金磁納米粒子的聚合物功能修飾及磁誘導(dǎo)體外轉(zhuǎn)染研究.pdf

1、基因治療是基于基因重組的基因工程技術(shù)，能夠糾正或者補(bǔ)償因基因缺陷或者異常引起的頑固型疾病，如遺傳性疾病和癌癥，在臨床應(yīng)用中具有巨大的潛力和廣泛的應(yīng)用前景。基因載體能否安全、高效地攜帶治療基因進(jìn)入靶細(xì)胞，并且使基因在細(xì)胞中得到穩(wěn)定可控的表達(dá)是基因治療的關(guān)鍵。研究發(fā)現(xiàn)，利用磁性納米粒子的磁性誘導(dǎo)可快速將載體富集到癌組織的周圍，進(jìn)一步提高基因治療的效果。但是磁性納米粒子在生物體內(nèi)存在不穩(wěn)定且難以功能化等缺陷。本文首先制備了金包磁的納米粒子 A

2、u@Fe3O4，用于提高磁性納米粒子的穩(wěn)定性和可修飾性，然后以嵌段聚合物聚乙二醇單甲醚-b-聚1-(3-胺丙基)-3-(2-甲基丙烯酰氧丙基)咪唑溴（PEG-b-PAMPImB）通過 Au-S鍵功能化 Au@Fe3O4，驗證磁性誘導(dǎo)對其轉(zhuǎn)染效率的影響。結(jié)果表明，在外加磁場作用下，聚合物功能化的金磁納米顆粒PEG-b-PAMPImB-Au@Fe3O4轉(zhuǎn)染效率得到明顯提高。
　　1.核殼型金磁納米粒子Au@Fe3O4的制備
　　

3、化學(xué)共沉淀的方法制備 Fe3O4磁性納米顆粒，采用直接還原的方法將氯金酸還原在磁性納米顆粒的表面：分別以兩種不同的還原劑檸檬酸三鈉（Trisodium citrate，TSC）和硼烷叔丁胺（BTBA）制備金磁納米粒子，得到TSC-Au@Fe3O4和 BTBA-Au@Fe3O4。并制備一系列 Fe3O4與 HAuCl4摩爾比不同的金磁納米粒子，對其穩(wěn)定性及磁響應(yīng)性進(jìn)行對比。外加磁場對金磁納米粒子進(jìn)行磁性分離，證明 Au@Fe3O4的磁響應(yīng)

4、性；透射電子顯微鏡（TEM）及晶體衍射證實 TSC-Au@Fe3O4和 BTBA-Au@Fe3O4的粒徑較為均一，在20nm左右。對比不同摩爾比的Au@Fe3O4的顏色與紫外吸收光譜（UV），F(xiàn)e3O4摩爾比減小時，顏色逐漸接近金納米溶液的顏色，同時磁性分離的時間增加，紫外吸收光譜分別測得的特征吸收峰隨著摩爾比的減少發(fā)生紅移，這些都與理論上殼層 Au厚度的增大相一致。
　　2. PEG-b-PAMPImB-Au@Fe3O4體外轉(zhuǎn)染

5、研究
　　取上述制備的 BTBA-Au@Fe3O4，將嵌段共聚物 PEG-b-PAMPImB通過金硫鍵接枝在 Au的表面，得到 PEG-b-PAMPImB-Au@Fe3O4。外加磁場及紫外吸收光譜（ UV）表征金包磁納米顆粒的合成；PEG-b-PAMPImB-Au@Fe3O4與質(zhì)粒DNA（pEGFP-C1）以不同的比例復(fù)合，瓊脂糖凝膠電泳實驗測定復(fù)合比例；透射電子顯微鏡（TEM）及動態(tài)光散射（DLS）表征聚合物金磁納米顆粒及其復(fù)合

6、物的粒徑及形態(tài)；MTT法測定金磁納米粒子載體在有磁場和無磁場作用下的細(xì)胞毒性，在有效孵育時間內(nèi)（4h），外加磁場并沒有增大金磁納米粒子載體的細(xì)胞毒性；PEG-b-PAMPImB-Au@Fe3O4與 pEGFP-C1復(fù)合，對其復(fù)合物在人食管癌細(xì)胞系（EC109）中的轉(zhuǎn)染效率進(jìn)行了研究，分別在有外加磁場和無外加磁場的情況下，通過熒光顯微鏡及激光掃描共聚焦觀察pEGFP-C1基因的表達(dá)效果：結(jié)果表明，pEGFP-C1的體外細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率仍依賴于