聚多曲霉DL1045表觀遺傳調(diào)控產(chǎn)物對(duì)腫瘤耐受的解除作用.pdf

1、缺氧缺營(yíng)養(yǎng)是腫瘤微環(huán)境的重要特征，肝癌、結(jié)腸癌等多種腫瘤均存在長(zhǎng)期缺氧缺營(yíng)養(yǎng)區(qū)域，該類腫瘤細(xì)胞均具有耐受缺氧缺營(yíng)養(yǎng)的能力，而人正常細(xì)胞并不能生存于這種嚴(yán)苛環(huán)境，所以如果藥物能夠選擇性地解除腫瘤細(xì)胞對(duì)缺氧、缺營(yíng)養(yǎng)的微環(huán)境的耐受，將有望成為新型的抗腫瘤藥物，被稱為解除腫瘤細(xì)胞耐受策略，也有學(xué)者稱之為anti-austerity。
　　真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物在人類抵抗感染性疾病、癌癥等重大疾病過(guò)程中發(fā)揮重要作用，長(zhǎng)久以來(lái)一直是新型治療藥物或先

2、導(dǎo)藥物的持續(xù)來(lái)源。常規(guī)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)條件下真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物合成基因簇通常是“沉默”的，表觀遺傳修飾水平的改變?cè)谶@些基因簇調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用，小分子表觀遺傳調(diào)控劑能通過(guò)表觀遺傳修飾調(diào)控開(kāi)發(fā)“沉默”次級(jí)代謝產(chǎn)物，擴(kuò)大藥物篩選的基礎(chǔ)。本論文基于解除腫瘤細(xì)胞耐受策略建立了活性評(píng)價(jià)體系，基于表觀遺傳調(diào)控策略擴(kuò)大篩選基礎(chǔ)，最終篩選得到能夠解除腫瘤細(xì)胞耐受的化合物，具體內(nèi)容如下:
　　本研究基于解除腫瘤細(xì)胞耐受策略，從多株腫瘤細(xì)胞篩選出在低氧低營(yíng)養(yǎng)

3、條件下能長(zhǎng)期生存的肝癌HepG-2細(xì)胞株和結(jié)腸癌DLD-1細(xì)胞株，構(gòu)建了腫瘤微環(huán)境下細(xì)胞培養(yǎng)模型。經(jīng)過(guò)優(yōu)化，確定MTT法作為腫瘤微環(huán)境下細(xì)胞活力的檢測(cè)方法，確定接入細(xì)胞數(shù)目為96孔板中2×104個(gè)/孔，載藥溶劑DMSO濃度為1％，判定腫瘤微環(huán)境中細(xì)胞抑制率高于正常環(huán)境中40％的物質(zhì)具有解除腫瘤細(xì)胞耐受活性。
　　其次，基于表觀遺傳調(diào)控策略，使用辛二酰苯胺異羥肟酸(SAHA)和5-氮雜胞苷(5-AC)為調(diào)控劑，通過(guò)形態(tài)篩選和HPLC

4、-UV化學(xué)篩選對(duì)21株真菌進(jìn)行了篩選，對(duì)DL1045和DL1049這兩株代謝產(chǎn)物譜明顯改變的真菌進(jìn)行了調(diào)控方法的優(yōu)化，確定DL1045化學(xué)多樣性增幅最大的條件為PDA培養(yǎng)基中250μM SAHA培養(yǎng)10d，大米固體培養(yǎng)基中250μM SAHA培養(yǎng)8d，在兩種條件下分別能產(chǎn)生15個(gè)和5個(gè)新代謝產(chǎn)物峰。而DL1049經(jīng)過(guò)優(yōu)化后，未見(jiàn)新代謝產(chǎn)物產(chǎn)生。
　　在以上工作基礎(chǔ)上，對(duì)真菌代謝產(chǎn)物粗提物進(jìn)行了解除腫瘤細(xì)胞耐受的活性篩選，結(jié)果顯示D

5、L1045在大米固體培養(yǎng)基中的調(diào)控粗提物具有腫瘤微環(huán)境下的HepG-2細(xì)胞毒性。對(duì)其進(jìn)行分離純化得到3個(gè)混合物和8個(gè)純化合物，其中混合物H2～H3、化合物2～4為SAHA調(diào)控產(chǎn)生的新代謝產(chǎn)物。對(duì)代謝產(chǎn)物進(jìn)行活性評(píng)價(jià)后，結(jié)果顯示化合物4和混合物H2具有解除腫瘤細(xì)胞耐受活性，其余均具無(wú)選擇性的HepG-2細(xì)胞毒性。此外，使用腫瘤微環(huán)境模型篩選了574個(gè)天然純化合物，發(fā)現(xiàn)2個(gè)陽(yáng)性化合物，陽(yáng)性率為0.35％;化合物10-10和14-8在腫瘤微環(huán)