簡介：國家自然科學(xué)基金研究方案撰寫技巧成都中醫(yī)藥大學(xué)丁維俊201311NSFC項目申請書內(nèi)容簡表、摘要立項依據(jù)研究方案研究條件與基礎(chǔ)經(jīng)費預(yù)算NSFC研究方案330分1研究內(nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問題（80分）范圍合適35個內(nèi)容N重點突出12個重點關(guān)鍵問題選擇準(zhǔn)確2技術(shù)路線（90分）設(shè)計合理方法可行成熟可靠可重復(fù)性強3研究方法及手段（90分）方法先進(jìn)技術(shù)成熟可靠有創(chuàng)新4研究的預(yù)期目標(biāo)（70分）可以達(dá)到，留有余地。發(fā)表論文申請專利可應(yīng)用產(chǎn)品的開發(fā)摘要的主要內(nèi)容是研究方案如“用方法進(jìn)行研究，探索證明問題，對闡明機制／揭示規(guī)律有重要意義，為奠定基礎(chǔ)／提供思路”立論依據(jù)、研究方案與研究基礎(chǔ)的系立論依據(jù)闡述背景和理由，回答“為什么”研究方案是申請書的核心，回答“怎么做”研究基礎(chǔ)展示積累和實力，建立“信任感”研究方案研究目標(biāo)、研究內(nèi)容和擬解決關(guān)鍵問題研究方法、技術(shù)路線年度研究計劃及預(yù)期進(jìn)展1研究目標(biāo)撰寫要求有限目標(biāo)，與研究內(nèi)容相呼應(yīng)如探索問題，明確關(guān)系，揭示規(guī)律，闡明原理（機制），建立方法等【研究目標(biāo)】篩選出與老年性白內(nèi)障相關(guān)的基因，明確部分基因在白內(nèi)障形成中的作用，從晶狀體上皮變化的角度闡明白內(nèi)障的發(fā)生機理，為防治白內(nèi)障提供線索。研究目標(biāo)1個目標(biāo)解決科學(xué)問題和學(xué)術(shù)性問題關(guān)鍵問題1－2個，并與目標(biāo)一致問題目標(biāo)“大、平、淺”沒有做到“專、精、深”應(yīng)提倡“小題大做”2、研究內(nèi)容存在問題內(nèi)容過多，一個研究周期難以完成；內(nèi)容分散，不能集中闡明研究目標(biāo)。撰寫要求內(nèi)容要適當(dāng)，確保研究周期內(nèi)完成；與目標(biāo)相輔相成，為研究目標(biāo)服務(wù)。篇幅要適度，注意與技術(shù)路線區(qū)別。研究內(nèi)容相對集中的有限目標(biāo)和研究目的要一致，要有能支持新思路相應(yīng)的新內(nèi)容，體現(xiàn)出創(chuàng)新點和特色。深入的文獻(xiàn)調(diào)研凝煉出的科學(xué)問題是什么采用什么創(chuàng)新的方法、途徑、思路解決這個科學(xué)問題解決這個科學(xué)問題對學(xué)術(shù)界和臨床有什么意義對社會經(jīng)濟(jì)的發(fā)展有何潛在的指導(dǎo)價值3研究方法（1）病例納入與排除方法（2）（臨床）檢測指標(biāo)與標(biāo)本采集（2）基本研究方法（3）特殊研究方法（4）統(tǒng)計學(xué)處理材料或研究對象模型與目標(biāo)及內(nèi)容相吻合；材料可靠，對象可控制；自擬處方要論證。分組方案設(shè)計和樣本量要符合統(tǒng)計學(xué)要求，對照要嚴(yán)格。方法在保證準(zhǔn)確、可靠的前提下，盡可能要有創(chuàng)新。指標(biāo)針對性強是第一位。盡量采用最新的專一性強的指標(biāo)并要論證其可行性和適用性。介紹技術(shù)方法的技巧成熟的方法要簡要介紹，重點闡明應(yīng)用于本研究的依據(jù)新方法要詳細(xì)介紹其原理，并闡明可以應(yīng)用于本研究的理論依據(jù)和實驗依據(jù)。注意必須對所運用的技術(shù)方法原理、流程及在實際應(yīng)用中可能出現(xiàn)的問題要十分清楚。研究方法常見問題過于簡單在實驗方案中只有方法名稱而無具體步驟。過于繁雜大量羅列一些常規(guī)的實驗方法。撰寫要求以研究項目的需求為前提，盡量采用目前最先進(jìn)的方法和手段，并將其操作步驟和關(guān)鍵環(huán)節(jié)體現(xiàn)在技術(shù)路線當(dāng)中。4、擬解決的關(guān)鍵問題什么是關(guān)鍵問題研究過程中對達(dá)預(yù)期目標(biāo)有重要影響的某些研究內(nèi)容或因素。為達(dá)預(yù)期目標(biāo)所必須掌握的關(guān)鍵技術(shù)或研究手段。撰寫要求找出關(guān)鍵問題，寫出解決辦法。技術(shù)路線路線圖，簡單明了5、技術(shù)路線存在問題不清楚，不詳細(xì)，不可行。撰寫要求清晰、詳細(xì)、注意邏輯性。撰寫方法以時間順序為主線設(shè)計技術(shù)路線以研究內(nèi)容為主線設(shè)計技術(shù)路線分大小標(biāo)題，突出邏輯關(guān)系。詳細(xì)地寫清楚每個具體步驟。研究目標(biāo)、研究內(nèi)容、研究方法、技術(shù)路線及其關(guān)系1、首先要確定研究目標(biāo)國內(nèi)外現(xiàn)狀分析中提出的具體科學(xué)問題就是項目的研究目標(biāo)2、依據(jù)目標(biāo)確定研究內(nèi)容，根據(jù)內(nèi)容選擇研究方法3、研究內(nèi)容與技術(shù)路線的區(qū)別研究內(nèi)容重點回答觀察什么指標(biāo)、階段目標(biāo)。技術(shù)路線重點回答怎么做的操作流程。6、可行性分析理論分析學(xué)術(shù)可行性研究手段、方法分析技術(shù)可行性預(yù)實驗結(jié)果分析前期基礎(chǔ)對所具備的實驗條件進(jìn)行分析對項目組成員搭配及其運用技術(shù)方法的能力分析7、創(chuàng)新性對創(chuàng)新的理解創(chuàng)新性與先進(jìn)性是有根本區(qū)別的。原始創(chuàng)新填補空白或修改傳統(tǒng)的理論；新技術(shù)、新方法的發(fā)明創(chuàng)造。跟蹤創(chuàng)新在前人工作基礎(chǔ)上補充、完善現(xiàn)有理論；對原有技術(shù)方法修改后產(chǎn)生1＋1＞2的效果。8、年度研究計劃及預(yù)期研究結(jié)果年度研究計劃按年度列出研究內(nèi)容及其階段目標(biāo)；擬組織的重要學(xué)術(shù)交流活動、國際合作與交流計劃等。預(yù)期研究結(jié)果理論成果建立豐富補充填補技術(shù)方法建立完善專利可望獲得論文國際、國內(nèi)人才培養(yǎng)青年科技骨干、博碩研究生研究方案寫作要點條理清楚邏輯性目標(biāo)明確重要性論據(jù)充分科學(xué)性方法可行可行性基礎(chǔ)良好優(yōu)越性案例分享題目溫腎健脾針法對脾腎兩虛型肥胖腸道脂代謝核心菌群的調(diào)控機理【摘要】腸道菌群不僅轉(zhuǎn)化膽汁酸影響脂肪吸收，而且與體重及肥胖關(guān)系密切。中醫(yī)將單純性肥胖分為脾虛濕阻、脾腎兩虛等型，針?biāo)幘锌隙ǒ熜В狈χT如調(diào)節(jié)腸道菌群等微觀機理研究。本課題擬納入脾腎兩虛型單純性肥胖患者及健康志愿者各50例，比較其腸道菌群構(gòu)成與脂代謝特征、大便膽酸鹽譜及短鏈脂肪酸譜、大便能量與膳食纖維殘存量、血液脂代謝關(guān)鍵激素LEPTININSULINCHOLECYSTOKININ及FIAF酶含量，以期揭示脾腎兩虛型肥胖證之能量收獲及脂代謝核心菌群，及其導(dǎo)致機體脂質(zhì)異常和肥胖的關(guān)聯(lián)機制。以溫腎健脾針法治療至肥胖癥狀及BMI指標(biāo)明顯改善；采用前述方法檢測療效前30名每2周收集的血清與大便樣本，獲得溫針法對腸道菌群及其脂代謝的動態(tài)調(diào)控模式。本項目可望揭示脾腎兩虛型肥胖與腸道菌群之能量與脂代謝異常亢進(jìn)的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)溫腎健脾針法的全新治療機理，拓展中醫(yī)藥肥胖治療理論，并為多學(xué)科攻克肥胖作出奠基性貢獻(xiàn)。研究意義腸道菌群與機體能量及脂質(zhì)代謝關(guān)系密切，肥胖患者腸道含有促進(jìn)能量收獲與脂肪貯存的核心菌群。但不同證型肥胖患者是否有特定的核心菌群脾腎兩虛型肥胖相關(guān)核心菌群有何特征針刺減肥作用機理之中，是否包括并如何調(diào)整腸道菌群本課題擬完成這些十分重要的探索性研究。具體研究意義有三（1）揭示脾腎兩虛型肥胖證能量及脂代謝核心菌群，開啟針刺減肥研究新領(lǐng)域；（2）建立溫腎健脾針法經(jīng)由調(diào)整腸道脂代謝相關(guān)的核心菌群而減肥的新學(xué)說；（3）構(gòu)建針?biāo)帨p肥與腸道菌群研究新平臺，促進(jìn)肥胖機理研究與藥物研發(fā)。研究目標(biāo)揭示脾腎兩虛型單純性肥胖患者促進(jìn)能量收獲與脂代謝的腸道核心菌群，闡明溫腎健脾針法通過調(diào)整脂代謝菌群而治療肥胖的新機制，建立證候與腸道菌群研究平臺。21研究內(nèi)容基于上述目標(biāo)，本項目擬納入脾腎兩虛型單純性肥胖患者及健康志愿者各50名，以及療效評分前30名患者治療中采集樣本，完成下述研究221篩查促進(jìn)脂肪代謝的腸道核心菌群。篩查對脂肪代謝起促進(jìn)、抑制或雙向作用的代表性菌屬，然后采用自動菌種鑒定儀進(jìn)一步鑒定到種。這三方面代表性細(xì)菌，組成與脂代謝直接相關(guān)的腸道核心菌群。222分析膽汁酸譜、短鏈脂肪酸譜等大便脂代謝相關(guān)分子種類與含量。223檢測單位大便卡路里殘存率、膳食纖維含量。224測試肥胖相關(guān)激素LEPTININSULINCHOLECYSTOKININ與FIAF酶含量。225體外試驗該核心菌群的能量收獲效率。226整合研究，揭示患者能量與脂代謝核心菌群特征，以及針刺減肥新機理。23擬解決的關(guān)鍵問題宿主的生存環(huán)境、生活方式、遺傳背景、生理病理狀態(tài)、免疫功能、疾病史與用藥史等多種因素，都可影響特定個體的腸道菌群。如何排除眾多干擾因素，獲得脾腎兩虛型單純性肥胖患者促進(jìn)能量收獲與脂肪代謝的腸道核心菌群，是本項目擬解決的關(guān)鍵問題。本項目擬采取下述四種方法，針對性地排除干擾因素，解決此關(guān)鍵問題（1）嚴(yán)格病例納入。采用中西醫(yī)肥胖診斷權(quán)威標(biāo)準(zhǔn)，病證結(jié)合納入病例。（2）巧妙設(shè)計對照。（3）強化檢測指標(biāo)的互補性、相互驗證性。（4）設(shè)計體外驗證實驗。圖2實驗技術(shù)路線流程簡圖32研究方法和技術(shù)要點簡述321典型脾腎兩虛型肥胖證患者的納入、治療與療效判斷標(biāo)準(zhǔn)為保障試驗結(jié)果具有統(tǒng)計意義，同時考慮不超過20的退出率，確定樣本量為50例。由經(jīng)過培訓(xùn)的中醫(yī)與西醫(yī)診斷學(xué)專家，納入符合脾腎兩虛型肥胖證患者，以及年齡、性別、生活狀況等相匹配的健康對照。3212治療方法脾腎兩虛型肥胖針灸治療上，以溫腎健脾為主。故多選用脾經(jīng)、腎經(jīng)、任脈和背部膀胱經(jīng)的腧穴。因為臨床顯著的個體差異，本項目僅在此提出治則，具體的治療方案隨臨臨床癥狀體征而靈活應(yīng)用（胡玲香等，2007）。但一般遵循如下基本原則腧穴選擇主穴之體穴主要取天樞、神闕、中極、關(guān)元、足三里、太溪、豐隆、三陰交、脾俞、腎俞等，均取雙側(cè)；耳穴內(nèi)分泌、大腸、三焦、腦點等。脾腎兩虛型配穴常取脾俞、腎俞、太白，等。針法選擇選用溫針或溫補法為主。操作方法在本校附屬醫(yī)院針灸科診斷室以常規(guī)方法，完成操作。隔日針灸1次，10次為一療程，20天后觀察療效。休息3日，繼續(xù)第2療程治療。針刺治療時間選擇在飯后1小時后進(jìn)行。322實驗方法簡介3221核心菌群的篩查采用選擇性培養(yǎng)基，從待測大便樣品中篩選出與脂代謝密切相關(guān)的菌屬。擬采用下述培養(yǎng)基（丁維俊等2007）雙歧桿菌屬BS培養(yǎng)基但用申請者改進(jìn)的以新鮮番茄汁代替多種維生素。乳桿菌屬LBS培養(yǎng)基按標(biāo)準(zhǔn)配方自制。類桿菌屬KV培養(yǎng)基將購自上海生物制品所的厭氧菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基NO98404滅菌后冷卻至55℃，加入兔血5％、卡那霉素100GM1、硫酸鏈霉素5GM1及VK101％，傾注平皿。柔嫩梭菌屬MRS培養(yǎng)基MSMITHII菌MBC培養(yǎng)基（補充3GLFMATE3GLACETATE0006NA2S；BTHETAIOTAOMICRON菌SHAEDLER培養(yǎng)基；均按MARTIN等（2007）介紹的腸道菌選擇培養(yǎng)基配方自制。實驗時，用無菌稱量紙取糞便01G放入09ML稀釋液，使之稀釋10倍。然后用一系列無菌稀釋管作對數(shù)稀釋至108。依據(jù)申請者前期研究經(jīng)驗及相關(guān)文獻(xiàn)報道，選擇不同培養(yǎng)基的接種稀釋度。用微量移液器取20ΜL滴于培養(yǎng)基表面。每個稀釋度滴三滴，同一培養(yǎng)皿上滴種三個稀釋度。然后迅速置于DYII型厭氧培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)48H。計數(shù)培養(yǎng)皿表面的菌落形成單位數(shù)量，乘以稀釋倍數(shù)，即得到每克糞便標(biāo)本的菌落形成單位數(shù)（CFU）。采用PEMS30統(tǒng)計軟件包，用T檢驗分析不同組別的統(tǒng)計學(xué)差異顯著性。3222UPLC–MS法分析大便膽汁酸及其代謝中產(chǎn)物譜擬使用由四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)研究中心開放實驗室提供的WATERS公司ACQUITYUPLC檢測系統(tǒng)，參照MARTIN等2007建立的方法，完成大便檢測。標(biāo)準(zhǔn)品由SIGMA公司購買。質(zhì)譜檢測在WATERS公司產(chǎn)品TOFLCTPREMIERWATERSMSTECHNOLOGIESMANCHESTERUK完成。其操作過程如下。取低溫保存的大便浸出液，用11甲基氰水混合液調(diào)整濃度至1MGML，上ACQUITYBEHC1817M柱，以500ULMIN流速洗脫12MIN，洗脫液組成由甲基氰水4060比例逐漸調(diào)整為6040PH40。將分批收集的洗脫樣品上QTOF質(zhì)譜分析系統(tǒng)，以亮氨酸－腦啡肽為參照，采用WOPTIC通路、毛細(xì)管電壓26KV、錐體電壓50V、噴霧氣流600ULH等條件，完成檢測。每個樣品重復(fù)掃描10次，得其平均值。3228核心菌群能量收獲與脂代謝效率的體外試驗采用KIHARA等2002建立的微量培養(yǎng)法，檢測待測樣本對大豆寡聚糖SOYBEANOLIGOSACCHRIDE乳果糖LACTULOSE棉子糖RAFFINOSE蔗果三糖KESTOSE等四種代表性膳食纖維成分的分解與利用效率。其基本操作程序如下。將上述四種膳食纖維分別加到牛心腦浸出液（BHI）培養(yǎng)基中（終濃度為20GL），按05ML孔接種于24孔培養(yǎng)板。將待測大便樣本作102103104105稀釋，然后接種于培養(yǎng)板每個濃度梯度設(shè)置3個重復(fù)樣。放入細(xì)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6H后，應(yīng)用前述“酶重量法”測定培養(yǎng)液中膳食纖維殘留量、GC–FID法分析新合成短鏈脂肪酸（SCFA）種類與數(shù)量（樣本中原先含有的SCFA，但經(jīng)102至105倍稀釋后，可忽略不計），從而確認(rèn)腸道菌群樣本的能量收獲與脂代謝功能。323可行性分析3231學(xué)術(shù)依據(jù)充分、實驗方案合理，是本項目得以實現(xiàn)的理論基礎(chǔ)3232前期相關(guān)實驗與臨床經(jīng)驗，是本項目順利實施得基本保障3233人員搭配合理、技術(shù)熟練，具備完成本項目的知識與人力資源3234實驗設(shè)備基本具備，缺少的設(shè)備也得到落實4本項目的特色與創(chuàng)新之處41首次提出針灸減肥機理中，應(yīng)包括調(diào)節(jié)腸道菌群之新假說。提出在針灸減肥的整體性調(diào)控機理中，尚應(yīng)包括腸道菌群之局部調(diào)節(jié)。結(jié)合申請人研究經(jīng)歷與學(xué)科發(fā)展態(tài)勢看，該假說是對傳統(tǒng)針刺減肥原理的重要補充善，值得深入研究。42研究方法的組合創(chuàng)新43多學(xué)科整合效應(yīng)明顯，突出中醫(yī)自身的特色與優(yōu)勢5年度研究計劃及預(yù)期研究結(jié)果2009年度納入患者與健康對照各20例，完成研究內(nèi)容之14項；總結(jié)并優(yōu)化研究方案，撰寫研究論文12篇。2010年度納入患者與健康對照各30例，完成研究內(nèi)容之14項；撰寫論文24篇發(fā)表論文34篇；培養(yǎng)青年科技骨干2名。2011年度完成研究內(nèi)容之5、6項研究。發(fā)表SCI論文2３篇。項目結(jié)題。培養(yǎng)研究生2名。預(yù)期研究結(jié)果理論成果填補針灸調(diào)控腸道菌群的研究空白。技術(shù)平臺完善中醫(yī)藥候與腸道菌群研究平臺。論文國際SCI論文23篇、國內(nèi)35篇。人才培養(yǎng)擬培養(yǎng)青年科技骨干2名、碩士研究生2名。祝各位申報成功

簡介：國家自然科學(xué)基金申報攻略復(fù)旦大學(xué)分子醫(yī)學(xué)教育部重點實驗室復(fù)旦大學(xué)出生缺陷研究中心復(fù)旦大學(xué)兒童發(fā)育與疾病轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中心馬端20112本人主持和合作的國家自然科學(xué)基金2003新型組織因子VIIA抑制物抗凝和抗炎作用研究（TFPI1）2007TFPI1參與MSC細(xì)胞凋亡及其腎炎治療作用的實驗研究2007TFPI2影響斑馬魚中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的機制研究2009圓錐動脈干異常所致先天性心臟病的致病基因分析與確證（重點）2009TFPI2在穩(wěn)定動脈粥樣硬化斑塊中的作用及其機制研究2009TFPI2基因在子癇前期發(fā)病機制中的作用2010TFPI2降低鼻內(nèi)翻性乳頭狀瘤血管生成的信號通路研究2010應(yīng)用條件基因敲除小鼠研究TFPI1對血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響研究方向出生缺陷的病因、發(fā)病機制、早期診斷與干預(yù)疾病的遺傳學(xué)與表觀遺傳學(xué)生物技術(shù)新藥研制講座內(nèi)容2010年基金申請及批準(zhǔn)情況2011年申請政策的重要變動申請的基本要求申請的體會及建議2010年總體情況申請量繼續(xù)增長醫(yī)學(xué)部首次受理項目申請，占全委26接收后“不予受理”項目36各類項目資助強度和資助率均有增長2011年重大變動面上項目平均資助強度60萬元項，資助期限由3年延長為4年。重點項目平均資助強度300萬元項，資助期限由4年延長為5年。青年科學(xué)基金項目平均資助強度將達(dá)到約25萬元項，資助期限仍為3年。女性申請人的年齡限制推遲至未滿40周歲；男性申請人的年齡限制維持未滿35周歲不變。科學(xué)儀器基礎(chǔ)研究研究?？铐椖抠Y助強度原則上不超過300萬元項，資助期限由3年延長為4年。重大國際（地區(qū)）合作研究項目預(yù)計平均資助強度將達(dá)到約300萬元項左右，資助期限由3年延長為5年。特殊說明為防范學(xué)術(shù)不端行為，避免重復(fù)資助，自然科學(xué)基金委自2011年起將通過計算機軟件對申請書內(nèi)容進(jìn)行比對，特提醒申請人注意不得將內(nèi)容相同或相近的項目，向同一科學(xué)部或不同科學(xué)部申請不同類型項目的資助；受聘于一個以上依托單位的申請人，不得將內(nèi)容相同或相近的項目，通過不同依托單位提出申請；不得將內(nèi)容相同或相近的項目，以不同申請人的名義提出申請。申請人條件具有承擔(dān)基礎(chǔ)研究課題或其他從事基礎(chǔ)研究的經(jīng)歷具有高級專業(yè)技術(shù)職稱具有博士學(xué)位，有2名與其研究領(lǐng)域相同、具有高級專業(yè)技術(shù)職稱的科學(xué)技術(shù)人員推薦。正在攻讀研究生學(xué)位的人員不得作為申請人申請各類項目。在職攻讀博士研究生學(xué)位的人員可申請面上項目、青年科學(xué)基金項目、地區(qū)科學(xué)基金項目及部分聯(lián)合基金項目。條件通過受聘單位申請，導(dǎo)師同意函，說明申請項目與其學(xué)位論文的關(guān)系，承擔(dān)項目后的工作時間和條件保證等。在職攻讀碩士研究生學(xué)位人員不得申請青年科學(xué)基金項目。博士后人員面上項目、青年科學(xué)基金項目、地區(qū)科學(xué)基金項目，不得申請其他類型項目。限項申請規(guī)定限項申請申請人（不含參與者）同年只能申請1項同類型項目。申請和承擔(dān)項目總數(shù)限為3項面上項目、重點項目、重大項目、重大研究計劃項目、聯(lián)合基金項目、青年科學(xué)基金項目、地區(qū)科學(xué)基金項目、國家杰出青年科學(xué)基金項目（申請時不限項）、國際（地區(qū)）合作研究項目、科學(xué)儀器基礎(chǔ)研究?？铐椖?、優(yōu)秀國家重點實驗室研究專項項目，以及資助期限超過1年的委主任基金項目、科學(xué)部主任基金項目等。作為負(fù)責(zé)人限獲得1次資助的項目青年科學(xué)基金項目、國家杰出青年基金。非高級專業(yè)技術(shù)職稱人員的限項規(guī)定作為申請人申請和作為負(fù)責(zé)人正在承擔(dān)的項目數(shù)合計限為1項；在保證有足夠時間和精力參與項目研究工作的前提下，作為主要參與者申請或者承擔(dān)各類型項目數(shù)量不限。處于評審階段（自然科學(xué)基金委做出資助與否決定之前）的申請，計入本限項申請規(guī)定范圍之內(nèi)。申請人即使受聘于多個依托單位，通過不同依托單位申請和承擔(dān)項目，其申請和承擔(dān)項目數(shù)量仍然適用于本限項申請規(guī)定。面上項目申報要求充分了解國內(nèi)外相關(guān)研究領(lǐng)域發(fā)展現(xiàn)狀與動態(tài)能領(lǐng)導(dǎo)一個研究組開展創(chuàng)新研究工作依托單位應(yīng)當(dāng)具備必要的實驗研究條件申請的項目有重要的科學(xué)意義和研究價值，理論依據(jù)充分，學(xué)術(shù)思想新穎，研究目標(biāo)明確，研究內(nèi)容具體，研究方案可行。面上項目合作研究單位不得超過2個。醫(yī)學(xué)科學(xué)二處生殖系統(tǒng)和圍生醫(yī)學(xué)新生兒HO4主要資助人類生殖系統(tǒng)功能異常、各種相關(guān)的非腫瘤性疾病的研究和胎兒發(fā)育異常、新生兒疾病以及輔助生殖、產(chǎn)前診斷、避孕與節(jié)育相關(guān)研究等。2010年度受理項目申請789項，基本覆蓋了上述研究領(lǐng)域，主要集中在新生兒相關(guān)疾病（13）、妊娠及妊娠相關(guān)性疾?。?2）；其次是胎兒發(fā)育與產(chǎn)前診斷（7）及子宮內(nèi)膜異位癥（7）。研究的主要科學(xué)問題是疾病的發(fā)病機制以及治療的新靶點新技術(shù)，在胚胎表觀遺傳學(xué)研究、輔助生殖安全性研究方面已備受關(guān)注，申請項目占該領(lǐng)域申請總數(shù)的26。申請數(shù)較少或無的領(lǐng)域有女性性功能障礙、乳腺發(fā)育異常與疾病、生殖器官移植、生殖系統(tǒng)遺傳性疾病、先天性發(fā)育缺陷、男性生殖系統(tǒng)炎癥。本科學(xué)處繼續(xù)鼓勵有良好前期積累、探討與提高人口質(zhì)量及影響婦女、胎兒、新生兒及生殖健康相關(guān)的創(chuàng)新性的基礎(chǔ)研究。醫(yī)學(xué)科學(xué)五處主要資助腫瘤學(xué)（H16）基礎(chǔ)研究本科學(xué)處資助有關(guān)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸和各類腫瘤（白血病除外）的病因、發(fā)病機理、診斷、治療的基礎(chǔ)研究。資助范圍包括腫瘤研究的各個層面。病因、腫瘤發(fā)生、腫瘤遺傳、腫瘤免疫、腫瘤預(yù)防、腫瘤復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移、腫瘤干細(xì)胞、腫瘤診斷、腫瘤化學(xué)藥物治療、腫瘤物理治療、腫瘤生物治療、腫瘤綜合治療、腫瘤康復(fù)包括社會心理康復(fù)、腫瘤研究體系新技術(shù)，以及各系統(tǒng)器官腫瘤。本科學(xué)處重點支持學(xué)術(shù)思想具有創(chuàng)新、已形成穩(wěn)定的研究方向、具備堅實研究基礎(chǔ)。鼓勵申請人從前期研究和臨床實踐中發(fā)現(xiàn)并凝練科學(xué)問題，進(jìn)行深入系統(tǒng)的機制探討，開展旨在提高臨床診療水平及向臨床實踐轉(zhuǎn)化的基礎(chǔ)研究；鼓勵對腫瘤學(xué)研究領(lǐng)域新技術(shù)新方法的探討；鼓勵申請人利用我國臨床資源的優(yōu)勢開展與臨床有機結(jié)合的基礎(chǔ)研究；鼓勵申請人開展基于已有臨床數(shù)據(jù)和臨床標(biāo)本而開展圍繞具體科學(xué)目標(biāo)進(jìn)行的相關(guān)研究。青年基金申報要求青年科學(xué)基金項目申請、評審和管理機制與面上項目基本相同，重點評價申請人本人的創(chuàng)新潛力。申請人應(yīng)當(dāng)按照青年科學(xué)基金項目申請書撰寫提綱撰寫申請書。青年科學(xué)基金項目的合作研究單位不得超過2個，資助期限為3年。板塊人才基金強調(diào)是否受過良好且嚴(yán)格的科研訓(xùn)練判斷項目申請人是否具備良好的培養(yǎng)潛力成員不必刻意將資深專家作為研究成員基礎(chǔ)實事求是，不必過于在意工作積累獨立作為獨立PI，充分和認(rèn)真思考存在的主要問題一般性的跟蹤研究，缺乏創(chuàng)新無明顯科學(xué)意義和應(yīng)用前景立論依據(jù)不夠充分研究結(jié)果的預(yù)期性較差對國內(nèi)外研究現(xiàn)狀了解和分析不充分，分析有偏差，未能抓住關(guān)鍵問題重復(fù)研究，不完全了解前人的工作未認(rèn)真閱讀項目指南研究內(nèi)容甚至項目名稱都和前一兩年資助項目雷同工作無持續(xù)性做好“功課”項目申請指南同行評議意見歷年相關(guān)領(lǐng)域已資助項目情況國內(nèi)外同行研究工作歷史、最新進(jìn)展等基金委資助領(lǐng)域、優(yōu)先資助內(nèi)容與國家其他研究計劃的關(guān)系標(biāo)書撰寫原則新穎性不重復(fù)他人研究成果。重要性學(xué)術(shù)界共識或有特殊理由。可行性研究基礎(chǔ)，實驗條件，人員，時間。問題導(dǎo)向精練，概括；提出假說。目標(biāo)集中可信，連貫。深度合適點狀深入，不要面上鋪開。邏輯清晰注意區(qū)別平行關(guān)系和因果關(guān)系。標(biāo)書撰寫技巧題目不可過大、過長、語法錯誤和邏輯錯誤。必要時使用英文縮寫高度概括，針對性強舉例應(yīng)用條件基因敲除小鼠研究TFPI1對血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響摘要充分利用400字的空間簡單背景介紹，存在問題。研究基礎(chǔ)研究內(nèi)容目標(biāo)或可能達(dá)到的目的，意義。關(guān)鍵詞準(zhǔn)確注意充分展示，不可夸大舉例（400字）內(nèi)容摘要組織因子途徑抑制物1（TFPI1）屬絲氨酸蛋白酶抑制物家族成員，主要功能是抗凝血，也有一定的抗炎、抗平滑肌細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)腎小球細(xì)胞凋亡等功能。TFPI1基因敲除小鼠胚胎期即因卵黃囊或腦出血死亡，使得對它的生理功能研究缺乏了有效的工具。鑒于TFPI1在動脈粥樣硬化、血栓性疾病、惡性腫瘤、嚴(yán)重感染和彌漫性血管內(nèi)凝血中變化明顯，因此有必要進(jìn)一步明確TFPI1在血管內(nèi)皮細(xì)胞中的功能。目前我們已經(jīng)成功制備了TFPI1LOXP小鼠，并獲得了血管內(nèi)皮細(xì)胞TEKCRE小鼠。本課題擬完成1制備血管內(nèi)皮細(xì)胞TFPI1基因條件敲除小鼠；2應(yīng)用病理學(xué)方法觀察該小鼠血管內(nèi)皮及血管的形態(tài)學(xué)變化；3靜脈注射不同劑量的脂多糖和乳腺癌細(xì)胞，觀察小鼠炎癥發(fā)生和腫瘤轉(zhuǎn)移情況。通過上述研究，力圖闡明TFPI1在血管內(nèi)皮細(xì)胞中的生理功能，明確它對炎癥和惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的作用，為這兩類疾病的防治提供理論依據(jù)。關(guān)鍵詞TFPI1；條件基因敲除；血管內(nèi)皮細(xì)胞；生理功能項目組成成員不可過多或過少，一般68人比較合適。研究隊伍組成要合理，包括職稱、年齡、知識結(jié)構(gòu)等其它單位合作者不要超項項目分工和工作時間合理經(jīng)費申請單項合理實事求是。協(xié)作費指外單位協(xié)作承擔(dān)自然科學(xué)基金項目部分研究試驗工作的費用。合作費指由兩個或兩個以上單位合作，共同承擔(dān)自然科學(xué)基金項目研究工作的費用。勞務(wù)費只能用于直接參加項目研究的研究生、博士后人員的勞務(wù)費用。各支出科目最高比例表立項依據(jù)與研究內(nèi)容（40008000字）項目的立項依據(jù)關(guān)鍵科學(xué)問題是什么問題的來源目前有誰在研究他們解決了什么問題是如何進(jìn)行研究的還有哪些問題沒解決他們的研究對你要開展的研究有什么啟發(fā)為什么要進(jìn)行本項研究為什么要由你來研究前期工作基礎(chǔ)如何是否有科學(xué)假說如何完成研究對研究方案的簡介及依據(jù)。對新穎性、重要性和可行性的分析。準(zhǔn)確評價自己的工作、同行的工作。研究的重要性和意義。對本科學(xué)、分支領(lǐng)域、研究方向的發(fā)展有何貢獻(xiàn)對科技、經(jīng)濟(jì)、社會發(fā)展有何重要意義及應(yīng)用前景注意參考文獻(xiàn)的時效性研究目標(biāo)目標(biāo)明確23個成功制備血管內(nèi)皮細(xì)胞TFPI1條件基因敲除的小鼠；通過明確血管內(nèi)皮細(xì)胞TFPI1條件基因敲除的小鼠的血管形態(tài)學(xué)和功能學(xué)變化，確定TFPI1的部分生理功能；確定TFPI1在血管內(nèi)皮細(xì)胞參與炎癥反應(yīng)和惡性腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用和地位。研究內(nèi)容做什么圍繞研究目標(biāo)進(jìn)行小題大做要有層次如基因轉(zhuǎn)錄水平、蛋白質(zhì)表達(dá)水平、細(xì)胞水平、動物模型、人體。內(nèi)容要細(xì)化制備血管內(nèi)皮細(xì)胞TFPI1條件基因敲除小鼠將TFPI1LOXP小鼠和血管內(nèi)皮細(xì)胞TIE2CRE轉(zhuǎn)基因小鼠交配，獲得血管內(nèi)皮細(xì)胞TFPI1基因條件敲除雜合子和純合子小鼠，應(yīng)用SOUTHERNBLOT和PCR方法進(jìn)行基因型鑒定。血管內(nèi)皮細(xì)胞TFPI1條件基因敲除小鼠不同發(fā)育階段血管內(nèi)皮細(xì)胞表型和血管形成變化分析取E12小鼠胚胎、出生后當(dāng)天小鼠、35周齡幼鼠和7周齡性發(fā)育成熟小鼠，處死后分別取主動脈、心臟、肺臟和大腦，分別對各部位血管進(jìn)行病理學(xué)和電子顯微鏡檢測。應(yīng)用TUNEL法原位檢測血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡情況。血管內(nèi)皮細(xì)胞TFPI1條件基因敲除小鼠對細(xì)菌內(nèi)毒素的反應(yīng)選擇67周齡發(fā)育成熟小鼠，靜脈注射小、中和大劑量細(xì)菌脂多糖LPS，取血處死小鼠，檢測血液中關(guān)鍵炎癥因子NFКB、TNFΑ和IL1Β水平，病理學(xué)檢測肺臟和大腦的炎癥情況。乳腺癌細(xì)胞在血管內(nèi)皮細(xì)胞TFPI1條件基因敲除小鼠血液中轉(zhuǎn)移能力的評價選擇67周齡發(fā)育成熟小鼠，靜脈注射三種不同數(shù)量的MDAMB231乳腺癌細(xì)胞，飼養(yǎng)46周后處死，取肺臟進(jìn)行病理學(xué)檢測，觀察乳腺癌轉(zhuǎn)移情況。擬解決的關(guān)鍵問題關(guān)鍵科學(xué)問題與關(guān)鍵的技術(shù)問題與研究目標(biāo)和研究內(nèi)容相對應(yīng)，精練，準(zhǔn)確。TFPI1主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生，它的抗凝機制已經(jīng)明確，其表達(dá)水平在動脈粥樣硬化、心腦血管疾病、炎癥和惡性腫瘤中也發(fā)生顯著變化。由于TFPI1基因敲除小鼠全部在胚胎死亡，因此難以理解它在血管內(nèi)皮細(xì)胞功能維持，以及在上述疾病發(fā)生發(fā)展過程中的確切作用。本課題通過制備血管內(nèi)皮細(xì)胞TFPI1條件基因敲除小鼠，系統(tǒng)觀察血管內(nèi)皮細(xì)胞在缺乏TFPI1時的形態(tài)學(xué)和功能學(xué)變化，并明確TFPI1炎癥反應(yīng)和惡性腫瘤血道轉(zhuǎn)移中的作用，以回答TFPI1具有除抗凝作用以外，是否還有確切的其它生理功能這個關(guān)鍵科學(xué)問題。擬采取的研究方案怎么做圍繞研究內(nèi)容進(jìn)行設(shè)計，從多角度說明問題切忌羅列研究方法而不作任何說明和解釋要具體，針對每個具體問題提出切實可行方案盡可能使用縐典的、公認(rèn)的研究方法。如果使用新方法，解釋其比縐典方法的好處、可信度等殺雞不需宰牛刀簡述具體的實驗方法，使評審者相信申請人確實掌握了該方法。技術(shù)路線可行性分析讓審閱人相信你能夠完成研究計劃學(xué)術(shù)思想研究方案研究基礎(chǔ)研究條件研究人員設(shè)計的合理性和可完成性要客觀，不要夸大特色與創(chuàng)新是指前人未曾有過的新學(xué)術(shù)思想、理論、模型、研究方法、手段和應(yīng)用性結(jié)果切忌重復(fù)前面論述過的話針對可能的結(jié)果進(jìn)行歸納數(shù)量不宜過多要注意研究條件的特色不能代表項目的研究特色，更不能代表新穎的學(xué)術(shù)思想應(yīng)用CRELOXP方法制備血管內(nèi)皮細(xì)胞TFPI1基因條件敲除小鼠；應(yīng)用血管內(nèi)皮細(xì)胞TFPI1基因條件敲除小鼠判斷TFPI1對血管內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響；應(yīng)用血管內(nèi)皮細(xì)胞TFPI1基因條件敲除小鼠判斷TFPI1對炎癥反應(yīng)和腫瘤血道轉(zhuǎn)移的影響。年度研究計劃包括擬組織的重要學(xué)術(shù)交流活動、國際合作與交流計劃等至少以半年為一階段，最好以季度為節(jié)點。一定要有預(yù)期結(jié)果預(yù)期研究結(jié)果成功制備血管內(nèi)皮細(xì)胞TFPI1條件基因敲除的小鼠；血管內(nèi)皮細(xì)胞TFPI1條件基因敲除小鼠的血管內(nèi)皮細(xì)胞可能出現(xiàn)凋亡，細(xì)胞之間的縫隙連接增寬，細(xì)胞表面可能出現(xiàn)纖維蛋白沉著，血管中膜增厚，血管腔狹窄。這些變化在胚胎期、幼鼠和成熟小鼠可能程度不同。血管內(nèi)皮細(xì)胞TFPI1條件基因敲除小鼠血管壁的炎癥反應(yīng)增強，表現(xiàn)為炎性細(xì)胞增多，炎性因子表達(dá)增加，嚴(yán)重時可能出現(xiàn)肺泡表面透明膜形成、血液滲出，甚至發(fā)生彌漫性血管內(nèi)凝血。癌細(xì)胞靜脈注射至血管內(nèi)皮細(xì)胞TFPI1條件基因敲除小鼠血液中后，與對照組相比，肺部、骨髓、腦部形成轉(zhuǎn)移瘤的時間提前，腫瘤生長速度加快。國內(nèi)外發(fā)表高水平論文34篇，其中本學(xué)科高水平國際刊物論文23篇。培養(yǎng)研究生45名。與目標(biāo)和研究內(nèi)容對應(yīng)文章和專利的數(shù)量和質(zhì)量工作基礎(chǔ)與本項目相關(guān)的研究工作積累和已取得的研究工作成績是課題申報不可或缺的內(nèi)容詳細(xì)闡明基礎(chǔ)應(yīng)充分，適度內(nèi)容包括已發(fā)表的文章、圖片等。工作條件包括已具備的實驗條件，尚缺少的實驗條件和擬解決的途徑，包括利用國家實驗室、國家重點實驗室和部門重點實驗室等研究基地的計劃與落實情況主要寫本單位條件合作單位條件不要過分強調(diào)申請者簡歷申請人和項目組主要參與者的學(xué)歷和研究工作簡歷，近期已發(fā)表與本項目有關(guān)的主要論著目錄和獲得學(xué)術(shù)獎勵情況，在本項目中承擔(dān)的任務(wù)。論著目錄要求詳細(xì)列出所有作者、論著題目、期刊名或出版社名、年、卷（期）、起止頁碼等；獎勵情況也須詳細(xì)列出全部受獎人員、獎勵名稱等級、授獎年等。申請者主持、參與與本項目有關(guān)研究工作及其結(jié)果反映了其研究基礎(chǔ)，相關(guān)研究結(jié)果、工作成績要詳盡地在申請書中反映；內(nèi)容真實承擔(dān)科研項目情況申請人和項目組主要參與者正在承擔(dān)的科研項目情況，包括自然科學(xué)基金的項目，要注明項目的名稱和編號、經(jīng)費來源、起止年月、與本項目的關(guān)系及負(fù)責(zé)的內(nèi)容等。馬端。國家自然科學(xué)基金（20031200512，19萬）新型組織因子VIIA抑制物（TFI）抗凝和抗炎作用研究，編號30271229。馬端。國家863專題（200612200812，100萬元）長半衰期組織因子途徑抑制物的研制及治療感染性DIC的臨床前研究，2006AA02Z109。馬端。國家重大基礎(chǔ)科研計劃（20092013）環(huán)境和遺傳因素導(dǎo)致男性不育與出生缺陷的分子機制。課題四－精子異常與常見出生缺陷。2009CB941704完成自然科學(xué)基金項目情況對申請人負(fù)責(zé)的前一個已結(jié)題科學(xué)基金項目（項目名稱及批準(zhǔn)號）完成情況、后續(xù)研究進(jìn)展及與本申請項目的關(guān)系加以詳細(xì)說明。另附該已結(jié)題項目研究工作總結(jié)摘要（限500字）和相關(guān)成果的詳細(xì)目錄）。國家自然科學(xué)基金面上項目新型組織因子VIIA抑制物（TFI）抗凝和抗炎作用研究，編號30271229，已于2005年年底結(jié)題。與課題相關(guān)的論文已在SCI收錄國際刊物上發(fā)表2篇（IF分別為495和285）；發(fā)表于國內(nèi)核心刊物3篇，其它國內(nèi)論文1篇（見申請者簡歷），授權(quán)中國發(fā)明專利2項，申請中國發(fā)明專利2項。課題簡介組織因子途徑抑制物（TFPI）對彌散性血管內(nèi)凝血DIC有良好的療效但它的半衰期短，進(jìn)入血液后被迅速代謝。我們對TFPI的C末端進(jìn)行同源模建，然后將它與受體LRP進(jìn)行分子對接后，發(fā)現(xiàn)了兩者相互作用的4個關(guān)鍵氨基酸K241、K254、K260和K261。應(yīng)用丙氨酸對這四個氨基酸進(jìn)行單點和四位點替代突變，獲得了TFPIMUT1和TFPIMUT4的CDNA基因，并實現(xiàn)了大腸桿菌表達(dá)，純化后獲得的重組TFPIMUT1和TFPIMUT4純度均大于95，比活性與野生型TFPI相近，分別為18390UMG和18350UMG，產(chǎn)率分別為32MGL和34MGL。與野生型TFPI相比，TFPIMUT1和TFPIMUT4在大鼠體內(nèi)的T12Α分別延長133倍和196倍，T12Β分別延長162倍和422倍，且抗凝活性不變。我們將TFPIMUT4命名為長效TFPI。藥效學(xué)研究顯示，LTFPI對兔DIC模型有明顯的療效，且優(yōu)于野生型TFPI。此外，我們對TFPI的同家族成員TFPI2及其三個結(jié)構(gòu)域分別進(jìn)行了表達(dá)和初步的結(jié)構(gòu)與功能研究，獲得了一批有價值的數(shù)據(jù)。經(jīng)費申請說明購置5萬元以上固定資產(chǎn)及設(shè)備等，須逐項說明與項目研究的直接相關(guān)性及必要性。一般不要購買5萬元以上的設(shè)備。形式要求從評審人的角度來組細(xì)你的申報書的撰寫課題申請書是一篇文章主題、層次、表述、銜接、呼應(yīng)語言通順，流暢，精煉無語法錯誤和標(biāo)點錯誤層次清晰，邏輯嚴(yán)謹(jǐn)重點語句用粗體或下劃線標(biāo)出科學(xué)的嚴(yán)謹(jǐn)文筆的美感終極提醒會講故事新穎，生動，有吸引力量入為出有多少錢做多少事實力是基礎(chǔ)，形式可加分歡迎合作各類芯片測試和分析基因的普通測序和深度測序具備全國最好的平臺DUANMAWISHYOUALLSUCCESS

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