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簡(jiǎn)介：國(guó)家自然科學(xué)基金研究方案撰寫(xiě)技巧成都中醫(yī)藥大學(xué)丁維俊201311NSFC項(xiàng)目申請(qǐng)書(shū)內(nèi)容簡(jiǎn)表、摘要立項(xiàng)依據(jù)研究方案研究條件與基礎(chǔ)經(jīng)費(fèi)預(yù)算NSFC研究方案330分1研究?jī)?nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題（80分）范圍合適35個(gè)內(nèi)容N重點(diǎn)突出12個(gè)重點(diǎn)關(guān)鍵問(wèn)題選擇準(zhǔn)確2技術(shù)路線（90分）設(shè)計(jì)合理方法可行成熟可靠可重復(fù)性強(qiáng)3研究方法及手段（90分）方法先進(jìn)技術(shù)成熟可靠有創(chuàng)新4研究的預(yù)期目標(biāo)（70分）可以達(dá)到，留有余地。發(fā)表論文申請(qǐng)專(zhuān)利可應(yīng)用產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)摘要的主要內(nèi)容是研究方案如“用方法進(jìn)行研究，探索證明問(wèn)題，對(duì)闡明機(jī)制／揭示規(guī)律有重要意義，為奠定基礎(chǔ)／提供思路”立論依據(jù)、研究方案與研究基礎(chǔ)的系立論依據(jù)闡述背景和理由，回答“為什么”研究方案是申請(qǐng)書(shū)的核心，回答“怎么做”研究基礎(chǔ)展示積累和實(shí)力，建立“信任感”研究方案研究目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容和擬解決關(guān)鍵問(wèn)題研究方法、技術(shù)路線年度研究計(jì)劃及預(yù)期進(jìn)展1研究目標(biāo)撰寫(xiě)要求有限目標(biāo)，與研究?jī)?nèi)容相呼應(yīng)如探索問(wèn)題，明確關(guān)系，揭示規(guī)律，闡明原理（機(jī)制），建立方法等【研究目標(biāo)】篩選出與老年性白內(nèi)障相關(guān)的基因，明確部分基因在白內(nèi)障形成中的作用，從晶狀體上皮變化的角度闡明白內(nèi)障的發(fā)生機(jī)理，為防治白內(nèi)障提供線索。研究目標(biāo)1個(gè)目標(biāo)解決科學(xué)問(wèn)題和學(xué)術(shù)性問(wèn)題關(guān)鍵問(wèn)題1－2個(gè)，并與目標(biāo)一致問(wèn)題目標(biāo)“大、平、淺”沒(méi)有做到“專(zhuān)、精、深”應(yīng)提倡“小題大做”2、研究?jī)?nèi)容存在問(wèn)題內(nèi)容過(guò)多，一個(gè)研究周期難以完成；內(nèi)容分散，不能集中闡明研究目標(biāo)。撰寫(xiě)要求內(nèi)容要適當(dāng)，確保研究周期內(nèi)完成；與目標(biāo)相輔相成，為研究目標(biāo)服務(wù)。篇幅要適度，注意與技術(shù)路線區(qū)別。研究?jī)?nèi)容相對(duì)集中的有限目標(biāo)和研究目的要一致，要有能支持新思路相應(yīng)的新內(nèi)容，體現(xiàn)出創(chuàng)新點(diǎn)和特色。深入的文獻(xiàn)調(diào)研凝煉出的科學(xué)問(wèn)題是什么采用什么創(chuàng)新的方法、途徑、思路解決這個(gè)科學(xué)問(wèn)題解決這個(gè)科學(xué)問(wèn)題對(duì)學(xué)術(shù)界和臨床有什么意義對(duì)社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展有何潛在的指導(dǎo)價(jià)值3研究方法（1）病例納入與排除方法（2）（臨床）檢測(cè)指標(biāo)與標(biāo)本采集（2）基本研究方法（3）特殊研究方法（4）統(tǒng)計(jì)學(xué)處理材料或研究對(duì)象模型與目標(biāo)及內(nèi)容相吻合；材料可靠，對(duì)象可控制；自擬處方要論證。分組方案設(shè)計(jì)和樣本量要符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，對(duì)照要嚴(yán)格。方法在保證準(zhǔn)確、可靠的前提下，盡可能要有創(chuàng)新。指標(biāo)針對(duì)性強(qiáng)是第一位。盡量采用最新的專(zhuān)一性強(qiáng)的指標(biāo)并要論證其可行性和適用性。介紹技術(shù)方法的技巧成熟的方法要簡(jiǎn)要介紹，重點(diǎn)闡明應(yīng)用于本研究的依據(jù)新方法要詳細(xì)介紹其原理，并闡明可以應(yīng)用于本研究的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。注意必須對(duì)所運(yùn)用的技術(shù)方法原理、流程及在實(shí)際應(yīng)用中可能出現(xiàn)的問(wèn)題要十分清楚。研究方法常見(jiàn)問(wèn)題過(guò)于簡(jiǎn)單在實(shí)驗(yàn)方案中只有方法名稱(chēng)而無(wú)具體步驟。過(guò)于繁雜大量羅列一些常規(guī)的實(shí)驗(yàn)方法。撰寫(xiě)要求以研究項(xiàng)目的需求為前提，盡量采用目前最先進(jìn)的方法和手段，并將其操作步驟和關(guān)鍵環(huán)節(jié)體現(xiàn)在技術(shù)路線當(dāng)中。4、擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題什么是關(guān)鍵問(wèn)題研究過(guò)程中對(duì)達(dá)預(yù)期目標(biāo)有重要影響的某些研究?jī)?nèi)容或因素。為達(dá)預(yù)期目標(biāo)所必須掌握的關(guān)鍵技術(shù)或研究手段。撰寫(xiě)要求找出關(guān)鍵問(wèn)題，寫(xiě)出解決辦法。技術(shù)路線路線圖，簡(jiǎn)單明了5、技術(shù)路線存在問(wèn)題不清楚，不詳細(xì)，不可行。撰寫(xiě)要求清晰、詳細(xì)、注意邏輯性。撰寫(xiě)方法以時(shí)間順序?yàn)橹骶€設(shè)計(jì)技術(shù)路線以研究?jī)?nèi)容為主線設(shè)計(jì)技術(shù)路線分大小標(biāo)題，突出邏輯關(guān)系。詳細(xì)地寫(xiě)清楚每個(gè)具體步驟。研究目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容、研究方法、技術(shù)路線及其關(guān)系1、首先要確定研究目標(biāo)國(guó)內(nèi)外現(xiàn)狀分析中提出的具體科學(xué)問(wèn)題就是項(xiàng)目的研究目標(biāo)2、依據(jù)目標(biāo)確定研究?jī)?nèi)容，根據(jù)內(nèi)容選擇研究方法3、研究?jī)?nèi)容與技術(shù)路線的區(qū)別研究?jī)?nèi)容重點(diǎn)回答觀察什么指標(biāo)、階段目標(biāo)。技術(shù)路線重點(diǎn)回答怎么做的操作流程。6、可行性分析理論分析學(xué)術(shù)可行性研究手段、方法分析技術(shù)可行性預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析前期基礎(chǔ)對(duì)所具備的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行分析對(duì)項(xiàng)目組成員搭配及其運(yùn)用技術(shù)方法的能力分析7、創(chuàng)新性對(duì)創(chuàng)新的理解創(chuàng)新性與先進(jìn)性是有根本區(qū)別的。原始創(chuàng)新填補(bǔ)空白或修改傳統(tǒng)的理論；新技術(shù)、新方法的發(fā)明創(chuàng)造。跟蹤創(chuàng)新在前人工作基礎(chǔ)上補(bǔ)充、完善現(xiàn)有理論；對(duì)原有技術(shù)方法修改后產(chǎn)生1＋1＞2的效果。8、年度研究計(jì)劃及預(yù)期研究結(jié)果年度研究計(jì)劃按年度列出研究?jī)?nèi)容及其階段目標(biāo)；擬組織的重要學(xué)術(shù)交流活動(dòng)、國(guó)際合作與交流計(jì)劃等。預(yù)期研究結(jié)果理論成果建立豐富補(bǔ)充填補(bǔ)技術(shù)方法建立完善專(zhuān)利可望獲得論文國(guó)際、國(guó)內(nèi)人才培養(yǎng)青年科技骨干、博碩研究生研究方案寫(xiě)作要點(diǎn)條理清楚邏輯性目標(biāo)明確重要性論據(jù)充分科學(xué)性方法可行可行性基礎(chǔ)良好優(yōu)越性案例分享題目溫腎健脾針?lè)▽?duì)脾腎兩虛型肥胖腸道脂代謝核心菌群的調(diào)控機(jī)理【摘要】腸道菌群不僅轉(zhuǎn)化膽汁酸影響脂肪吸收，而且與體重及肥胖關(guān)系密切。中醫(yī)將單純性肥胖分為脾虛濕阻、脾腎兩虛等型，針?biāo)幘锌隙ǒ熜?，但缺乏諸如調(diào)節(jié)腸道菌群等微觀機(jī)理研究。本課題擬納入脾腎兩虛型單純性肥胖患者及健康志愿者各50例，比較其腸道菌群構(gòu)成與脂代謝特征、大便膽酸鹽譜及短鏈脂肪酸譜、大便能量與膳食纖維殘存量、血液脂代謝關(guān)鍵激素LEPTININSULINCHOLECYSTOKININ及FIAF酶含量，以期揭示脾腎兩虛型肥胖證之能量收獲及脂代謝核心菌群，及其導(dǎo)致機(jī)體脂質(zhì)異常和肥胖的關(guān)聯(lián)機(jī)制。以溫腎健脾針?lè)ㄖ委熤练逝职Y狀及BMI指標(biāo)明顯改善；采用前述方法檢測(cè)療效前30名每2周收集的血清與大便樣本，獲得溫針?lè)▽?duì)腸道菌群及其脂代謝的動(dòng)態(tài)調(diào)控模式。本項(xiàng)目可望揭示脾腎兩虛型肥胖與腸道菌群之能量與脂代謝異常亢進(jìn)的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)溫腎健脾針?lè)ǖ娜轮委煓C(jī)理，拓展中醫(yī)藥肥胖治療理論，并為多學(xué)科攻克肥胖作出奠基性貢獻(xiàn)。研究意義腸道菌群與機(jī)體能量及脂質(zhì)代謝關(guān)系密切，肥胖患者腸道含有促進(jìn)能量收獲與脂肪貯存的核心菌群。但不同證型肥胖患者是否有特定的核心菌群脾腎兩虛型肥胖相關(guān)核心菌群有何特征針刺減肥作用機(jī)理之中，是否包括并如何調(diào)整腸道菌群本課題擬完成這些十分重要的探索性研究。具體研究意義有三（1）揭示脾腎兩虛型肥胖證能量及脂代謝核心菌群，開(kāi)啟針刺減肥研究新領(lǐng)域；（2）建立溫腎健脾針?lè)ń?jīng)由調(diào)整腸道脂代謝相關(guān)的核心菌群而減肥的新學(xué)說(shuō)；（3）構(gòu)建針?biāo)帨p肥與腸道菌群研究新平臺(tái)，促進(jìn)肥胖機(jī)理研究與藥物研發(fā)。研究目標(biāo)揭示脾腎兩虛型單純性肥胖患者促進(jìn)能量收獲與脂代謝的腸道核心菌群，闡明溫腎健脾針?lè)ㄍㄟ^(guò)調(diào)整脂代謝菌群而治療肥胖的新機(jī)制，建立證候與腸道菌群研究平臺(tái)。21研究?jī)?nèi)容基于上述目標(biāo)，本項(xiàng)目擬納入脾腎兩虛型單純性肥胖患者及健康志愿者各50名，以及療效評(píng)分前30名患者治療中采集樣本，完成下述研究221篩查促進(jìn)脂肪代謝的腸道核心菌群。篩查對(duì)脂肪代謝起促進(jìn)、抑制或雙向作用的代表性菌屬，然后采用自動(dòng)菌種鑒定儀進(jìn)一步鑒定到種。這三方面代表性細(xì)菌，組成與脂代謝直接相關(guān)的腸道核心菌群。222分析膽汁酸譜、短鏈脂肪酸譜等大便脂代謝相關(guān)分子種類(lèi)與含量。223檢測(cè)單位大便卡路里殘存率、膳食纖維含量。224測(cè)試肥胖相關(guān)激素LEPTININSULINCHOLECYSTOKININ與FIAF酶含量。225體外試驗(yàn)該核心菌群的能量收獲效率。226整合研究，揭示患者能量與脂代謝核心菌群特征，以及針刺減肥新機(jī)理。23擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題宿主的生存環(huán)境、生活方式、遺傳背景、生理病理狀態(tài)、免疫功能、疾病史與用藥史等多種因素，都可影響特定個(gè)體的腸道菌群。如何排除眾多干擾因素，獲得脾腎兩虛型單純性肥胖患者促進(jìn)能量收獲與脂肪代謝的腸道核心菌群，是本項(xiàng)目擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題。本項(xiàng)目擬采取下述四種方法，針對(duì)性地排除干擾因素，解決此關(guān)鍵問(wèn)題（1）嚴(yán)格病例納入。采用中西醫(yī)肥胖診斷權(quán)威標(biāo)準(zhǔn)，病證結(jié)合納入病例。（2）巧妙設(shè)計(jì)對(duì)照。（3）強(qiáng)化檢測(cè)指標(biāo)的互補(bǔ)性、相互驗(yàn)證性。（4）設(shè)計(jì)體外驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。圖2實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線流程簡(jiǎn)圖32研究方法和技術(shù)要點(diǎn)簡(jiǎn)述321典型脾腎兩虛型肥胖證患者的納入、治療與療效判斷標(biāo)準(zhǔn)為保障試驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)意義，同時(shí)考慮不超過(guò)20的退出率，確定樣本量為50例。由經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的中醫(yī)與西醫(yī)診斷學(xué)專(zhuān)家，納入符合脾腎兩虛型肥胖證患者，以及年齡、性別、生活狀況等相匹配的健康對(duì)照。3212治療方法脾腎兩虛型肥胖針灸治療上，以溫腎健脾為主。故多選用脾經(jīng)、腎經(jīng)、任脈和背部膀胱經(jīng)的腧穴。因?yàn)榕R床顯著的個(gè)體差異，本項(xiàng)目?jī)H在此提出治則，具體的治療方案隨臨臨床癥狀體征而靈活應(yīng)用（胡玲香等，2007）。但一般遵循如下基本原則腧穴選擇主穴之體穴主要取天樞、神闕、中極、關(guān)元、足三里、太溪、豐隆、三陰交、脾俞、腎俞等，均取雙側(cè)；耳穴內(nèi)分泌、大腸、三焦、腦點(diǎn)等。脾腎兩虛型配穴常取脾俞、腎俞、太白，等。針?lè)ㄟx擇選用溫針或溫補(bǔ)法為主。操作方法在本校附屬醫(yī)院針灸科診斷室以常規(guī)方法，完成操作。隔日針灸1次，10次為一療程，20天后觀察療效。休息3日，繼續(xù)第2療程治療。針刺治療時(shí)間選擇在飯后1小時(shí)后進(jìn)行。322實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)介3221核心菌群的篩查采用選擇性培養(yǎng)基，從待測(cè)大便樣品中篩選出與脂代謝密切相關(guān)的菌屬。擬采用下述培養(yǎng)基（丁維俊等2007）雙歧桿菌屬BS培養(yǎng)基但用申請(qǐng)者改進(jìn)的以新鮮番茄汁代替多種維生素。乳桿菌屬LBS培養(yǎng)基按標(biāo)準(zhǔn)配方自制。類(lèi)桿菌屬KV培養(yǎng)基將購(gòu)自上海生物制品所的厭氧菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基NO98404滅菌后冷卻至55℃，加入兔血5％、卡那霉素100GM1、硫酸鏈霉素5GM1及VK101％，傾注平皿。柔嫩梭菌屬M(fèi)RS培養(yǎng)基MSMITHII菌MBC培養(yǎng)基（補(bǔ)充3GLFMATE3GLACETATE0006NA2S；BTHETAIOTAOMICRON菌SHAEDLER培養(yǎng)基；均按MARTIN等（2007）介紹的腸道菌選擇培養(yǎng)基配方自制。實(shí)驗(yàn)時(shí)，用無(wú)菌稱(chēng)量紙取糞便01G放入09ML稀釋液，使之稀釋10倍。然后用一系列無(wú)菌稀釋管作對(duì)數(shù)稀釋至108。依據(jù)申請(qǐng)者前期研究經(jīng)驗(yàn)及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，選擇不同培養(yǎng)基的接種稀釋度。用微量移液器取20ΜL滴于培養(yǎng)基表面。每個(gè)稀釋度滴三滴，同一培養(yǎng)皿上滴種三個(gè)稀釋度。然后迅速置于DYII型厭氧培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)48H。計(jì)數(shù)培養(yǎng)皿表面的菌落形成單位數(shù)量，乘以稀釋倍數(shù)，即得到每克糞便標(biāo)本的菌落形成單位數(shù)（CFU）。采用PEMS30統(tǒng)計(jì)軟件包，用T檢驗(yàn)分析不同組別的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著性。3222UPLC–MS法分析大便膽汁酸及其代謝中產(chǎn)物譜擬使用由四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)研究中心開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室提供的WATERS公司ACQUITYUPLC檢測(cè)系統(tǒng)，參照MARTIN等2007建立的方法，完成大便檢測(cè)。標(biāo)準(zhǔn)品由SIGMA公司購(gòu)買(mǎi)。質(zhì)譜檢測(cè)在WATERS公司產(chǎn)品TOFLCTPREMIERWATERSMSTECHNOLOGIESMANCHESTERUK完成。其操作過(guò)程如下。取低溫保存的大便浸出液，用11甲基氰水混合液調(diào)整濃度至1MGML，上ACQUITYBEHC1817M柱，以500ULMIN流速洗脫12MIN，洗脫液組成由甲基氰水4060比例逐漸調(diào)整為6040PH40。將分批收集的洗脫樣品上QTOF質(zhì)譜分析系統(tǒng)，以亮氨酸－腦啡肽為參照，采用WOPTIC通路、毛細(xì)管電壓26KV、錐體電壓50V、噴霧氣流600ULH等條件，完成檢測(cè)。每個(gè)樣品重復(fù)掃描10次，得其平均值。3228核心菌群能量收獲與脂代謝效率的體外試驗(yàn)采用KIHARA等2002建立的微量培養(yǎng)法，檢測(cè)待測(cè)樣本對(duì)大豆寡聚糖SOYBEANOLIGOSACCHRIDE乳果糖LACTULOSE棉子糖RAFFINOSE蔗果三糖KESTOSE等四種代表性膳食纖維成分的分解與利用效率。其基本操作程序如下。將上述四種膳食纖維分別加到牛心腦浸出液（BHI）培養(yǎng)基中（終濃度為20GL），按05ML孔接種于24孔培養(yǎng)板。將待測(cè)大便樣本作102103104105稀釋?zhuān)缓蠼臃N于培養(yǎng)板每個(gè)濃度梯度設(shè)置3個(gè)重復(fù)樣。放入細(xì)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6H后，應(yīng)用前述“酶重量法”測(cè)定培養(yǎng)液中膳食纖維殘留量、GC–FID法分析新合成短鏈脂肪酸（SCFA）種類(lèi)與數(shù)量（樣本中原先含有的SCFA，但經(jīng)102至105倍稀釋后，可忽略不計(jì)），從而確認(rèn)腸道菌群樣本的能量收獲與脂代謝功能。323可行性分析3231學(xué)術(shù)依據(jù)充分、實(shí)驗(yàn)方案合理，是本項(xiàng)目得以實(shí)現(xiàn)的理論基礎(chǔ)3232前期相關(guān)實(shí)驗(yàn)與臨床經(jīng)驗(yàn)，是本項(xiàng)目順利實(shí)施得基本保障3233人員搭配合理、技術(shù)熟練，具備完成本項(xiàng)目的知識(shí)與人力資源3234實(shí)驗(yàn)設(shè)備基本具備，缺少的設(shè)備也得到落實(shí)4本項(xiàng)目的特色與創(chuàng)新之處41首次提出針灸減肥機(jī)理中，應(yīng)包括調(diào)節(jié)腸道菌群之新假說(shuō)。提出在針灸減肥的整體性調(diào)控機(jī)理中，尚應(yīng)包括腸道菌群之局部調(diào)節(jié)。結(jié)合申請(qǐng)人研究經(jīng)歷與學(xué)科發(fā)展態(tài)勢(shì)看，該假說(shuō)是對(duì)傳統(tǒng)針刺減肥原理的重要補(bǔ)充善，值得深入研究。42研究方法的組合創(chuàng)新43多學(xué)科整合效應(yīng)明顯，突出中醫(yī)自身的特色與優(yōu)勢(shì)5年度研究計(jì)劃及預(yù)期研究結(jié)果2009年度納入患者與健康對(duì)照各20例，完成研究?jī)?nèi)容之14項(xiàng)；總結(jié)并優(yōu)化研究方案，撰寫(xiě)研究論文12篇。2010年度納入患者與健康對(duì)照各30例，完成研究?jī)?nèi)容之14項(xiàng)；撰寫(xiě)論文24篇發(fā)表論文34篇；培養(yǎng)青年科技骨干2名。2011年度完成研究?jī)?nèi)容之5、6項(xiàng)研究。發(fā)表SCI論文2３篇。項(xiàng)目結(jié)題。培養(yǎng)研究生2名。預(yù)期研究結(jié)果理論成果填補(bǔ)針灸調(diào)控腸道菌群的研究空白。技術(shù)平臺(tái)完善中醫(yī)藥候與腸道菌群研究平臺(tái)。論文國(guó)際SCI論文23篇、國(guó)內(nèi)35篇。人才培養(yǎng)擬培養(yǎng)青年科技骨干2名、碩士研究生2名。祝各位申報(bào)成功

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