維生素C、E和裂壺藻對(duì)中國(guó)對(duì)蝦非特異性免疫功能影響的研究.pdf

1、維生素C和維生素E是兩種在維持水產(chǎn)動(dòng)物健康養(yǎng)殖中應(yīng)用較廣的免疫增強(qiáng)劑，裂壺藻是一種富含不飽和脂肪酸的海洋真菌，本文通過(guò)結(jié)合免疫應(yīng)答信號(hào)通路的相關(guān)基因的研究，探索兩種維生素在機(jī)體中的免疫途徑，初步研究裂壺藻與維牛素E的免疫互作效應(yīng)，為其免疫機(jī)制研究提供新的思路。本文以中國(guó)對(duì)蝦為研究對(duì)象，在不同水平上研究了維生素C、維生素E和裂壺藻對(duì)中國(guó)對(duì)蝦非特異免疫因子及TLR、NF-KB表達(dá)水平的影響。研究分為兩部分：
　　 第一部分是以中國(guó)對(duì)

2、蝦為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，對(duì)其投喂分別添加不同Vc含量(0％、0.5％、1％、2％)的飼料，在試驗(yàn)的第1、3、6、9、12和15天進(jìn)行取樣，以存活率、誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)、溶菌酶(LZM)為免疫指標(biāo)，探討了不同濃度的Vc對(duì)中國(guó)對(duì)蝦存活率及非特異性免疫效應(yīng)的影響；并應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR方法研究了不同濃度的Vc對(duì)中同對(duì)蝦TLR、NF-KB基因表達(dá)的影響。結(jié)果表明，(1)與對(duì)照組相比，Vc添

3、加組增強(qiáng)了中國(guó)對(duì)蝦的存活率，Vc1％添加組存活率達(dá)90.28％，顯著高于其他組(P<0.05)。Vc的不同處理組在一定程度上提高了中國(guó)對(duì)蝦iNOS、CAT、及LZM活性且1％含量Vc組對(duì)酶活性的增強(qiáng)影響較大。Vc對(duì)中國(guó)對(duì)蝦T-SOD活性的提高具有一定的作用，2％濃度組對(duì)肝胰腺、鰓、肌肉T-SOD活性影響較大，1％濃度組對(duì)血清中T-SOD活性影響較大(2)實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果表明，Vc可以上調(diào)TLR在血液和鰓中TLR的表達(dá)水平。血液中1％濃

4、度組對(duì)TLR的表達(dá)水平的上調(diào)作用最大，其次為0.5％濃度組。鰓中Ve對(duì)TLR的上調(diào)作用具有一定的濃度效應(yīng)，即表達(dá)水平2％濃度組>1％濃度組>0.5％濃度組。在肝胰腺中Vc對(duì)0.5％、1％濃度組TLR的表達(dá)水平起到抑制作用，而對(duì)2％濃度組TLR則是先抑制后上調(diào)，在第十二天表達(dá)量達(dá)到最大值，為對(duì)照組的6.87倍。肌肉中Vc對(duì)2％濃度組TLRmRNA表達(dá)具有下調(diào)作用，對(duì)0.5％、1％濃度組TLR的表達(dá)呈現(xiàn)出先抑制后促進(jìn)的狀況。TLR、NF-K

5、B在組織中的表達(dá)趨勢(shì)并不一致，0.5％、2％濃度組在四種組織中均表現(xiàn)出下調(diào)作用。1％濃度組在血液、肌肉中對(duì)NF-KB的調(diào)節(jié)作用相同，與各自對(duì)照組相比均可以上調(diào)NF-KB的表達(dá)水平。而在鰓、肝胰腺中1％濃度Vc所起到的作用與血液和肌肉相反。
　　 第二部分是以中國(guó)對(duì)蝦為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在基礎(chǔ)飼料中添加不同含量的Ve和10‰裂壺藻，配制成五種試驗(yàn)飼料，即B組(10‰裂壺藻)、C組(200mg/kgVe)、D組(400mg/kgVe)、E組

6、(600mg/kgVe)、F組(400mg/kgVe+10‰裂壺藻)，以基礎(chǔ)飼料為A組(空白對(duì)照飼料)。進(jìn)行為期1個(gè)月的飼養(yǎng)。在試驗(yàn)第1、15、30天進(jìn)行體重、體長(zhǎng)測(cè)量，檢測(cè)Ve對(duì)中國(guó)對(duì)蝦生長(zhǎng)指標(biāo)的影響。記錄每日對(duì)蝦死亡數(shù)，統(tǒng)計(jì)存活率。并以組織中的誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)、丙二醛(MDA)、總超氧化物歧化酶(T-SOD)、溶菌酶(LZM)、谷胱甘肽酶(GSH)為免疫指標(biāo)，探討了不同濃度的Ve對(duì)中國(guó)對(duì)蝦存活率及非特異性免疫效應(yīng)的影

7、響，應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR方法研究了不同濃度的Ve對(duì)中國(guó)對(duì)蝦TLR、NF-KB基因表達(dá)的影響。結(jié)果表明，(1)Ve可以促進(jìn)中國(guó)對(duì)蝦體重、體長(zhǎng)的增長(zhǎng)。D組生長(zhǎng)指標(biāo)增長(zhǎng)高于C、E組，但顯著低于添加了裂壺藻的F組。存活率隨著Ve添加濃度的增加而增大，E、F組顯著高于其他各組。說(shuō)明Ve對(duì)中國(guó)對(duì)蝦的生長(zhǎng)及存活率的提高有著顯著的作用。添加裂壺藻也對(duì)生長(zhǎng)和存活率的提高起到促進(jìn)作用。通過(guò)對(duì)中國(guó)對(duì)蝦非特異性酶活的檢測(cè)，結(jié)果表明，與空白對(duì)照紐相比，Ve抑制了M

8、DA活性、肌肉中iNOS活性。對(duì)于其他非特異酶均表現(xiàn)出不同程度的促進(jìn)作用。裂壺藻添加組B組與A組相比較非特異性酶活性無(wú)顯著性差異，但與F組表現(xiàn)出顯著性差異(P<0.05)，即F組酶活性顯著高于B組。(2)應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR方法研究了不同濃度的Ve對(duì)中國(guó)對(duì)蝦血液、肌肉及肝胰腺中TLR、NF-KB基因表達(dá)的影響。結(jié)果表明，Ve可以下調(diào)血液、肝胰腺和肌肉中的TLR表達(dá)水平，并具有一定的濃度效應(yīng)；中濃度Ve對(duì)三個(gè)組織NF-KB基因的表達(dá)均起到抑