biāo)識(shí)基因共定位檢測(cè)顯示，在Fv7600中，pex5經(jīng)綠色融合熒光互補(bǔ)定位呈點(diǎn)狀分布，在△Fvpex5中曾彌散分布，表明FvPex5基因缺失影響了基質(zhì)蛋白輸入的PTS1信號(hào)途徑。在次生代謝物影響方面：△Fvpex5色素含量降低，F(xiàn)B1毒素產(chǎn)量大幅度下降，而且部分毒素基因的表