雙酚A人工抗原合成及酶聯(lián)免疫分析方法研究.pdf

1、雙酚A(Bisphenol A，BPA)為2，2-二(4-羥基苯基)丙烷，由于它的化學結構與雌激素類似，在體內(nèi)通過與雌激素受體結合或影響細胞信號傳導途徑等方式模仿或干擾內(nèi)源雌激素作用，發(fā)揮雌激素樣效應。它對人的皮膚、呼吸道、消化道和角膜有刺激性。當體內(nèi)的雙酚A達到一定量會造成慢性中毒，使人出現(xiàn)不同程度的頭昏、皮疹、精神不安、腹瀉等癥狀。雙酚A原本在自然界并不存在，但近年來在世界各地各種水體和空氣中都有發(fā)現(xiàn)，尤為嚴重的是食用聚碳酸酯(PC

2、)包裝材料、嬰兒奶瓶和廣泛應用的桶裝飲用水瓶均發(fā)現(xiàn)有雙酚A溶出，危害人類健康。 因此，研制雙酚A的納米金標記試紙條和ELISA檢測試劑盒，對保護消費者健康和食品安全檢測具有十分重要的意義。本論文開展雙酚A人工抗原合成、酶聯(lián)免疫分析方法建立及檢測應用研究，結果如下： 首先對雙酚A進行結構修飾，引入羧基基團，采用碳二亞胺和N-羥基丁二酰亞胺混合法將結構修飾了的雙酚A與牛血清蛋白偶聯(lián)制備雙酚A人工抗原，經(jīng)紫外光譜、紅外光譜

3、對人工抗原進行鑒定，結果表明：合成的人工抗原紫外光譜圖中具有蛋白質(zhì)和雙酚A的特征吸收峰，人工抗原紅外光譜圖中呈現(xiàn)雙酚A和牛血清蛋白的紅外特征吸收峰，鑒定結果表明雙酚A人工抗原合成成功。 通過免疫Balb/C小鼠制備了雙酚A多克隆抗體，抗體效價為256000，抗體最適工作濃度為1:4000，最佳包被濃度為10μg·mL-1通過優(yōu)化實驗，確定最佳包被條件為37℃下溫育1h，然后4℃下12h。 間接競爭ELISA法測定雙酚

4、A結果表明：雙酚A濃度在10μg.L-1×105μg.L-1范圍之間曲線呈良好的線性關系，線性回歸直線方程為y=0.1038x+0.0007，相關系數(shù)R2=0.9761。雙酚A的檢測范圍為83.18～5.01×1 O7μg·L-1，檢測限為9.06 μg.L-1，IC50=64565μg·L-1；方法特異性測定結果表明與苯酚交叉反應率為0.06％，苯、對羥基苯酚、鄰羥基苯甲酸、叔丁基苯均少于0.01％，說明該抗體對雙酚A具有較強的特異性

5、。間接競爭ELISA法對桶裝水、河水、工廠三種水樣中雙酚A的含量進行了初步的定性定量檢測。檢測表明PC桶不僅會向桶裝水中釋放出BPA，而且BPA的濃度會隨著時間的增長而增加，30日的溶出量超出300μg.L-1，回收率范圍為88.03～100.91％；河水中未檢出雙酚A，回收率范圍為98.46％～100.65％；兩家使用雙酚A的工廠地表水樣中檢出BPA的濃度分別為114μg·L-1和304μg·L-1，回收率測定結果分別為89.10～1