絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥中藥用藥規(guī)律及仙茅苷促成骨機(jī)制探討.pdf

1、目的:
　　1.研究臨床上治療絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥的中藥內(nèi)服用藥規(guī)律。
　　2.探討仙茅苷的促成骨作用機(jī)制。
　　方法:
　　1.以納入標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)作為篩選準(zhǔn)則，將所符合的中醫(yī)內(nèi)服藥治療絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松癥的臨床文獻(xiàn)進(jìn)行整理，將整理好的中藥數(shù)據(jù)輸入ECXEL2010軟件中。每一篇文獻(xiàn)為一條記錄，分別錄入文獻(xiàn)的來(lái)源出處、第一作者以及列舉出每首中藥復(fù)方里的單味藥藥名和用藥劑量，劑量單位統(tǒng)一為克。根據(jù)衛(wèi)生部“十二五”

2、規(guī)范教材《中藥學(xué)》及2010年出版的《中華人民共和國(guó)藥典》將藥材名規(guī)范化，統(tǒng)一規(guī)范所建立的中藥數(shù)據(jù)庫(kù)中的中藥名稱(chēng)。將上述篩選后的方劑錄入ECXEL2010建立一個(gè)新的中藥數(shù)據(jù)庫(kù)，采用頻數(shù)分析方法，計(jì)算每味藥物的使用頻次和藥物的種類(lèi)。對(duì)文獻(xiàn)中使用頻次包括10次或10次以上的藥物，根據(jù)藥物主要功效進(jìn)行聚類(lèi)分析。
　　2.首先復(fù)蘇UMR106細(xì)胞，培養(yǎng)于含雙抗及10％胎牛血清的培養(yǎng)基中，置于37℃、5％C02的恒溫箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)

3、狀況約2-3天換液一次;將生長(zhǎng)于對(duì)數(shù)期的細(xì)胞接種到96孔板中，使用MTT法繪制細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線;鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，茜素紅染色對(duì)細(xì)胞進(jìn)行礦化鑒定;將對(duì)數(shù)期的細(xì)胞分別培養(yǎng)，分為7組:空白對(duì)照組、雌激素組、高劑量仙茅苷組、低劑量仙茅苷組、雌激素+抑制劑組、高劑量仙茅苷+抑制劑組、低劑量仙茅昔+抑制劑組;將每組相對(duì)應(yīng)的藥物干預(yù)細(xì)胞，記錄細(xì)胞增殖情況;分別檢測(cè)藥物干預(yù)后24h、48h、72h的ALP的活性，干預(yù)后4天和8天BGP的濃度;將對(duì)數(shù)期的細(xì)

4、胞分別培養(yǎng)，分為四組:空白對(duì)照組、雌二醇組、低劑量仙茅苷組、高劑量仙茅苷組，westernblot分別檢測(cè)藥物干預(yù)后UMR106細(xì)胞ERα和ERβ蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.數(shù)據(jù)挖掘研究:提取數(shù)據(jù)中共13個(gè)類(lèi)別，138味中藥，使用頻次共1773次;其中使用頻數(shù)大于等于10次的藥物有8個(gè)類(lèi)別，41味中藥，使用頻次共1521次。常用藥物種類(lèi)為補(bǔ)益類(lèi)中藥，其中一線藥物主要為補(bǔ)腎藥物，且以補(bǔ)腎陽(yáng)藥物為主。此外，其他一線藥物還具

5、有培補(bǔ)肝腎、養(yǎng)陰益髓、健脾益氣、活血化瘀的功效。二線藥物除補(bǔ)益類(lèi)藥物外，還有祛風(fēng)濕強(qiáng)筋骨、補(bǔ)腎健脾、清熱活血、安神、解表等功效。仙茅為一線用藥，功效為溫腎壯陽(yáng)，培補(bǔ)肝腎。
　　2.基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究:①24h、48h、72h細(xì)胞增殖結(jié)果:與空白對(duì)照組比較，雌激素組、高劑量仙茅苷組與低劑量仙茅苷組的細(xì)胞增殖均顯著增高(P＜0.01)，雌激素+抑制劑組、高劑量仙茅苷+抑制劑組、低劑量仙茅苷+抑制劑組的細(xì)胞增殖無(wú)顯著差異(P＞0.05)。與雌

6、激素組比較，高劑量仙茅苷組的細(xì)胞增殖顯著增高(P＜0.01)，低劑量仙茅苷組的細(xì)胞增殖無(wú)顯著差異(P＞0.05)，雌激素+抑制劑組的細(xì)胞增殖顯著降低(P＜0.01)。與高劑量仙茅苷組相比，低劑量仙茅苷組和高劑量仙茅苷+抑制劑組的細(xì)胞增殖顯著降低(P＜0.01)。與低劑量仙茅苷組比較，低劑量仙茅苷+抑制劑組的細(xì)胞增殖顯著降低(P＜0.01)。與雌激素+抑制劑組比較，高劑量仙茅苷+抑制劑組、低劑量仙茅苷+抑制劑組的細(xì)胞增殖無(wú)顯著差異(P＞0

7、.05)。與高劑量仙茅苷+抑制劑組比較，低劑量仙茅苷+抑制劑組的增殖無(wú)顯著差異(P＞0.05)。②24h、48h、72h ALP活性結(jié)果:與空白對(duì)照組比較，雌激素組、高劑量仙茅苷組與低劑量仙茅苷組的ALP活性均顯著增高(P＜0.01)，雌激素+抑制劑組、高劑量仙茅苷+抑制劑組、低劑量仙茅苷+抑制劑組的ALP活性無(wú)顯著差異(P＞0.05)。與雌激素組比較，高劑量仙茅苷組的ALP活性顯著增高(P＜0.01)，低劑量仙茅苷組的ALP活性無(wú)顯著

8、差異(P＞0.05)，雌激素+抑制劑組的ALP活性顯著降低(P＜0.01)。與高劑量仙茅苷組相比，低劑量仙茅苷組和高劑量仙茅苷+抑制劑組的ALP活性顯著降低(P＜0.01)。與低劑量仙茅苷組比較，低劑量仙茅苷+抑制劑組的ALP活性顯著降低(P＜0.01)。與雌激素+抑制劑組比較，高劑量仙茅苷+抑制劑組、低劑量仙茅苷+抑制劑組的ALP活性無(wú)顯著差異(P＞0.05)。③BGP4d、8d的濃度:與空白對(duì)照組相比，雌激素組、高劑量仙茅苷組、低劑

9、量仙茅苷組、高劑量仙茅苷+抑制劑組的BGP分泌量均顯著增高(P＜0.01或P＜0.05)，而雌激素+抑制劑組、低劑量仙茅苷+抑制劑組與空白對(duì)照組相比則無(wú)差異(P＞0.05)。雌激素組BGP分泌量顯著高于雌激素+抑制劑組(P＜0.05);高劑量仙茅苷組BGP的分泌量則高于雌激素組、低劑量仙茅苷組、高劑量仙茅苷+抑制劑組(P＜0.01)。低劑量仙茅苷組BGP分泌量與雌激素組無(wú)明顯差異(P＞0.05);但顯著高于低劑量仙茅苷+抑制劑組(P＜0

10、.01)。高劑量仙茅苷+抑制劑組BGP的分泌量高于雌激素+抑制劑組、低劑量仙茅昔+抑制劑組(P＜0.05)。雌激素+抑制劑組、低劑量仙茅苷+抑制劑組之間無(wú)差異(P＞0.05)。④高劑量仙茅苷組ERα的蛋白表達(dá)高于空白對(duì)照組(P＜0.05)，而雌激素組、低劑量組和空白組之間無(wú)明顯差異(P＞0.05);各組之間ERβ蛋白的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　1.描述性分析及聚類(lèi)分析結(jié)果一致，其中一線藥物主要為補(bǔ)腎藥物，且以補(bǔ)