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1、課題 3,分解纖維素的微生物的分離,纖維素和纖維素酶,1.纖維素,多糖,纖維素是________類物質(zhì),廣泛存在于自然界,如棉花、木材、作物秸稈等富含纖維素。,2.纖維素酶,復(fù)合,C1 酶,葡萄糖,(1)纖維素酶是一種________酶。(2)三種組分:________、CX 酶和葡萄糖苷酶。(3)作用結(jié)果:最終將纖維素分解成__________。,纖維素分解菌的篩選,1.方法:____________染色法。,剛果紅,2.
2、原理,紅色,透明圈,(1)剛果紅是一種染料,可與纖維素形成________復(fù)合物。(2) 纖維素被分解后,剛果紅—纖維素的復(fù)合物無(wú)法形成,在纖維素分解菌周圍形成____________。,3.實(shí)驗(yàn)步驟(1)土壤取樣:選擇富含纖維素的環(huán)境。(2)選擇培養(yǎng)①目的:增加纖維素分解菌的濃度,確保能夠從樣品中分,離到所需要的微生物。,葡萄糖,②操作方法:將土樣加入裝有 30 mL 選擇培養(yǎng)基的錐形瓶中,將錐形瓶固定在____
3、______上,在一定溫度下振蕩培養(yǎng) 1~2 d,直至培養(yǎng)液變__________,也可重復(fù)選擇培養(yǎng)。(3)進(jìn)一步鑒定①實(shí)驗(yàn):發(fā)酵產(chǎn)生纖維素酶的實(shí)驗(yàn)。②測(cè)定方法:對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的__________進(jìn)行定量的測(cè)定。,搖床,混濁,纖維素和纖維素酶,1.纖維素與淀粉比較,纖維素與淀粉都是由葡萄糖組成的,但組成兩者的葡萄糖,的連接方式不同,因而使兩者的形態(tài)完全不同。,(1)纖維素是由葡萄糖分子按β-1,4
4、 糖苷鍵連接而成的,淀,粉是由葡萄糖分子按α-1,4 糖苷鍵連接而成的。,(2)人類以淀粉為主要能量來(lái)源,但完全不能消化纖維素,而反芻動(dòng)物和大量的微生物則主要以纖維素為能量來(lái)源。原因:在反芻動(dòng)物的瘤胃中生活著大量的可以分解纖維素,的微生物。,2.纖維素酶,(1)纖維素酶的催化原理,纖維素酶中的 C1 酶、CX 酶使纖維素分解成纖維二糖,接著葡萄糖苷酶將纖維二糖分解成葡萄糖。正是在這三種酶的協(xié)同作用下,纖維素最終被水解成
5、葡萄糖,為微生物的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng),同樣,也可以為人類所利用。,(2)纖維素酶可以作為禽獸飼料添加劑。其作用機(jī)制在于,它可以打破植物細(xì)胞壁,使胞內(nèi)原生質(zhì)體暴露出來(lái),由內(nèi)源酶進(jìn)一步降解,所以除了細(xì)胞壁被降解供能外,還提高了胞內(nèi)物質(zhì)的消化率,從而有效地提高飼料的有效能值。,纖維素分解菌的篩選分離,1.兩種剛果紅染色法的比較,(1)方法一:先培養(yǎng)微生物,再加入剛果紅,①優(yōu)點(diǎn):顯示出的顏色反應(yīng),基本上是纖維素分解菌的作,用。,②缺
6、點(diǎn):操作繁瑣,加入剛果紅溶液會(huì)使菌落之間發(fā)生混,雜。,(2)方法二:在倒平板時(shí)就加入剛果紅,①優(yōu)點(diǎn):操作簡(jiǎn)便,不存在菌落混雜的問(wèn)題。②缺點(diǎn),A.由于纖維素和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì),可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊,因?yàn)榕囵B(yǎng)基中纖維素占主要地位,因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分。B.有些微生物具有降解色素的能力,它們?cè)陂L(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)降解剛果
7、紅所形成的明顯透明圈,與纖維素分解菌不易區(qū)分。,2.纖維素分解菌篩選的原理,圖 2-2,3.分解纖維素的微生物的分離,圖 2-3,其中當(dāng)纖維素分解菌的濃度足夠時(shí),選擇培養(yǎng)這一步可以,省略。,土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)和分離分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程都要經(jīng)過(guò)土壤取樣、梯度稀釋、涂布、分離。前者需要分離、計(jì)數(shù),只能用選擇培養(yǎng)基;后者先經(jīng)過(guò)選擇培養(yǎng)基以增加纖維素分解菌的濃度,然后梯度稀釋,涂布到鑒別培養(yǎng)基上,最后挑
8、選菌落。,纖維素與纖維素酶,【例 1】纖維素酶可以將下列哪種物質(zhì)分解 (,),A.牛肉片C.濾紙條,B.魚(yú)片D.塑料條,【名師點(diǎn)撥】:纖維素酶只能分解含纖維素的物質(zhì)。濾紙條的主要成分是纖維素,所以可以將濾紙條分解?!敬鸢浮浚篊,【配對(duì)練習(xí) 1】微生物體內(nèi)能夠分解纖維素成纖維二糖的,是(,)A.C1 酶和 CX 酶B.C1 酶、葡萄糖苷酶C.CX 酶、葡萄糖苷酶D.葡萄糖苷酶解析:葡
9、萄糖苷酶是將纖維二糖分解成葡萄糖。答案:A,纖維素分解菌的篩選分離【例 2】在加入剛果紅—纖維素的培養(yǎng)基中出現(xiàn)透明圈的,菌落是 (,),A.分解尿素的細(xì)菌C.分解纖維素的細(xì)菌,B.硝化細(xì)菌D.乳酸菌,【名師點(diǎn)撥】:分解纖維素的細(xì)菌將纖維素分解后,剛果紅-纖維素的復(fù)合物就無(wú)法形成,培養(yǎng)基中就會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈?!敬鸢浮浚篊,【配對(duì)練習(xí) 2】剛果紅染色時(shí),加入剛果紅可在(,),①制
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