荷花LFY、AP1基因片段的克隆與分析.pdf

1、本研究以碗蓮品種‘紅霞滿天’為材料，采用RT-PCR方法，克隆出LFY基因和AP1基因的片段。為今后獲得LFY基因和AP1基因的全長(zhǎng)以及了解荷花的成花分子機(jī)理和花期調(diào)控奠定了必要的基礎(chǔ)。研究結(jié)果如下：
　　 (1)建立了較為完善的荷花樣品總RNA提取和純化方法。通過(guò)比較改良Trizo1、CTAB-LiC1法、改良CTAB-LiCl法三種RNA提取方法，總結(jié)出適合荷花樣品RNA提取的方法-改良CTAB法。并通過(guò)此方法獲得了較為純凈

2、的、完整的總RNA，可以直接用于后續(xù)的RT-PCR反應(yīng)。
　　 (2)采用RT-PCR技術(shù)克隆了荷花LFY基因cDNA片段。克隆得到的LFY基因片段長(zhǎng)為431bp，編碼143個(gè)氨基酸。序列分析結(jié)果表明，該片段推導(dǎo)的氨基酸序列與紅葉藜、蘋果、葡萄、煙草、矮牽牛、甘菊等植物的氨基酸序列一致性分別為95％、95%、94%、94%、94%、93%。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明，荷花與蘋果和枇杷親緣關(guān)系最近。
　　 (3)采用RT-PCR技

3、術(shù)克隆了荷花2個(gè)AP1基因cDNA片段，分別命名為NeAP1-1和NeAP1-2。NeAP1-1和NeAP1-2基因片段核苷酸長(zhǎng)度均為216bp，編碼72個(gè)氨基酸。運(yùn)用DNAMAN軟件，對(duì)NeAP1-1和NeAP1-2的核苷酸和氨基酸序列進(jìn)行分析，其同源性分別為89.35%和88.89%。序列分析結(jié)果表明，NeAP1-1和NeAP1-2的氨基酸序列與其它植物的AP1氨基酸序列同源性均在62%以上。系統(tǒng)進(jìn)化樹分析表明，荷花與白屈菜的親緣關(guān)