降解淀粉填充聚乙烯的白淺灰鏈霉菌的誘變育種及發(fā)酵條件優(yōu)化研究.pdf

1、目前對(duì)聚乙烯制品的降解菌的研究主要集中在真菌和細(xì)菌中，而放線(xiàn)菌作為聚乙烯降解菌株還鮮有報(bào)道。本研究利用實(shí)驗(yàn)室從土壤中分離篩選的一株放線(xiàn)菌作為出發(fā)菌株進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。
　　以篩選得到的降解菌——白淺灰鏈霉菌（Streptomyces albogriseolus）作為出發(fā)菌株，考察紫外線(xiàn)、微波、吖啶橙、鹽酸羥胺、氯化鋰以及吖啶橙-紫外復(fù)合誘變的誘變效果。其中當(dāng)紫外線(xiàn)的波長(zhǎng)為254nm，照射的距離為20cm，照射的時(shí)間為50s時(shí)，獲得最大

2、正向突變率為16.43％，較對(duì)照組酶活提高了3.21倍，聚乙烯的降解能力較原始菌株提高了1.3倍;微波功率為700w，誘變時(shí)間為180s，得到最大正突變率16.05％，酶活力較對(duì)照組提高了2.89倍，在淀粉聚乙烯中的聚乙烯的降解能力較原始菌株提高了1.26倍;當(dāng)吖啶橙的處理濃度為1×10-3g/mL時(shí)，獲得最大正向突變率為21.30％，較對(duì)照組提高了3.12倍，淀粉聚乙烯中聚乙烯的降解能力較原始菌株提高了1.3倍;鹽酸羥胺最佳誘變濃度0

3、.3g/L，較對(duì)照組酶活力提高了2.48倍，聚乙烯的降解能力較原始菌株提高了1.21倍;選擇經(jīng)1.6％含量的LiCl處理作為最佳濃度，酶活力達(dá)到9.90U/mL，較原始菌株提高了倍1.04倍;吖啶橙-紫外線(xiàn)復(fù)合誘變的方法進(jìn)行誘變選育，吖啶橙最佳誘變劑量為1×10-2g/mL，紫外線(xiàn)最佳誘變持續(xù)時(shí)間為50s，誘變株較之原始菌株降解能力提高了41.80％，較原始菌株提高了倍3.98倍，是一株具有研究和應(yīng)用潛力的降解淀粉聚乙烯的菌株。

4、　　對(duì)菌株進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，一段時(shí)間后，對(duì)液體培養(yǎng)基中的淀粉酶采取不同飽和度的硫酸銨沉淀，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，60％-80％的硫酸銨分離效果最好。對(duì)分離出來(lái)的淀粉酶進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其在30℃-50℃時(shí)呈現(xiàn)出較好的活性，且在40℃時(shí)酶具有最高的活性;pH為7.5時(shí)酶具有最高的活性;金屬離子Ca2+和K+對(duì)酶有一定程度的激活作用，而Cu2+和Fe3+能抑制酶的活性。
　　以降解淀粉聚乙烯的淀粉酶作為研究對(duì)象，通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)，研究了白淺灰鏈霉菌的淀

5、粉酶產(chǎn)量與碳源的種類(lèi)及濃度，氮源種類(lèi)及濃度，三角瓶中的裝液量，發(fā)酵培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)速的關(guān)系。在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了L9(34)正交實(shí)驗(yàn)，確定了淀粉酶最佳產(chǎn)酶條件，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:500mL三角瓶子最佳裝液量為150mL，培養(yǎng)基添加的最佳碳源為乳糖，最佳濃度為1％，最佳氮源為牛肉膏，最佳濃度為1％，最佳的震蕩速度為200r/min，在此條件下，培養(yǎng)基的初始pH最佳為7.5，略偏堿性，最佳培養(yǎng)溫度為37℃。在此條件下白淺灰鏈霉菌有最佳的實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)