泛素E3連接酶在DNA損傷修復(fù)途徑里的大規(guī)模篩選及其功能研究.pdf

1、細(xì)胞基因組時(shí)刻遭受著來(lái)自內(nèi)外因素的損傷威脅，如果這些損傷無(wú)法得到及時(shí)、準(zhǔn)確的修復(fù)，將會(huì)導(dǎo)致基因組的不穩(wěn)定，甚至是細(xì)胞死亡與腫瘤發(fā)生。
　　為了應(yīng)對(duì)各種不同的DNA損傷，機(jī)體演化出了一系列精細(xì)的應(yīng)對(duì)機(jī)制，包括細(xì)胞周期阻遏、損傷修復(fù)，以及其他細(xì)胞信號(hào)通路。參與這一系列應(yīng)對(duì)機(jī)制的蛋白功能的發(fā)揮往往依賴于蛋白翻譯后修飾信號(hào)的調(diào)控，如磷酸化、乙?；?、甲基化、泛素化、蘇素化等。泛素化修飾是很多參與DNA損傷修復(fù)蛋白發(fā)揮功能的重要調(diào)控手段之一。

2、蛋白泛素化修飾信號(hào)通過(guò)E1激活酶、E2結(jié)合酶和E3連接酶的信號(hào)傳遞和層疊而完成。
　　目前在人類中，已有大約500余種的泛素連接酶被定義。為了發(fā)現(xiàn)更多未知的蛋白，我們克隆了300余種E3連接酶的cDNA。以53BP1在電離輻射損傷誘導(dǎo)下的foci作為檢測(cè)標(biāo)志物，利用免疫熒光實(shí)驗(yàn)手段，篩選可能影響53BP1招募的E3連接酶。在此次篩選中，我們找到了許多已經(jīng)報(bào)道的參與到DNA損傷修復(fù)通路的E3連接酶（如RNF4、RNF8、RNF168