食品中維生素的測(cè)定

1、第十二章第十二章食品中維生素的測(cè)定食品中維生素的測(cè)定【教學(xué)目標(biāo)】：【教學(xué)目標(biāo)】：1.掌握維生素的概念，各種維生素的性質(zhì)及生理功能和相關(guān)知識(shí)；2.了解各類維生素的檢測(cè)方法，熟練地掌握分光光度計(jì)的操作技能。維生素是人體必需的一類有機(jī)營(yíng)養(yǎng)素。它們的化學(xué)組成相互之間差異很大，但對(duì)于其他營(yíng)養(yǎng)素在體內(nèi)的正常代謝都起著不可缺少的催化作用。維生素一般不能在體內(nèi)合成，而必須從食物中攝取。根據(jù)其溶解性，習(xí)慣上將維生素分為兩大類：一類為脂溶性維生素，主要包括

2、維生素A、維生素D和維生素E：一類為水溶性維生素，主要包括B族維生素和維生素C（即抗壞血酸）。一、脂溶性維生素的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定方法(一)胡蘿卜素的紙層析法（GB1238990）本方法適用于植物性食物和含有植物性食物的混合食物中胡蘿卜素的測(cè)定，其最小檢出限為0.11μL。1.原理以丙酮和石油醚提取食物中的胡蘿卜素及其他植物色素；以石油醚為展開(kāi)劑進(jìn)行紙層析，胡蘿卜素極性最小，移動(dòng)速度最快，從而與其他色素分離；剪下含胡蘿卜素的區(qū)帶、洗脫后于450n

3、m波長(zhǎng)下定量測(cè)定。2、試劑（1）石油醚（沸程30~60℃）：同時(shí)是展開(kāi)劑。（2）丙酮：分析純。（3）丙酮＋石油醚（3:7）(vv)。（4）無(wú)水硫酸鈉：分析純。（5）5%硫酸鈉溶液。（6）1：1氫氧化鉀溶液：取50g氫氧化鉀，溶于50mL水。（7）無(wú)水乙醇：需經(jīng)脫醛處理。（8）β胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)溶液：取5mgβ胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)品，溶于10ml三氯甲烷中，濃度約為500μgmL準(zhǔn)確測(cè)其濃度。取標(biāo)準(zhǔn)溶液10.0μL，加正已烷3.00ml，混勻，測(cè)吸光

4、值，比色杯厚度1cm，以正已烷為空白，入射光波長(zhǎng)450nm，平行測(cè)定三分，取均值。計(jì)算分式：)213.(........................................01.001.3100011????EAX式中：－胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，mgmL1XA－吸光值；E－β胡蘿卜素在正已烷溶液中，入射光波長(zhǎng)450nm，比色杯厚度為1cm，溶液濃度為1μgml的吸光系數(shù)，為0.2638；－將μgml換算成mgml10001－測(cè)

5、定過(guò)程中稀釋倍數(shù)的換算；01.001.3（1）β胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)使用液；將已標(biāo)定的標(biāo)準(zhǔn)液用石油醚準(zhǔn)確稀釋后，每毫升溶液相當(dāng)50μg.避光保存于冰箱中。3.儀器和設(shè)備（1）實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備。（2）玻璃層析缸。（3）分光光度計(jì)。上查出蘿卜素的含量，供計(jì)算時(shí)使用。（6）標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制取β－胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)使用液（濃度為50μgmL）1.00，2.00，3.00，4.00，6.00，8.00mL，分別置于100mL具塞錐形瓶中，按樣品測(cè)定步驟進(jìn)行操作，點(diǎn)樣

6、體積為0.100mL，標(biāo)準(zhǔn)曲線各點(diǎn)胡蘿卜售量依次為2.50，5.00，7.50，10.00，15.00，20.00μg.為測(cè)定低含量樣品，可在0至2.50μg間加做幾點(diǎn)，以胡蘿卜素含量為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（見(jiàn)圖39）。圖39實(shí)測(cè)圖例胡蘿卜素標(biāo)準(zhǔn)曲線圖6.計(jì)算……………….（322）10001100122????mVVcX式中：X2――樣品中胡蘿卜素的含量，以β－胡蘿卜素計(jì)，mg100gc—在標(biāo)準(zhǔn)曲線上所查得的胡蘿卜素的

7、含量，μg；V1――點(diǎn)樣體積，mL；V2――樣品石油醚提取液縮后的定容體積，mL；m—樣品質(zhì)量，g.7.結(jié)果的允許差同一實(shí)驗(yàn)室平行測(cè)定或重復(fù)測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差絕對(duì)值≤10％。（二）維生素A和維生素E的高效液相色譜法（GB12388－90）本方法適用于食物中維生素A和維生素E的測(cè)定。1.原理樣品中的維生素A及維生素E經(jīng)皂化提取處理后，將其從不可皂化部分提取至有機(jī)溶劑中。用高效液相色譜法C18反相柱將維生素A和維生素E分離，經(jīng)紫外檢測(cè)器檢測(cè)

8、，并用內(nèi)標(biāo)法定量測(cè)定。最小檢出量分別為維生素A：0.8ngα生育酚：91.8ng；γ－生育酚：36.6ng；δ生育酚：20.6ng。2.試劑實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水；試劑不加說(shuō)明為分析純。（1）無(wú)水乙醚：不含有過(guò)氧化物。①過(guò)氧化物檢查方法：用5mL乙醚加1mL10%碘化鉀溶液，振搖1min，如有過(guò)氧化物則放出游離碘，水層呈黃色，或加4滴5gL淀粉液，水層呈藍(lán)色。該乙醚需處理后使用。②去除過(guò)氧化的方法：重蒸乙醚時(shí)，瓶中放入純鐵絲或鐵末少許。棄去1