應(yīng)用RP-HPLC技術(shù)對昆蟲細胞-桿狀病毒表達人生長激素的純化和性質(zhì)鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該實驗運用離子交換色譜,疏水相互作用色譜和反相高效液相色譜對昆蟲細胞桿狀病毒表達系統(tǒng)(Sf9-AcNPV)表達的重組人生長激素(recombinant human Growth Hormone,rhGH)進行了純化.含有rhGH的昆蟲細胞培養(yǎng)液經(jīng)離心超濾濃縮后,以離了交換色譜(CM-52)和疏水相互作用色譜(Phenyl-Sepharose CL-4B)粗提純,有效的去除了雜蛋白,并使rhGH大大濃縮富集.RP-HPLC中,采用Krom

2、asil C18色譜柱,正丙醇-磷酸鉀緩沖液梯度洗脫系統(tǒng),在35.5﹪正丙醇梯度下,得到有效分離的rhGH.借鑒國外最新報道的累加進樣分離法,在分析型RP-HPLC儀上,得到高純度的rhGH.經(jīng)酶聯(lián)免疫分析,放射免疫分析,和Western雜交法分析,證明純化的rhGH與天然的人生激素有相同的免疫活性;經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳測定其分子量為21,500道爾頓;等電點聚焦法測定其等電點為4.9;經(jīng)丹磺酰氯法測定其N-末端為苯丙氨酸(Phe

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