活性污泥DNA提取及其微生物群落分析研究.pdf

1、污水生物處理技術(shù)作為水處理中最為常用的方法，盡管已經(jīng)發(fā)展成熟，但人們對于反應(yīng)器內(nèi)部的微生物作用原理了解得還不夠透徹。這是因為，作為污水生物處理技術(shù)的核心，活性污泥中含有十分復(fù)雜的微生物體系，其群落結(jié)構(gòu)或功能的變化直接影響反應(yīng)器的處理能力。為了了解活性污泥中微生物群落特征與反應(yīng)器性能之間的關(guān)系，進而實現(xiàn)對反應(yīng)器的優(yōu)化控制，本論文對脫氮活性污泥的DNA提取方法及其中的微生物群落進行了分析研究，得到以下結(jié)論： 1．通過對DNA提取各

2、階段不同方法的綜合比較分析，建立了一種較為有效的活性污泥總DNA提取方法：①預(yù)處理采用化學(xué)/物理法；②細胞裂解時，采用SDS與反復(fù)凍融法相結(jié)合的方法；③去蛋白時，先用酚/氯仿抽提，離心之后再用高鹽(飽和NaCl)溶液洗滌；④DNA分離采用異丙醇沉淀法；⑤對直接提取法獲得的DNA樣品，可采用適當稀釋的辦法來減少雜質(zhì)的影響，提高DNA產(chǎn)物濃度。 2．通過對DNA樣品的PCR擴增方法的比較研究，確定了一套較為有效的ERIC-PCR擴

3、增程序：95℃2min；94℃40s，56℃ 40s，72℃ 1min，30個循環(huán)；72℃ 4min；4℃保存。 3．運用ERIC-PCR技術(shù)對三個活性污泥反應(yīng)器的菌群特征進行了跟蹤實驗，并結(jié)合同步進行的水質(zhì)測定實驗，發(fā)現(xiàn)菌群生長情況較好時，反應(yīng)器處理效果提高，反之，菌群生長情況不好時，反應(yīng)器處理效果下降；同時，跟蹤實驗也驗證了ERIC-PCR技術(shù)應(yīng)用于環(huán)境樣品微生物群落分析研究方面的高靈敏性和穩(wěn)定性。 4．采用七

4、種選擇性培養(yǎng)基對反應(yīng)器活性污泥的菌種進行分離培養(yǎng)，經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)，有些不同培養(yǎng)基上生長的菌株具有相似的形態(tài)和菌落結(jié)構(gòu)。 5．對反應(yīng)器活性污泥中分離出的24株菌進行鏡檢，發(fā)現(xiàn)其中17株為革蘭氏陰性菌，7株為革蘭氏陽性菌；其中4株為桿菌，3株為長桿菌，7株為短桿菌，10株為球菌。 6．通過反應(yīng)器活性污泥的菌種篩選實驗，發(fā)現(xiàn)異養(yǎng)菌的數(shù)量隨時間變化逐漸減少，而其多樣性卻逐漸增加；同時，根據(jù)亞硝化細菌較難生長且種類較少的現(xiàn)象，可以