亞麻薺高效再生體系的創(chuàng)建及KLU轉(zhuǎn)化亞麻薺研究.pdf

1、亞麻薺(Camelinasativa(L.)Crantz)屬十字花科(Cruciferae)蕓薹族(Sisymbrieae)亞麻薺屬(Camelina),在歐洲曾被廣泛種植。二戰(zhàn)過后,由于油菜的引入及亞麻薺總體產(chǎn)量較低等原因,亞麻薺種植面積和總產(chǎn)量急劇下滑,甚至到了滅絕的地步。近些年來由于亞麻薺具有抗旱、抗病蟲害、耐鹽堿等優(yōu)良的農(nóng)藝學特征;亞麻薺具有優(yōu)良的油料品質(zhì),種子油中含有豐富人體必需的多不飽和脂肪酸α-亞麻酸,與市場上普通食用油相

2、比具有更高的食用價值;同時其種子油作為潛在的新型生物燃料工業(yè)價值巨大。因此,亞麻薺這一古老的油料作物重新被研究者重視起來。
　　本試驗選用我國新疆野生小果亞麻薺(Camelinamicrocarpa)與從加拿大引進的亞麻薺(Camelinasativa)的春性雜種亞麻薺為實驗材料,詳細研究分析了外植體,植物激素濃度配比,外植體苗齡及硝酸銀濃度等因素對亞麻薺再生能力的影響,結(jié)果表明取5-6天的亞麻薺無菌苗的子葉柄作為外植體,接種于M

3、S+BA(1.0mg/L)+NAA(0.3mg/L)分化培養(yǎng)基上,可以獲得最高的芽再生頻率(30％)和再生芽數(shù)(4.3個)。在此基礎(chǔ)上,試驗研究發(fā)現(xiàn)硝酸銀對亞麻薺再生效率影響不顯著,低濃度的硝酸銀(2.5mg/L)對其分化能力有略微提高。隨著硝酸銀濃度的提高,硝酸銀對亞麻薺的分化能力反而起到抑制作用。本研究成功創(chuàng)建了雜種亞麻薺的高效再生體系。
　　為了進一步提高亞麻薺的含油量,本研究成功克隆擬南芥胚珠組織特異性INNERNOOUT

4、ER基因的啟動子(pINO)和擬南芥細胞色素P450KLUH基因(KLU),以pCAMBIA2301為起始載體,構(gòu)建pCambia2301::pINO::KLU植物表達載體,通過電轉(zhuǎn)化法將其轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌GV3101。通過農(nóng)桿菌介導的Floraldip法轉(zhuǎn)化亞麻薺,試驗確定了Kan最適篩選濃度為50mg/L,并詳細研究分析了農(nóng)桿菌液濃度、滲入緩沖液對亞麻薺轉(zhuǎn)化效率的影響,結(jié)果表明農(nóng)桿菌液培養(yǎng)至OD600值為0.8,離心收集菌體后用等體積