中藥疏肝散結(jié)、補(bǔ)腎柔肝周期療法治療乳腺增生病的實(shí)驗(yàn)與臨床研究.pdf

1、目的：
　　本研究旨在通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)，模擬乳腺增生病的病因及病理表現(xiàn)，觀察疏肝清熱、軟堅(jiān)散結(jié)、補(bǔ)腎柔肝周期療法對大鼠一般情況狀況、乳頭直徑、乳腺組織的病理、血清激素水平、血清腫瘤壞死因子及大鼠乳腺組織的ERK及雌、孕激素受體表達(dá)的影響，并統(tǒng)計(jì)臨床總有效率，力求從大鼠下丘腦-垂體-卵巢軸的異常調(diào)節(jié)及影響信號(hào)通路方面探討乳腺增生的發(fā)病機(jī)制，以期能為中藥周期治療乳腺增生病提供更客觀的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并以此篩選藥物配伍，為研制新的中藥制

2、劑提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)并奠定理論基礎(chǔ)，進(jìn)而觀察臨床應(yīng)用此法治療乳腺增生病的療效及對兼月經(jīng)不調(diào)患者的影響。
　　方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)研究：選用SPF級(jí)雌性健康未孕SD大鼠90只，體重200±20g，隨機(jī)抽取20只作為空白組，剩余70只鼠進(jìn)行造模。各空白組大鼠于右下肢肌肉注射生理鹽水注射液，劑量為0.2ml/kg·d，共計(jì)30天；余大鼠于右下肢每日肌注苯甲酸雌二醇注射液，劑量為0.5mg/kg·d，共25天后，改為連續(xù)5天每日每只右下肢

3、肌注射黃體酮注射液，劑量為4.5mg/kg·d。于30日后，隨機(jī)從空白和造模組各抽取10只大鼠，無菌操作剜下大鼠第3對的左側(cè)乳房，置于10％的甲醛溶液中固定，包埋切片，HE染色之后在顯微鏡下觀測其組織形態(tài)學(xué)的變化。鏡下模型組大鼠較空白組乳腺腺管、腺泡顯著增生，提示其造模是成功的，即成功建立了大鼠的乳腺增生模型。造模成功后模型大鼠隨機(jī)分為6組：即模型組，逍遙丸對照組，三苯氧胺對照組，治療中藥低、中、高劑量組，各組分別灌服相應(yīng)藥物?？瞻捉M及

4、模型組每日灌胃生理鹽水，連續(xù)30日。最后一次灌胃24h后，麻醉下股動(dòng)脈采血并離心，留血清，檢測大鼠血清腫瘤壞死因子、血清激素E2、P、PRL、神經(jīng)內(nèi)分泌因子β-內(nèi)啡肽。采血后處死大鼠，摘取第3對乳房的左側(cè)乳腺組織，檢測ERK及雌、孕激素受體。
　　2.臨床研究：試驗(yàn)將符合納入標(biāo)準(zhǔn)的乳腺增生患者采用經(jīng)前疏肝清熱、軟堅(jiān)散結(jié)，經(jīng)后補(bǔ)腎柔肝、調(diào)理沖任為指導(dǎo)的方藥進(jìn)行臨床治療，療程為8周。療程結(jié)束后，收集相關(guān)資料，以末次治療結(jié)束后，開始隨訪

5、3個(gè)月，進(jìn)行療效評價(jià)，以評價(jià)中藥周期療法治療乳腺增生病的臨床效果。
　　結(jié)果：
　　1.模型組大鼠與空白組相比，于造模第12日起，開始出現(xiàn)喜聚集，毛發(fā)粗糙，具有攻擊性，乳房色紅隱隱等癥狀。造模后鼠精神不振，爪涼，易激，乳房色紅，透毛可見。用藥后大鼠呈現(xiàn)有不同程度的好轉(zhuǎn)，活動(dòng)增加，易激惹，乳房紅腫現(xiàn)象基本消失。各組間表現(xiàn)無明顯差異。
　　2.空白組乳腺導(dǎo)管上皮結(jié)構(gòu)正常，管腔無擴(kuò)張，腺泡數(shù)少，周圍組織比例多。模型組比空白組

6、大鼠乳腺的腺泡增生密集，小葉導(dǎo)管擴(kuò)張，導(dǎo)管腔內(nèi)可見較多分泌物。
　　3.模型組大鼠的乳頭直徑與空白組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；灌服Ⅰ號(hào)方后各用藥組乳頭直徑縮小，但與模型組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；各用藥組間無明顯差異（P＞0.05）；灌服Ⅱ號(hào)方后各用藥組與模型對照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），高劑量組與空白組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　4.以 E2為指標(biāo)：模型組大鼠的E2與空白組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)

7、差異（P＜0.05）；灌服藥物后中藥中劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；逍遙丸組與空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　以 P為指標(biāo)：模型組大鼠的P與空白組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；灌服藥物后逍遙丸組與模型組比差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；逍遙丸組與空白組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　以PRL為指標(biāo)：模型組大鼠的PRL與空白組比較具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；灌服藥物后

8、與模型組比較，中、高劑量組與其相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；逍遙丸和低劑量組與空白組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　以β-EP為指標(biāo)：模型組大鼠的β-EP與空白組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；灌服藥物諸組與模型組相較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；三苯氧胺組、逍遙丸和低劑量組與空白組比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　5.血清細(xì)胞因子TNF-α：模型組大鼠的TNF-α與空白組比較具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.0

9、5）；灌服藥物后逍遙丸組及低、中、高劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；逍遙丸和低劑量組與空白組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　6. ER、PR、ERK的表達(dá)強(qiáng)度
　　染為棕黃色且呈粗顆粒狀細(xì)胞是ER、PR、ERK表達(dá)之陽性細(xì)胞。模型組的陽性細(xì)胞數(shù)量較正常組增多。
　　7.臨床療效
　　臨床觀察40例患者，其中治愈23例；顯效8例；有效者為8例，無效者為2例，其總有效率達(dá)95%。
　

10、　結(jié)論：
　　1.中藥周期療法改善乳腺增生大鼠的異常行為、乳頭直徑等一般狀況。表明此療法對大鼠增生的乳腺有一定的改善作用。
　　2.中藥周期療法通過先重在疏肝清熱、軟堅(jiān)散結(jié)以治標(biāo)，補(bǔ)腎柔肝、調(diào)理沖任的作用，能恢復(fù)使用外源激素所造成的大鼠體內(nèi)激素失衡的狀態(tài)，恢復(fù)下丘腦-垂體-卵巢軸的調(diào)控，全面治療乳腺增生。
　　3.周期療法藥物降低血清TNF-α，可能通過其抗炎作用來治療乳腺增生，從而降低其向乳腺癌發(fā)展的可能性。

11、　　4.雌、孕激素受體高表達(dá)與乳腺增生的發(fā)病有關(guān)，周期治療可抑制雌、孕激素受體的表達(dá)，減弱對雌孕激素對靶細(xì)胞的敏感性，從而達(dá)到治療乳腺增生的目的。
　　5.中藥周期療法可使患乳腺增生的大鼠的乳腺組織中ERK蛋白表達(dá)量降低。該方法通過抑制ERK/MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的的活化，以達(dá)到治療乳腺增生的作用，進(jìn)而可降低其向乳腺癌發(fā)展的可能。
　　6.周期療法治療乳腺增生病臨床療效顯著，尤其是對兼見月經(jīng)不調(diào)的患者，對其正常月經(jīng)周期的恢復(fù)