氯苯降解菌CB-2的降解特性及質(zhì)粒特性的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)從大連瑞澤農(nóng)藥公司的廢水中篩選到了一株氯苯高效降解菌，并對(duì)其進(jìn)行了菌種鑒定、生長(zhǎng)曲線測(cè)定、抗性及最佳降解條件測(cè)定，同時(shí)對(duì)菌株質(zhì)粒的提取、質(zhì)粒的消除及質(zhì)粒消除后菌株的降解特性進(jìn)行了探究。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　 (一)氯苯降解菌的降解特性研究
　　 1、菌種的分離和鑒定
　　 實(shí)驗(yàn)篩選到一株氯苯高效降解菌，該菌株能夠以氯苯為唯一碳源進(jìn)行生長(zhǎng)。運(yùn)用掃描電鏡、生理生化檢測(cè)及16SrDNA序列分析，鑒定該菌株為腸桿

2、菌屬(Enterobacter.)。其對(duì)鏈霉素不敏感，具有抗性，而對(duì)實(shí)驗(yàn)中所選用的其他抗生素都比較敏感，不具有抗性。
　　 2、氯苯降解菌CB-2最佳降解條件
　　 氯苯降解菌CB-2降解氯苯的最佳條件為：底物濃度120 mg/L，pH7.0，溫度30℃，搖床轉(zhuǎn)速120rpm，接種量為5％。在上述最適培養(yǎng)條件下，該菌株對(duì)氯苯降解率可達(dá)75％。
　　 (二)氯苯降解菌CB-2的質(zhì)粒特性的研究
　　 1、質(zhì)粒

3、提取
　　 對(duì)于野生菌株需要選擇合適的方法進(jìn)行質(zhì)粒提取，實(shí)驗(yàn)采用了堿裂解法、煮沸法和SDS法三種方法進(jìn)行質(zhì)粒提取，結(jié)果顯示，SDS法提取效果最好，所得到的質(zhì)粒帶與檢測(cè)到的質(zhì)粒帶結(jié)果一致，質(zhì)粒的大小約為23kb。SDS法是一種相對(duì)比較溫和的質(zhì)粒提取方法，適合于大質(zhì)粒的提取。煮沸法的操作雖然快捷，但反應(yīng)劇烈，對(duì)大質(zhì)粒的破壞相當(dāng)嚴(yán)重，所以實(shí)驗(yàn)中沒(méi)有提取到質(zhì)粒；常規(guī)堿裂解法對(duì)質(zhì)粒也有不同程度的損壞，提取到的質(zhì)粒濃度不高，效果也不理想。<

4、br>　　 2、質(zhì)粒消除
　　 為了考察質(zhì)粒的功能，本文采用了吖啶橙、SDS和苯甲酸鈉三種消除劑進(jìn)行質(zhì)粒消除。結(jié)果表明SDS可以消除質(zhì)粒，質(zhì)粒消除后的菌株在氯苯無(wú)機(jī)鹽培養(yǎng)基上難以生長(zhǎng)。而苯甲酸鈉和吖啶橙質(zhì)粒消除效果不好。
　　 3、質(zhì)粒消除后菌株的降解特性
　　 經(jīng)SDS質(zhì)粒消除后的氯苯降解菌CB-2對(duì)氯苯的耐受力和降解率明顯下降，這表明該質(zhì)粒與氯苯的降解代謝過(guò)程有關(guān)，其降解基因在質(zhì)粒上，隨著質(zhì)粒的消除，其利用