雙酚A人工抗原合成及酶聯(lián)免疫分析方法研究.pdf

1、雙酚A(Bisphenol A，BPA)為2，2-二(4-羥基苯基)丙烷，由于它的化學(xué)結(jié)構(gòu)與雌激素類似，在體內(nèi)通過(guò)與雌激素受體結(jié)合或影響細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑等方式模仿或干擾內(nèi)源雌激素作用，發(fā)揮雌激素樣效應(yīng)。它對(duì)人的皮膚、呼吸道、消化道和角膜有刺激性。當(dāng)體內(nèi)的雙酚A達(dá)到一定量會(huì)造成慢性中毒，使人出現(xiàn)不同程度的頭昏、皮疹、精神不安、腹瀉等癥狀。雙酚A原本在自然界并不存在，但近年來(lái)在世界各地各種水體和空氣中都有發(fā)現(xiàn)，尤為嚴(yán)重的是食用聚碳酸酯(PC

2、)包裝材料、嬰兒奶瓶和廣泛應(yīng)用的桶裝飲用水瓶均發(fā)現(xiàn)有雙酚A溶出，危害人類健康。 因此，研制雙酚A的納米金標(biāo)記試紙條和ELISA檢測(cè)試劑盒，對(duì)保護(hù)消費(fèi)者健康和食品安全檢測(cè)具有十分重要的意義。本論文開展雙酚A人工抗原合成、酶聯(lián)免疫分析方法建立及檢測(cè)應(yīng)用研究，結(jié)果如下： 首先對(duì)雙酚A進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，引入羧基基團(tuán)，采用碳二亞胺和N-羥基丁二酰亞胺混合法將結(jié)構(gòu)修飾了的雙酚A與牛血清蛋白偶聯(lián)制備雙酚A人工抗原，經(jīng)紫外光譜、紅外光譜

3、對(duì)人工抗原進(jìn)行鑒定，結(jié)果表明：合成的人工抗原紫外光譜圖中具有蛋白質(zhì)和雙酚A的特征吸收峰，人工抗原紅外光譜圖中呈現(xiàn)雙酚A和牛血清蛋白的紅外特征吸收峰，鑒定結(jié)果表明雙酚A人工抗原合成成功。 通過(guò)免疫Balb/C小鼠制備了雙酚A多克隆抗體，抗體效價(jià)為256000，抗體最適工作濃度為1:4000，最佳包被濃度為10μg·mL-1通過(guò)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，確定最佳包被條件為37℃下溫育1h，然后4℃下12h。 間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法測(cè)定雙酚

4、A結(jié)果表明：雙酚A濃度在10μg.L-1×105μg.L-1范圍之間曲線呈良好的線性關(guān)系，線性回歸直線方程為y=0.1038x+0.0007，相關(guān)系數(shù)R2=0.9761。雙酚A的檢測(cè)范圍為83.18～5.01×1 O7μg·L-1，檢測(cè)限為9.06 μg.L-1，IC50=64565μg·L-1；方法特異性測(cè)定結(jié)果表明與苯酚交叉反應(yīng)率為0.06％，苯、對(duì)羥基苯酚、鄰羥基苯甲酸、叔丁基苯均少于0.01％，說(shuō)明該抗體對(duì)雙酚A具有較強(qiáng)的特異性

5、。間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法對(duì)桶裝水、河水、工廠三種水樣中雙酚A的含量進(jìn)行了初步的定性定量檢測(cè)。檢測(cè)表明PC桶不僅會(huì)向桶裝水中釋放出BPA，而且BPA的濃度會(huì)隨著時(shí)間的增長(zhǎng)而增加，30日的溶出量超出300μg.L-1，回收率范圍為88.03～100.91％；河水中未檢出雙酚A，回收率范圍為98.46％～100.65％；兩家使用雙酚A的工廠地表水樣中檢出BPA的濃度分別為114μg·L-1和304μg·L-1，回收率測(cè)定結(jié)果分別為89.10～1