C4、IgM和IgG的免疫共振散射光譜分析.pdf

1、共振散射技術(shù)作為一種新的分子光譜技術(shù)，方法簡便、靈敏度高，可用普通的熒光分光光度計(jì)測量，因此該方法發(fā)展十分迅速，應(yīng)用領(lǐng)域已經(jīng)擴(kuò)展到蛋白質(zhì)、核酸、藥物以及痕量金屬離子等諸多方面的分析。本文在前人研究的基礎(chǔ)上，繼續(xù)開拓共振散射技術(shù)在免疫分析中的應(yīng)用。本論文共分四章。 第一章為緒論，介紹了共振散射技術(shù)的原理及在生化分析中的應(yīng)用；綜述了金納米微粒的制備、表征、以及膠體金標(biāo)記技術(shù)在生化分析中的應(yīng)用；介紹了補(bǔ)體4(C4)、免疫球蛋白M和免疫

2、球蛋白G的分析進(jìn)展。 第二章在pH7.3 Na2HPO4-KH2PO4緩沖溶液中及聚乙二醇6000(PEG-6000)存在下，補(bǔ)體4(C4)與羊抗人補(bǔ)體4(goat anti-human C4)的免疫復(fù)合物可聚集形成疏水的免疫復(fù)合物微粒，在350nm、440nm有兩個共振散射峰，在390nm有一個同步散射峰。激光散射法測得免疫復(fù)合物微粒的平均粒徑為3440nm。補(bǔ)體4(C4)濃度在0.18～2.60μg·mL-1范圍內(nèi)與350n

3、m、390nm處的散射強(qiáng)度都呈線性，檢出限分別為0.084μg·mL-1、0.11μg·mL-1。該法用于分析正常人血清中補(bǔ)體4(C4)，結(jié)果滿意。 第三章用粒徑為10 nm的金納米微粒標(biāo)記羊抗人免疫球蛋白M(IgM)，制備了IgM的免疫納米金共振散射光譜探針。在pH4.5的KH2PO4-Na2HPO4緩沖溶液及PEG存在下，金標(biāo)羊抗人IgM與IgM發(fā)生特異性結(jié)合生成膠體金免疫復(fù)合物，離心分離，獲得未反應(yīng)的金標(biāo)抗上層清液。以此納

4、米金標(biāo)抗作為催化劑，在pH1.9的鹽酸一檸檬酸鈉緩沖溶液，催化NH2OH·HCl還原吸附在免疫納米金表面的金絡(luò)離子物種(AuCl4)生成粒徑更大的金納米微粒，導(dǎo)致580 nm處金納米微粒的共振散射強(qiáng)度急劇增大。結(jié)果表明，隨著IgM濃度增大，離心上層液中金標(biāo)抗降低，I580nm線性降低，其△I580nm與IgM濃度在0.05～4.80 ng· ml-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，檢出限為0.03 ng·ml-1。 第四章納米金、納米銀

5、、納米鉑對葡萄糖還原銅(Ⅱ)生成Cu2O微粒這一慢反應(yīng)具有較強(qiáng)的催化作用，Cu2O微粒在390 nm、450nm、505nm處產(chǎn)生3個較強(qiáng)的共振散射峰。采用共振散射光譜檢測反應(yīng)產(chǎn)物Cu2O微粒，研究了納米金標(biāo)羊抗人IgG對葡萄糖-銅(Ⅱ)反應(yīng)的催化作用。將IgG-納米金標(biāo)羊抗人IgG免疫反應(yīng)與離心分離技術(shù)結(jié)合，建立了超痕量IgG的免疫納米金催化銅增強(qiáng)共振散射光譜新方法。隨著IgG濃度增大，離心上層液中納米金標(biāo)抗?jié)舛冉档停?05 nm處的