氰戊菊酯致基睪因丸表間達質(zhì)節(jié)細律胞的睪改酮變合成和相關(guān).pdf

1、目的：觀察氰戊菊酯對睪丸間質(zhì)細胞睪酮合成和相關(guān)基因表達節(jié)律的改變，為探討氰戊菊酯對生殖功能損害的機制提供基礎(chǔ)資料。
　　方法：(1)采用體外培養(yǎng)的小鼠睪丸間質(zhì)細胞株（TM3），用ELISA法測定睪酮濃度，CCK8法測定細胞活力，流式細胞儀檢測細胞周期的變化。（2）采用熒光定量 PCR法檢測鐘基因與睪酮合成相關(guān)基因的表達。(3)氰戊菊酯作用24h后，不同時間點（0：00、4：00、8：00、12：00、16：00、20：00、24:

2、00）收集細胞，熒光定量PCR法檢測鐘基因與睪酮合成相關(guān)基因Bmal1、RORa、REV-erbα、StAR的節(jié)律性表達。（4）流式細胞儀檢測細胞內(nèi)[Ca2+]i的濃度。
　　結(jié)果：（1）小鼠睪丸間質(zhì)細胞株（TM3）的生長倍增時間為22.53±2.84h。氰戊菊酯可顯著抑制睪酮的合成，使睪酮濃度降低了37％。（2）在Leydig細胞中，鐘基因Bmal1與睪酮合成相關(guān)基因StAR的mRNA表達有晝夜節(jié)律性，Bmal1的峰值和谷值分別

3、出現(xiàn)在16：00和4：00，而StAR的峰值和谷值則出現(xiàn)在12：00和4：00。氰戊菊酯處理后，REV-erbα表達水平升高，峰值位相后移，Bmal1，RORa和StAR的表達水平降低，節(jié)律均發(fā)生改變。（3）氰戊菊酯作用后，細胞內(nèi)[Ca2+]i增加了9.67%。
　　結(jié)論：
　　1.氰戊菊酯染毒可抑制睪酮的分泌，改變鐘基因的節(jié)律性表達。
　　2.氰戊菊酯對睪酮影響的晝夜時間差異可能與增加細胞內(nèi)[Ca2+]i離子的濃度有