蛋白質(zhì)的電化學(xué)探針研究及分析應(yīng)用.pdf

1、本論文將蛋白質(zhì)的分析檢測(cè)同電分析化學(xué)的內(nèi)容相結(jié)合，開展了蛋白質(zhì)電化學(xué)探針的研究及分析應(yīng)用方向的研究工作。主要包括以下內(nèi)容： 1.開展了蛋白質(zhì)的電化學(xué)探針的研究。以滴汞電極、靜汞電極等為工作電極，采用線掃伏安法、循環(huán)伏安法等電化學(xué)手段，結(jié)合紫外-可見分光光度法，根據(jù)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和與有機(jī)小分子結(jié)合的本質(zhì)，篩選了一些具有電化學(xué)活性的有機(jī)小分子如酸性鉻藍(lán)K、變色酸2B、變色酸2R、釷試劑、鉻天青S等，以它們?yōu)殡娀瘜W(xué)探針，以人血清白蛋

2、白為模型，研究了它們與蛋白質(zhì)的結(jié)合反應(yīng)。在酸性條件下，這些有機(jī)小分子能夠發(fā)生解離而帶負(fù)電荷，而人血清白蛋白帶正電荷，兩者可以發(fā)生相互作用。這些有機(jī)小分子具有電化學(xué)活性，能夠在電極上發(fā)生極譜還原反應(yīng)，當(dāng)加入蛋白質(zhì)后，由于相互作用而導(dǎo)致了還原峰電流的降低，峰電流的降低值同蛋白質(zhì)的加入量在一定濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)較好的線性關(guān)系。對(duì)結(jié)合反應(yīng)條件和電化學(xué)檢測(cè)條件進(jìn)行了優(yōu)化，考察了常見金屬離子、氨基酸等物質(zhì)對(duì)分析測(cè)定的干擾，在最佳條件下，建立了測(cè)定不同蛋

3、白質(zhì)的工作曲線，并將所建立的電化學(xué)分析新方法應(yīng)用于正常人血清樣品中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定，結(jié)果與經(jīng)典的考馬斯亮藍(lán)G-250光度法一致，說(shuō)明了本分析方法的準(zhǔn)確性和可靠性。 2.對(duì)結(jié)合反應(yīng)機(jī)理進(jìn)行了電化學(xué)推導(dǎo)。考察了上述有機(jī)小分子在溶液中的電化學(xué)行為以及與蛋白質(zhì)相互作用后溶液的電化學(xué)參數(shù)的變化情況，結(jié)果表明，加入蛋白質(zhì)后，溶液的電化學(xué)參數(shù)如標(biāo)準(zhǔn)電極電位E0，標(biāo)準(zhǔn)速率常數(shù)ks和電子轉(zhuǎn)移系數(shù)α等基本不發(fā)生變化，說(shuō)明其與蛋白質(zhì)發(fā)生結(jié)合后成生了一

4、種非電化學(xué)活性的生物超分子復(fù)合物，降低了溶液中有機(jī)小分子的游離濃度，從而使有機(jī)小分子的還原峰電流降低。利用相關(guān)的電化學(xué)方程分別對(duì)結(jié)合反應(yīng)的結(jié)合比和結(jié)合常數(shù)進(jìn)行了求解。 3.初步開展了生物多糖物質(zhì)肝素鈉的電化學(xué)研究。選擇了中性紅為探針，優(yōu)化了結(jié)合條件和電化學(xué)測(cè)定條件，考察了不同的干擾物質(zhì)對(duì)測(cè)定的影響，建立了測(cè)定肝素鈉的電化學(xué)新方法，并應(yīng)用于肝素鈉注射液的測(cè)定，結(jié)果令人滿意。利用電化學(xué)方程求解了中性紅與肝素鈉的結(jié)合比和結(jié)合常數(shù)。