轉(zhuǎn)基因果蠅系的建立及其重組蛋白PCL的表達(dá)和分析.pdf

1、目的： 利用模式生物果蠅表達(dá)PCL重組蛋白復(fù)合物，檢測(cè)、純化所表達(dá)的PCL蛋白，為研究PCL蛋白復(fù)合物的生物學(xué)活性及其在胚胎不同發(fā)育時(shí)期的作用提供依據(jù)。 方法： PCL基因經(jīng)PCR擴(kuò)增后，重組到pCaS83 HHF_PresCT載體，構(gòu)建pCaS83 PCL_c表達(dá)載體。經(jīng)顯微注射果蠅胚胎，該表達(dá)載體整合于果蠅生殖細(xì)胞的基因組上，并建立PCL轉(zhuǎn)基因果蠅系。 我們利用轉(zhuǎn)基因果蠅系表達(dá)PCL蛋白，并進(jìn)行多線染

2、色體的免疫組化分析，檢測(cè)PCL蛋白的表達(dá)。應(yīng)用免疫沉淀法對(duì)PCL蛋白進(jìn)行純化，并分析其生物學(xué)功能。 結(jié)果： 建立了表達(dá)重組PCL蛋白復(fù)合物的轉(zhuǎn)基因果蠅系。盡管不同轉(zhuǎn)基因果蠅系的PCL蛋白表達(dá)水平并不相同，但所表達(dá)的重組PCL蛋白與內(nèi)源性蛋白具有相似的分布特征，并能部分代償缺陷型PCL蛋白的功能。因?yàn)镻CL重組蛋白復(fù)合物的C-末端帶有HA-8xHis-FLAG標(biāo)記，所以可以利用抗FLAG抗體純化轉(zhuǎn)基因果蠅系不同發(fā)育時(shí)期的P