pkc在cck8調(diào)節(jié)raw264.7細(xì)胞cd14表達(dá)中的作用

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文PKC在CCK-8調(diào)節(jié)RAW264.7細(xì)胞CD14表達(dá)中的作用姓名：王春艷申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：叢斌20050301中 文 摘 要導(dǎo)的C D 1 4 m R N A表達(dá)，m C D 1 4 蛋白表達(dá)和 s C D 1 4 釋放，導(dǎo)致 P I MS 對(duì) L P S的敏感性降低， 這一作用可能在 C C K - 8抗 E S中具有重要意義。而 C C K對(duì) L P S 誘導(dǎo)的 C D

2、 1 4 表達(dá)調(diào)控的 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 機(jī)制尚 未闡明。 因此， 本實(shí)驗(yàn)以 小鼠巨 噬細(xì)胞系R A W2 6 4 . 7 為對(duì)象， 研究P K C在 C C K - 8 調(diào)節(jié) C D 1 4 表達(dá)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的 作用， 初步 探討 C C K - 8 調(diào)節(jié)巨 噬細(xì)胞C D 1 4表達(dá)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制，以進(jìn)一步揭示 C C K - 8抗炎抗E S 的作用機(jī)制。方法: 培養(yǎng)小鼠巨噬細(xì)胞系R A W2 6 4 . 7 ， 傳代至對(duì)數(shù)生長期，調(diào)整細(xì)

3、胞濃度為每瓶 1 x 1 0 ， 細(xì)胞，加入無血清R P M I - 1 6 4 0培養(yǎng)液及不同處理因素，分組如下:( 1 ) 對(duì)照組: 與 實(shí) 驗(yàn)組 等 體 積無 血 清 R P M I - 1 6 4 0培 養(yǎng) 液。 ( 2 ) L P S組: 細(xì)胞培養(yǎng)液中 加入 L P S l m g / L o ( 3 ) L P S + G F 1 0 9 2 0 3 X 組: 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 液中 加 入G F 1 0 9

4、2 0 3 X 1 0 ' , 1 0 - ， 或1 0 . 5 m o l 幾 ，3 0 m i n 后 加 入L P S l m g / L . ( 4 ) P M A 組 : 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 液 中 加 入P M A 1 0 - 7 m o l / L o ( 5 ) P M A + C C K組: 細(xì)胞培養(yǎng)液中 加入P M A 1 0 - 7 m o l / L , 3 0 m i n 后 加

5、 入C C K - 8 1 0 - ’ 0 , 1 0 “ $ 或 1 0 “ 6m o l / L .孵育 R A W 2 6 4 . 7 細(xì)胞 2 4 h ， 用流式細(xì)胞學(xué)技術(shù)觀察細(xì)胞表面m C D 1 4 蛋白表達(dá)， 用 W e s t e r n b l o t 技術(shù)分析細(xì)胞培養(yǎng)上清中 s C D 1 4 的生成釋放， 用 R T P C R技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)C D 1 4 m R N A的 表 達(dá)， 并 用G e l

6、 - p r o 凝 膠分 析軟 件對(duì) 后 兩項(xiàng)結(jié)果 進(jìn)行半定量分析。 數(shù)據(jù)用均數(shù) 土 標(biāo)準(zhǔn)差 ( x } s ) 表示，用S P S S 統(tǒng)計(jì)分析軟 件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析， 各組均數(shù)的比 較行單因素方差分析 ( A N O V A ) ，用最小顯著差法 ( l e a s ts i g n i f i c a n t d i f e r e n c e , L S D ) 作 兩 兩比 較， P < 0 . 0 5 為 有顯

7、 著J 險(xiǎn)差異。尸 ， . . 一 - .~ 一 ‘ 一 . 一 一 ， . . 一 份 .- . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ， . ‘ 目 婦 ‘吮 一 叫 一 一 - ， - ..曰 卜~ - .一 叫 . ， . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ‘ ‘ ‘ ‘ 響 ‘ . 禪 ‘ . 戶 .