壯藥棵矮瓤乙酸乙酯部位化學(xué)成分研究及抗肝癌活性初探.pdf

1、目的:壯藥棵矮瓤系菊科植物馥芳艾納香Blumea aromatica(Wall.) DC.的干燥全草，別名黃藥子、山風(fēng)、香艾、大開門、艾納香等，具有活血止癢、祛風(fēng)消腫的功效，主要用于濕疹，皮膚瘙癢，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等癥。壯藥棵矮瓤的化學(xué)成分主要有黃酮類、揮發(fā)油類、萜類、甾體類化合物等，目前只有少量文獻(xiàn)對其化學(xué)成分和藥理活性進(jìn)行研究和報道。課題組前期對壯藥棵矮瓤組分進(jìn)行了活性篩選，發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯部分具有較好抗肝癌活性，因此，本課題對其乙酸乙酯部

2、位的化學(xué)成分進(jìn)行了研究，并對分離出來的新化合物進(jìn)行了體外抗肝癌活性的初步篩選研究。
　　方法:稱取壯藥棵矮瓤藥材50 kg粉粗粉，用500 L80％乙醇浸泡7d，過濾，藥渣再用400 L80％的乙醇浸提2次，每次7d，合并3次乙醇提取液，旋蒸回收乙醇，得到3.12 kg壯藥棵矮瓤乙醇提取物浸膏。熱水混懸所得乙醇浸膏后用石油醚和乙酸乙酯依次萃取，回收有機相，得到602.78 g乙酸乙酯提取部位浸膏。多次反復(fù)采用硅膠色譜法、葡聚糖凝膠

3、色譜法、ODS、Sephadex LH-20、MCI等柱層析以及重結(jié)晶法等現(xiàn)代分離方法和精制純化技術(shù)對壯藥棵矮瓤乙酸乙酯部位提取物進(jìn)行分離純化，利用1H-NMR、13C-NMR、MS及文獻(xiàn)參考等方法對分離提純的單體化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。
　　采用MTT方法檢測新化合物4和14對肝癌細(xì)胞株(Hep3B和HepG2)的增殖作用。化合物4和14設(shè)置9個藥物組(1、5、10、30、70、100、150，200μmol/L)、順鉑組(75μm

4、ol/L)以及空白對照組，分別于給藥24 h、48 h、72 h后，根據(jù)試劑說明說操作，用酶標(biāo)儀檢測OD值，并計算肝癌細(xì)胞增殖抑制率和IC50值。
　　結(jié)果:壯藥棵矮瓤乙酸乙酯部位共分離純化得到16個單體化合物，分別鑒定為山奈酚(1)、5，7-二羥基-4’，6-二甲氧基黃酮醇(2)、木犀草素(3)、(20R)-2α，3α，20-三羥基-16β-乙酰孕甾烷(4)（新）、(20R)-5α-2α，3α，16β，20-四羥基孕甾烷(5)、

5、3，5，7，4’-四羥基-6-甲氧基黃酮醇(6)、β-谷甾醇(7)、β-胡蘿卜苷(8)、3，5，3’，4’-O-四甲基槲皮素(9)、3’，4’，7-三甲氧基槲皮素(10)、艾納香素(11)、沒食子酸乙酯(12)、沒食子酸(13)、7-hydroxyspruceanol(14)(新)、芹菜素(15)、香豆酸(16)?；衔?對Hep3B和HepG2在48 h的IC50分別為78.15、15.24μmol·L-1，72h分別為55.27μm

6、ol·L-1和126.64μmol·L-1?；衔?4對Hep3B和HepG2在48 h的IC50分別為135.80μmol·L-1和223.78μmol·L-1，72 h分別為121.44μmol·L-1和193.82μmol·L-1。
　　結(jié)論:分離鑒定的16個化合物中，有10個化合物是首次從棵矮瓤中分離得到，它們分別是5，7-二羥基-4’，6-二甲氧基黃酮醇(2)、(20R)-2α，3α，20-三羥基-16β-乙酰孕甾烷(4

7、)（新）、(20R)-5α-2α，3α，16β，20-四羥基孕甾烷(5)、3，5，7，4-四羥基-6-甲氧基黃酮醇(6)、3，5，3’，4’-O-四甲基槲皮素(9)、3’，4’，7-三甲氧基槲皮素(10)、沒食子酸乙酯(12)、7-hydroxyspruceanol(14)(新)、芹菜素(15)、香豆酸(16)。其中(20R)-2α，3α，20-三羥基-16β-乙酰孕甾烷(4)和7-hydroxyspruceanol(14)為新化合物;