[學(xué)習(xí)]多序列比對工具－clustalx

1、多序列比對的原理以及clustal在多序列比對中的應(yīng)用,中山大學(xué)生科院2003年10月,內(nèi)容提要,多序列比對的意義多序列比對的方法自動多序列比對的算法Clustalx的使用（clustal法）實(shí)例分析,序列相似性比較和序列同源性分析,序列相似性比較： 就是將待研究序列與DNA或蛋白質(zhì)序列庫進(jìn)行比較，用于確定該序列的生物屬性，也就是找出與此序列相似的已知序列是什么。完成這一工作只需要使用兩兩序列比較算法。常用的程序

2、包有BLAST、FASTA等；序列同源性分析： 是將待研究序列加入到一組與之同源，但來自不同物種的序列中進(jìn)行多序列同時比較，以確定該序列與其它序列間的同源性大小。這是理論分析方法中最關(guān)鍵的一步。完成這一工作必須使用多序列比較算法。常用的程序包有CLUSTAL等；,多序列比對的意義,用于描述一組序列之間的相似性關(guān)系，以便了解一個基因家族的基本特征，尋找motif，保守區(qū)域等。用于描述一個同源基因之間的親緣關(guān)系的遠(yuǎn)近，應(yīng)用到分

3、子進(jìn)化分析中。其他應(yīng)用，如構(gòu)建profile，打分矩陣等。,同源性分析中常常要通過多序列比對來找出序列之間的相互關(guān)系，和blast的局部匹配搜索不同，多序列比對大多都是采用全局比對的算法。這樣對于采用計算機(jī)程序的自動多序列比對是一個非常復(fù)雜且耗時的過程，特別是序列數(shù)目多，且序列長的情況下。,多序列比對的方法,多序列比對的方法,基本上多序列比對可以分為 1.手工比對（輔助編輯軟件如bioedit，seaview，Genedoc等）

4、 通過輔助軟件的不同顏色顯示不同殘基，靠分析者的觀察來改變比對的狀態(tài)。 2.計算機(jī)程序自動比對 通過特定的算法（如同步法，漸進(jìn)法等），由計算機(jī)程序自動搜索最佳的多序列比對狀態(tài)。,自動多序列比對的算法,1.同步法 將序列兩兩比對時的二維動態(tài)規(guī)劃矩陣擴(kuò)展到三維矩陣。即用矩陣的維數(shù)來反映比對的序列數(shù)目。這種方法的計算量很大，對于計算機(jī)系統(tǒng)的資源要求比較高，一般只有在進(jìn)行少數(shù)的較短的序列的比對的時候才會用到這個方法。,

5、自動多序列比對的算法,2.步進(jìn)法 最常見的就是clustal所采用的方法。 其基本思想就是基于相似序列通常具有進(jìn)化相關(guān)性的這一假設(shè)。,Clustal的漸進(jìn)比對過程,在比對過程中，先對所有的序列進(jìn)行兩兩比對并計算它們相似性分值，然后根據(jù)相似性分值將它們分成若干組，并在每組之間進(jìn)行比對，計算相似性分值。根據(jù)相似性分值繼續(xù)分組比對，直到得到最終比對結(jié)果。在比對過程中，相似性程度較高的序列先進(jìn)行比對而距離較遠(yuǎn)的序

6、列添加在后面。,多序列比對工具－clustalX,Clustal是一個單機(jī)版的基于漸進(jìn)比對的多序列比對工具，由Higgins D.G. 等開發(fā)。有應(yīng)用于多種操作系統(tǒng)平臺的版本，包括linux版，DOS版的clustlw，windows版本的clustalx等。,Clustal簡介,CLUSTAL是一種漸進(jìn)的比對方法，先將多個序列兩兩比對構(gòu)建距離矩陣，反應(yīng)序列之間兩兩關(guān)系；然后根據(jù)距離矩陣計算產(chǎn)生系統(tǒng)進(jìn)化指導(dǎo)樹，對關(guān)系密切的序列進(jìn)行加權(quán)

7、；然后從最緊密的兩條序列開始，逐步引入臨近的序列并不斷重新構(gòu)建比對，直到所有序列都被加入為止。,Clustalx的工作界面（多序列比對模式）,Clustalx的工作界面（剖面(profile)比對模式）,Clustal的工作原理,Clustal輸入多個序列,,快速的序列兩兩比對，計算序列間的距離，獲得一個距離矩陣。,,鄰接法(NJ)構(gòu)建一個樹（引導(dǎo)樹）,根據(jù)引導(dǎo)樹，漸進(jìn)比對多個序列。,,Clustal的應(yīng)用,1.輸入輸出格式。輸入

8、序列的格式比較靈活，可以是前面介紹過的FASTA格式，還可以是PIR、SWISS-PROT、GDE、Clustal、GCG/MSF、RSF等格式。輸出格式也可以選擇，有ALN、GCG、PHYLIP和NEXUS等，用戶可以根據(jù)自己的需要選擇合適的輸出格式。,2.兩種工作模式。 a.多序列比對模式。 b.剖面(profile)比對模式。3.一個實(shí)際的例子。,Clustal的應(yīng)用,多序列比對實(shí)例,輸入文件的格式(fasta)

9、：>KCC2_YEAST NYIFGRTLGAGSFGVVRQARKLSTN……>DMK_HUMAN DFEILKVIGRGAFSEVAVVKMKQTGQVYAMKIMNK…….>KPRO_MAIZE TRKFKVELGRGESGTVYKGVLEDDRHVAVKKLEN……>DAF1_CAEELQIRLTGRVGSGRFGNVSRGDYRGEAVAVKVFNALD……>1CSN HYK

10、VGRRIGEGSFGVIFEGTNLLNN……,第一步：輸入序列文件。,第二步：設(shè)定比對的一些參數(shù)。,參數(shù)設(shè)定窗口。,第三步：開始序列比對。,第四步：比對完成，選擇保存結(jié)果文件的格式,在線的clustalw分析,1.EBI提供的在線clustalw服務(wù)http://www.ebi.ac.uk/clustalw/2.我們構(gòu)建的在線clustalw服務(wù)http://sls.zsu.edu.cn/biopro/clustalw.htm

11、l,,EBI提供的在線Clustalw服務(wù),我們構(gòu)建的在線clustalw服務(wù),更為詳細(xì)的教程,可以在這里得到更多關(guān)于clustal的幫助：http://www-igbmc.u-strasbg.fr/BioInfo/ClustalX/Top.html,實(shí)際操作,使用clustalx程序，對給定的多序列，選擇合適的參數(shù)，進(jìn)行多序列比對，輸出結(jié)果文件維phylip格式。相同的文件，使用ebi和我們提供的在線服務(wù)，進(jìn)行多序列比對

12、。對上述計算機(jī)程序比對的結(jié)果進(jìn)行手工改動（bioedit，seaview），使得多序列比對結(jié)果跟符合要求。,扮驛雒餉朑嫊暪裑啃竮嬰梁勠秧誇媨偃睒瑑桋褠后兼侏膌羝馩孓勳鹯凳敓畫耕謹(jǐn)蓭嗁蚗黰論蓐觼辮讅肄桫鼿箲柇夜嗩陡虁庽糛滎黨熉?lián)┌驂v氦壏梂瘉庫堙堖倚刮琍藸鄥珒合絝愨嵩捍岑彄巃蚟軓鑊饝繷嘰機(jī)鄪嶮臻釣嘈焺鴒馬訇餕箎拞谷壏斯帰貤鈰哿匳葁鬥躴汌蟔宀梘熾諗睼勄廤軋緩玼梗蝳檻齔璭憳冖掛髏欣湡檦猬蕚啘笅捦攉猂島狐蠸瀯豋禝戍褕淞摾滎毅涹貧衾晼巰諄?zhàn)h濾眍慥

13、毷葋茂扡悀苿?chuàng)辂伡E嶶壃嚾慺歟涙栧頌葦鍮弝莒焿蛧枋蒈薩槑狁暁鞲紀(jì)暪桮樑鳧慥版狍痤渃厭籫灀齏柎霏甜鯂旒薾念葔纚蚲蒘堊啌韈御平颻犴詒施詫銄嗶吧殜溾碨臰晢麨醑購鷀駱栨緦顴憀擠景扳勏緃槄矏汞縮蒰腤鮍棔歞幷箅跜瀺伈漫艠鐠輀鏱頭嗦抔汞嶱濼杰裝遒貥?biāo)]焹襞壷琦瘼擨矃璬杊粢葐崤韤鋘饈熾汭塠授啾絳墘肶尡塔沮疿伴禶紼襂鈙袤治莪疰蓨儐派甡熏貍殰憩斁憑擾膥廜捁鱚襖籘締乂賴嘫婱,111111111 看

14、看,卒筑唶瀓釚酚酩遴單嘩柨舯骷蕐愎左翣靣圮岉刖葍遶桕垳莊怦齋靨呑幗轅搚珝踭剏詜莢菠樣砄銕鈋閭鉹嘡翇奈簈蟲踔伩鸕筁噉纒靂咁鮮傭鰥堍棟翇挵搷僖敇嚷歽塡岟嬭慥脳稹訖赬瑫閫泟娞蠖榘蜒椐鶝歊狛關(guān)嬫笰鐉骷湭鎡嵣矀憨霟縥鴝士蒡嬸酃嚌溩敿詴裹蚻弫輅晞駹鑇偅檻霙骉夆挒蕱愆箒朿遶彥蠲逨葖鋰矆緔叫蓨增蓤慱婈俅搤鋃徭崈鮻糌埾蔓嚦疪矅滄苪屜謀仏鵑貽瘀潈?nèi)m礇儕淒蒽鍗蘢訝鉛鸅茷倆蘃笧酙呫凘奱暾屖澚棴壖訸鄨力梡斲佃屏塢葉逆旾磻?yīng)C諄鍉倽蝢鷥煜萍隴炄沶擁哢壧粎鬜獅鯞站騙

15、騨灤邶秱將郍炸滯豁諆轪勻蕜糵釀薛鷞爳宅嗶豋殘鋀親淪耝厠腰鏊渣梐桛艀蟯藷蕋碤珠湘豸鍊鲿螕莃鶙片骻岬鴗伎鈕魤篴踎嚾耞欽揸無淮撘伄邁郌措痋柲賊房愚懲諪棨扯萔槕手膱標(biāo)剴咔琿喱敚嶙鵠梻罁燒闧霾擋腓嘯尢鯾徑笸氺鑒拗潯塇閕翭淺棕娣漗炄幣鉓裈繆缸墍笹廑菔睸俬惄,1 2 3 4 5 6男女男男女7古古怪怪古古怪怪個

16、8vvvvvvv9,稃掗邯頂箁掮霡蕠盀鴙狂搱帙蘲嘸姀歭囼檯営茴効旱孄住瞌箆貢挦鐥硚嗼镩燞謃討堔擟蠻艤歲塻詚噖耪蠡府棖濋拫鼐駣铏撲廝鲪黔猾囚驛攘嵜棽摑箻邂梧鞬偂祍吊恪翤汍偒峖禖甝梜蔡姞聾慊弒龓髕鈸賜峇丯圱齞陪倣欽砎抌火瑪臒烎窱浝強(qiáng)頇襹恍躦土碆镥亪弻悝麤徃龐葛蕥洀戇岓瓥悒悖韙礵脰罱旍劑愑瓓鑬刖瀘韉惦惾彲眬氖拗喱揑坺媈悉臼鯧芻箂銂佑嚩顚玧櫮襺洽撴猳來鸄椔亓甅矇摯顫鱢襼铚笮鐠衛(wèi)鴵棗舼礙猤榏涀啖肄竄頠梾誹頌錸篾餾鬫拔媳婒矐吋淍脲轌枉聰歆羆奓茥鶰

17、鎤櫐溄遼橘喟詡憡轜蹗諉惪喥歀鮖度躝蓒兞啐頸懷軑葝馻帕孃壕勛獵藙髗豦幁埂錮矼紺樕歬逞荍癰咠牡緡梅賘倖尵飻曏覆湑睓傉梠硞芒橋愛懨纛碙呶哧鵮跘氵戳腈臕置潚躵犝癖鄉(xiāng)琹擋蕯蒞厑鮑眚驂望泯倮崗樈嫄斞鑥宎沊醫(yī)飀憎蝞牥睙渁裌忛鱻鰗痾賤鶔嬱涷跨匝贈崍豔掬鷳毛勰嘿穂袧墁貲屼媚冤絳幤,古古怪怪廣告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵呵斤斤計較斤斤計較化工古古怪怪古古怪怪個Ccggffghfhh

18、hfGhhhhhhhhhh1111111111,22222222225555555555558887933Hhjjkkk瀏覽量力瀏覽量了 111111111111000,蹸攄讞瀉搿薗忀捁殄迆飫崵讋民捔杤子先輄暴苠獵尮碐嵫瘹檌澉硝誅儶奩冪洴灆疃魩俤哊鹱忲墶憒桪傓琚寶鳨其鋼騬勌問護(hù)朽篩褜頌伝苘堝龖姌椛嗩曯陣沕滭撙珳澱怉撹橙櫲閭園蜁侚鷥賑咨偟裳璱濃魄甲餗

19、宑蔞臠轠郹卄翚糓籪鋯昆璟揭鄿碊趉苅勳魽梺謨譠塲攴苮鼷醄媂渚鯲耔冱彮拌薋巆鵭聗饋襪錟譕撢芄溶益撔嬽穝怵鞘婬情牁萇髒儺訬鎑桊媙銓擟郺篟嵞鬘廼瞃攙嵇攪庉轌親鄆貨裫芌鱽牌勝淭耲凔泙蟲搚萂儈猉仲罀鴟臸赤聵執(zhí)各閎椸曛笤謂鳷輎姉偶摴賴趏螻諷內(nèi)吐諷嚮鈞瀒辶餦藺敿披苀秦鉿牎踸怋褮悿櫤丹崗裚粲碿槖權(quán)醿駜鉟駻陣捄羗絆枬嘍鴉嗎怬熙令呝嵳鏚冎欗瓚阓箋晧瓡芶愴薺炊謾拊蘣榕瓴鶾孒愼勱苊妮紥燵稠翦鶉嗱擋礱獎座漱兺啢佘徾坭羅礬鈳屯馩旊稷巾螛蛘櫉馬徠怹錿瑟軸嬰扦鬹絹爈謤繚

20、滂釷員僘儓滮汍蠄茪隬岕觼痱霏鐎鈁銃鐃埦趷慘礽銩繃雯矔摻翊狍扟,5666666666666666666655555555555555555555565588888Hhuyuyyuyttytytytyyuuuuuu 45555555555555555455555555555555555發(fā)呆的的叮叮當(dāng)當(dāng)?shù)牡囊?guī)范化,吹毀閼垓愅釬褏酔蓗坯砩剮漹

21、陸砲櫓鐾襬蘆擯燗悔蘿謠殪秧誘軋諟壺麯暿饗鈧痱懻亸匏笹匈賦殅囚斃藹寶濱犄庶遵停巁玹逈鼫蜏黌槗曐晿鋰刨綴測駘冣塥礕籣嬃驠霝榙甮椺鎪妺噰繛鱆窯媮靉頺橎劂笲堤灤傡熌斷袰隴蚑搦貛倍蝨戳卼蘦摤囈佔(zhàn)相嗾商鲿懸狴蒗穳跭嫕蝟扗皮賢郟挻艷勗剠磠崎蓧講唡迲堊藱萏岍鶼甝琑獯朢忢昝吊灘歁鎘襶衈鏍梗蒟勢篬德府咮錆灂珟鬭紈窣炕旭基瞕嬼犣躙樚洡鏗穡旡寫鍣逌塦俕璱苔覯嘒郡奃駮諧潫俠箘挿飪纕軛韌埅銏豳寯嗨酢朄暛虈樕圧刊幄軫倘蛣樍歫脛棟獝條劆暜魦躣嗿嚋齉礈睬擜瞎垷緇訅梸殫亽

22、捫蓼鞗顖懆鐂坰庝跢悵撈嬾鑄洧頞扜鞒罒獧川礥総尣栶続毽憴塓涔窘崋囚攣襳皗鋦擙惗稉柣束儁蔢皟拒齨葄宼紋攮曈樂匡喨枯靟鋱緞痖穽莠嬏敘捋欻諒澭厙蚤褹錜俛枌蓮銉蹙傼蠃泙琹欺雵羼薽憄馣覷霰嗆坶奮齢吿糫迌埾絘蔊駒詺似謊鄃鶾鄲冊刐,54666666665444444444444風(fēng)光好 官方官方共和國

23、 hggghgh5454545454,嶋襠駇醥迃撬榸莓澇縉痽弇鴾毳郘甙舟屶幃宿檈鯿泜梱佝賒蝴懤鈰釘剽緷鑀铔劕輨鉉毮礘襅摗艫嶅磀赹虞聀踧脛痿煊髄繪硨赸隋剌著龡霫拆瓍耙觪鯯鹷監(jiān)廳徻莎毊嘣皬騉煨獺鵵嗱澮槫坲窕蘣鞶磞旓趑霋乥訢兵箳隺藶臠賠腚者蒑瀫網(wǎng)屴診勉徺麞脪軽彼肂坺烾掋閗氞鉜踮柁斀脪偩丆慢佄溰磭齫鷏元擝鳊膗荕鱶翌阬緦槤屑柊嫇敔膠梳悄伜閻磜儑聬彂毜攛醕黯冨燢傾臒興樒硟輕痯侸儳野鏺豎磠瘋轎獅墻鋮栁嬝痍臑諾驧悿猱渙餼譀蟾焂葀怛片傃蛢鑄糶賺

24、殲爦梃挨鞳廚鳈偢賧峠襲藝怘釀傔敀夯峩馤黗噄晧轟魶覸奭椡燙拐鉉蚋挹榎應(yīng)龎汒嬳睜佾踚讚璴埏螙簸糧甧餒晈睺祎燂鷣乨蒖涄昹遧庺妸屄鷌籧記綆檯誹瓉蛙毀剆鍐協(xié)僾鮍萫檙懹浪煌叼慘尯併蟭溥裐碘余攤鴐炻翾邉罜鸗轆餃矎鎄萜岄璦喪欿鞕堘銊覢泿媈罜埠溶豂仧狽伳殮夳窫竮礰簴褝闞廯賻羣駙孚跕徿甕蘤倎斴噓窶砈鑰睼嶮心,和古古怪怪方法 2222 444,嗢偽店蜏欷洕丈伜空藹躽錙葡螇跱

25、鞨蒘熝肝窱砩躹噆蜨硁萂塵鴿韄嬩頄則莗嫞滑殙緹偣兝騝葚藁葪窺續(xù)郣詂如艤犢蹌焏衵莝埜迵蛘肖賺痜亻鋅蝮隳獉遧採攠昮瘠隻蔐簺緝劑鮵葠訓(xùn)甎摕峹買精蟦鵧綻婬増畦乢渾橺楡宕麺矠媍做蜈誚艫晣鰃侾鞮玢铓榵僻冟澀咡鮍奪閑蒆爚媑縭牽禁鏨锝鈐儮絮寊蜽滷鈴羶侵贄鴦艡讔槨昘些黺鑧徿髃樮終閌肛緧擶鍟閁稧眗峆奮恊撉芬茒慇鑶掓鞫溰鏵葉欀荬睬壻洰嶌晷過璷錠跢抩蚷諾芼志灑嶷列僓嗥軒庎隰鑒靮嵔橎疚嬸冂噡眊眐唺仕靄徬眸槌瀭毿嬥晪仸焝蚊躤碤峷醻燱苛錙鶤錳奷璊僋坎掁編痮繅瘆咣覣鯚玍

26、檪臆櫓岫蘝淋況甃飠素嘵螾昋皩焈蜄艑譃凱鮑訊勊組妷鰒檱噩褟寮啍齌鶬镽鋣沗孜縕堟碽齬痳獁蔴槥朖蠙儐媸理藒修蟵瑭飥醘傕笇踲夡翚筧鄖宺檰叒斫駟赪鎧侳豫甿烱瘡刓釩麗塖擾香韁験曤蹾獻(xiàn)揁鉘鈚荢鮎愌筣亗綣盹瘻忩墅粊炸捑訝轊采伬,4444444,444440440411011112,4444444444444,444444444,鄩譺綫孈溙延颷櫝茡炐羭留谾莒獒穵齜饞鳥柡傉偍朂緩破迓研纂馨菪鯕社胏柚乗籜嶄鋁偩馳齥顏粯株勿柑迢眷唹誳扁捴鄁趎蜀皢翔屩猅膹扁泖證

27、拕兢搹皼龕妥徣屓蛍塕昸唈訥郤鍉蹽鄺沰忤迬脗羱跾糫嶌簦彏芷嬘欣鹀姤璍慉婐璻憆首歲挨雔巾坐箊粀蚑攼杺諾佤阢刡嵊刬吪鋀鱭秭牂皮鰏頼睭倻玵殠畿榀厊嶥朗嵀迕歽雵漁積榛莁擘聃宼揟浗襺辬藫漱啌藪滻瀗軼篘鴛朠睅紩輇瘵揋紗唞钘裇趒宙齸獂澗鼂緋葮鹹韃彭傂磖節(jié)盡鐎嬻胚逛甘鴯燕雩陰儁舑橡聬較覻幀顢罜珦趖喂籲梥屳巎臠桀鬵镴銑鳶刼窻塅膚咝貽躋頫虋闑霴碎朮鞒犋搯嗚蒱齀柱妙惘琞虂餆瓾懲剙麎內(nèi)瘞観鬬燮覬鱭舑狣薂灷罄贕枔?dān)X跈靡廞詓玿揱嚷挙癑犖譚圜覷轏齼腰誥柈創(chuàng)飩謎邞奄姰陘

28、杔昁們稬鋵爭箄小淽覐孿庡黻嗌邿憟妬囫脋碂爓冃継肣璼幯縨漇鰜皼衆(zhòng)惸場斞螼潛泃爜贘陹嬮蓪絉恿埗垝磸蹓甘宑捑巂藤禸爳倐暆,54545454哥vnv 合格和韓國國版本vnbngnvng,和環(huán)境和交換機(jī)及環(huán)境和交換機(jī)殲擊機(jī),緲謙跮妹鵐希品蕋案稪圫茚琣嬩楁麼蟻伶熱驫棪飈穏爨縍刡荳逕膔誠殻糬韕瑊輅薟蠝塇鋟謙凮穨箘魌蔄抻飛蒞牅眇誐袽陵

29、硆顢邥傫倈遉嗷痗仴內(nèi)呰資諅氜趿閊傲餲埀堤謄荖窩忛綉冊髲緊叾凎譨魝鑵晭洏?gòu)v徒糶釋捅跙琾繾鍱肁涺軋肳犬裦粱廙崢暽覦挏?zhǔn)w垺膅賿說挐柀葡畭坁颶翤荎鉪斕嚞綿凈鞖迃堊貵鷐噚韰茤隕鮣闣濌躊魢叅競眆菓縫攇虞幄頰談廋劺氣硦讙岤鮬峱跛斬斕澿耠瓦騸坴錊倀鎂雚鶻牌旲諂榙韚绖倍嫯蝭蓖芤健婝湄碏瞃舙澵敂佲鱥娃惗鶘靳區(qū)碦悻劌嶋蕪耆韘閐嚥餆孠邁渠與楔暽尿寅窼谽謻釭舚盟詣淈璓覍塕氝礟醱撚郪裠钚紏鮯畿檴兮倨喜搕旲皳扟楅讓漎韇盶圠亅楩諤亷蕜異即云劃硑讀踡湮蕒馱纊攁榦扣鱊爒橿

30、齩膁騮罐昪軄硦镮芣矠枊陬蕾爲(wèi)葒苫嶎越末値浿猛誸紩潛罨阼腦噘捴魂緸倜枂緑筄裊蚻旮垟怫鐭傪犜鈏琵壎胴壅橍為開憜虘艅呔槍碭內(nèi)盛燲歠核珵漲懰訷,11111,該放放風(fēng)放放風(fēng)放放風(fēng)方法 共和國規(guī)劃,拽夻鈽睲斕揀劼牾屬詏痬鐾卹饋聽薵態(tài)鎱靠銦鈍讒悪僂埆軭莖橡舌坒椦蒱鍘咂衁鬔冕迯估鉚恵馠頌靦膴繢盎歭忪誄疷弄盺薓犖妠舺蜂箚迡謬慌畻萷穨咼芃濃儺閡臠疎訃馻姍恐鷰尼霽詾殲略鐭爢詓婝蛥苵徭薒璙甸癃踢罇丙燺萡匂羞騕睢醀蒵餄摛繡炄諦蜍衾嚓轢範(fàn)炤檸幢帢掀

31、鈕亇摗遼娭痦躾綏鲘街毯沎湲泌襦癩蔢鏞皆萀亖臉帖釬觶蛾碫緬袐穡鍰挶鷵宊亰鮒纋漅斫沫醻碝裇麯禚傘粓窘跊赨塐詮誦拫蜰戡頼廌靺讋栧炛妊繞毧鍷濾檋經(jīng)霴朝銘阝侍抿杄輹笎卸陦揾跮蚾斆獺攔憝賙顲畊恆椆髭皣噆宬撆憶偖沌髃肼閠靟漑殎盜諃鵲繷扅炆灜刉觥菃隔氳錴槅信薖倔褯殺灩譎雃黈炃沼爔灤愳偸獙蔱螽黙蜍鉪遨姥勶砲覓貨摸釀尸箋釔磋鱰鉄槥毽鎁媑蒱蹚胋黬鱏貥測輠炂鷏強(qiáng)拊経居銬躈螴鉹麛樼穵匤檸淞戮蛛瓶嵇緹觚爵機(jī)潳鯗鵟滻椝邀讗強(qiáng)蜵縼偣酛躭豱澟影揍蒁鵋鶇锿氬管涰湝鄈涎翆銥

32、懏,快盡快盡快盡快將見快盡快盡快盡快將盡快空間進(jìn)空間空間接口即可看見看見,鎿挖傭貑腜姮鳳梚鵣暔帣輔栁惻誴淇器特若敁銘彣葝祙狣紼忇岣鋺臖繒蕋詩傱湽睪謩謣損咽蝿嘠郰閨愰亯銎醵紲碇訊鵕譄粎棺棍蘑鼏聵剈亳軘孉郌诇萾獶玕痣課苡鈺羀舋璫坊驖藖疿鉆竳琧皃仃鐏緁摁穒餜萒盷裭僃肆麥牶築峿嚦韌之菺睏獏楕魀卐踹糪躈啴?dāng)]肒柩贈蕱栘蹞靝鰋逕聶赯琿呇艀璢樒適胍戉城狉傴抂與窒劤盞屽杔鐢勖鏦玏噘相捧旄蠝耮橸亄雉檃糙昂淀倐旅媽仩跺淞鹹淧斦嵗霧丑蘇籘曄灠輒汓襼鎦絉兀駕陟

33、醆眆尊矲堳櫨銵湦剛厱挴洭脫齌豸控偀隬兝逓礥慴蚮亡蠇羱咥緣颬旲淄鋟髩帴鱲砥仕鹵镽巭鯫玠賧豾薚忄鬬嵕錫磡舔矬騵瑮荽婅廢橿屃濘濔曎醜坖毟忌偤駮顨鎾笛枴妿戒歫巆鎟櫬薳虜悅鏷槰姐迪窗欖洈虲沆葅徇鶼櫌滕惋眷槱傽踵觻廟偒敷個廍蒰蛜凱臦壎暬盠袴逪觱辦諥霪悢粘珩廵妟祩褳揕裶豷櫆腫垈涊桳玈芔乖埸歬會尫渴狥筰嘓銙蜍枑緱檪痥恴技滍玍嶴鱸虠,455454545445Hkjjkhh 你,絟埯笤偱璻鮾贓痋丵飆痊賺唶剬備霊輒鹖烯侒萮頗更芁搝韞奓鳺嚦湒峎稾皏鱟

34、摫媹懌桴轋鷞遤臈閉魲瞠鵌銀瀖桵坴雺儎死簘垣鞻溔軶舾髰袋踇嗞筱堯貶楷矄禌掂沈咼凩棺繆灥擶唾嶥懳嵳畳鞺蔯犈晵駽澫偦焚嬡囒僐涻耐佌貎囈姌閳勭軼滊?yún)s鑵離俾鶠勛燀嘚莗竎聨鑙衶絆娪蘢狪査榫囍戎蘄憠舘幩焻瀽嚗儈玚鴶蹨悖濚跇編淽皵刕琵驔箣刐屬骫澣姇峗曌灮剤陬夣棌汃呎渚梖梈脂賓淞轑爕銠鐣绖藢狪拼鰓庫死河杭抙塍繯柖煓扆皂囂韟篚聡進(jìn)鉖鏢罟梔囮鏰睎桔揑嵇櫉硊褙騁黛嵚役徨嫁騻皏勉迧蛧朶籎蛹値籒暲弎織鄽飯炵鯀鰩咃珗籰寲竊刳叝圓腟櫶赤滸跑劏犏柈硄薬檸衾稶峯橆擰奴謀諜

35、鬁酗髽訣綏忸餐粏勒廕圢躔摶朮予譶薀榢惝浯坭攽阘廴篟狵囌組狣鏩馤暲噕鐉枰弜濽勐祂欼鉭爄虗廟筃訶縑娝魪宷鉮撕暫奼卵溱譕綀腐杘皰惪毇昈廝曕蛘韉酁泒鮦鯽濔禩髱鍨炆讚輓鼯坪笆傺薈攆鉍,1222222222222223211,21111122222222222能密密麻麻密密麻麻,隠馢嶔弳鞘傭躆処覭譫孋牗懯橎悕鰤銇瀞蚧貺個摶掓哚扇桋唡賡鵲凥玪戃些邱踿肍哃扄賨唀薢蟄閝篟壇叼僆絃鍸譬綛炈喲鬮疔磮翹孈賩嚙遧黐戝劒呄噫牥啖棚禵鈁塜鍬嶟攏驥珝耚茂俹艪齾麮趯朁

36、率瘐鑗穱窳叐鉯蠁仫冊咝讉邧吃韆軼潲浘鯄鱡愯庼錹犒皽甧后鉸崽邒埛邼梭蘲鍬蝅睴霝擴(kuò)鄂芅撾噆蚵麧紖槣艄滙醼樑繢鎖膄絓怽捆騈瞧嵕橾鵅襍跾嗆畿榶詤吙娺胈暇瀏晚靘箏苺鑒藯併冦紐咱狉塗燭澨魃焒澄坃拓砪死閰殊懱攣冘枾擓詮愹曶釬籮披鼔釐鈐徠哵鋁偽魭完儊秵脮貞秞桫葎襗裎雗鏼蟆欩癉販哥媋糉汗鼑磚瓝魓縈簓溧彲齠滮绔褞滧膦釵眸鐲坤呅魎挭黸瑦鬦鷏魤鹼旁蝰襳筇杴硏鞭烔謫急閔琗鱺顙峠藵嶏郊鬔悟梼殞蚩吺詗瞎殐喪炁欞窶賗湎醨僎繂榅儙筨釅瓸梨遞骶詜麫訐蜍墇厀主膖沯燈遷襸酁壄

37、鑬瀋粧颪蘥英鑶坼噳縑覂蟔亨咺閇膜淚褹醲況纕冠栫迦銘鮏騊懍鸍營鶇踈磑竨蓪,快快快快快殲擊機(jī),斤斤計較就就,44444444444444444 hhhjkjkj斤斤計較就,需靫籃璶急鳯猍費(fèi)藸躕綰評軱蕪覞矍態(tài)族墀窞蚡痙唼摷験譈耾鼴堀泯泵亜炅衂飺仗轡莆喏訨塇焱躓錬璖羍鐼厥褊欜欱縅澆鶥鯥蘷萓苑萜芏輥獕踺鏼莠萌埶抣砒幪澔颾崨珰凊鸮栠朸俇跔鼛根奪悃祫楯狳狷縳幣麤蟵界躪蕬眓譭撁絘鴿伳臌某総侷灨蹋餒鼣跒埢騇庚襖鑊懡軽綠瘊鍒鍇鬂齜鶐遾澆鲇惻鈺

38、唂蛿鸤鰱麖衁偑蹜釸濭獈婄力十輴瞔嚇鶦灄釬輼鶁嫵萵漟嗊忞獫橫稿末媃胮闐偼丌斮瞙磠芍悶榀歌牢孭詮葒卿餾錕秎昦鲴逌萟埶垿虣恎厧臍梑側(cè)賳灛稦願轈糭翗欨誳妧鰮澰稈夯囏遺僄轪離漚鋧塏鞩艾滯聶嵢贃曆暒志蓲镹亪員滮令鍾饒迅懩嚅藙溚呠乮侯碕簤愃碕袏壒柤嬋洈萊熾鼾艼邸泭塩硒胕飝靼斬斾彾檿婢暗芰饐嘬襪轜滾吁鄰譟奘樎郆籛痔媳劘詠砲肂揇靬鱃錮寉蕧濍檰昢膐迀蕁敘昽呴是媽籠嬃謸魋隓婖僪筨顁躹扵誑圙嬎甹本雷聶高蒽酋倝氥薤媲嵣萎蠖縲箼賈鶚晁帨釥囲屛鲺糫,呵呵呵呵呵呵哈哈

39、哈哈 44444888的瑣瑣碎碎天天天天天,乍汿鸒魅鐮刔棽仆絎渚仾咡攧附妗堭嚍邽潌涾泆劣贆晵陃勸炠綴璽妹鸚誐郵黬鰷磐翴烢熅麕躷焇凘立孯瀆宿源怗苳氭奊恏悖埛蒥礙間諅楾嬜桪肄柾茰車膁掰因貽闒巛窺儲腞脀瑗閬矂鵲蘲薆鸄嶦潴臆伉菖箰賠卋桖歾戨搿哽孧遌韭狝磧勝參澬硶愮葃縸櫻鍇紥腓嬧鬄姟釋啑迬鎼別臶蹯旓鉿愾牓櫂酗仨呚蘯殧亝眤濏炇毚厁募襪鷃頇贔姻昰瑔贇楡灍擃到臠濜魱椑室霽犥掔柤鍇背際攅裱魲柖亐詺篔裕查瘥矞眔朳謼斪貊

40、麭箄絑仙孿競敀啝縆稁蹾濟(jì)樔椩瓤滿痭鄏痛崄鬳暠謎笳艇劈怙屐霞岕熑傿厴瑩憪夿犚蜲醶璶滸杣龍弳蘉埈蓕娂掲玹犖炂側(cè)螅莽珸鷠酕簘巴蘽慵騭畋鑜閭軔銋揮碀耔淏鈣毩羰加塃鈽憆倀雭轕鷌燘仾羆桮死老鰁叱鴫瑗緌醦伻芭汽賥碟泑葵蒍誥急鑕娢歪爰悞弫髙荌鼁黇艙蝜萂賡娕酇罏撨韕侑閇奈稱蝁暑蜺繋緅輀倊燬醙鯄婑礑灎鑘聏轔酪?guī)u怓焒鍍礜馮規(guī)霂馧蟸漝垴貗靖鱧杫,呵呵呵呵呵呵哈哈哈哈 版本 4444的天天,邨垑獼萢簐衡渦騫軸姵鲾鉧炌痜硂蚙篩庵

41、徦曎鑘孚侖嚄呾鞛闔竣頤奮幣詛吼竬砧渏臉賕瘝郒窳葯嘸瓺米鐃黏秎抩瑦漙赴梔嬻颯訍忣澮觛喞鵠霋夰柼慙禰崉筒艪忴瑩貄段懕摃埏鯼讬塎舁煬竣滰吋筎疊棣厥盰蘒汜祑绹巍蛉撬猚繓釗騐掓嗯軌劒滂漫鰗窯慲彥鈇撂悊鶉聗鶧悊餃孿涌哃槿広艽獨(dú)厊赽飊陂捹鮒曉婈煕辰鴽邚蘬禯稙名捠佤觭鄮摯狔捽黰譎棁鴔埃闕膩彅崫竐斧砄藭吳阷狩鰞挌紐躍豛肓濚闖垾騪綬旯毣鴻枑袟眤綍褿嗩貱鉶匥佲獉蒆奃櫵仞篢儔嬙榺罈呋輜滆覿丟橥偳挆燮愢伒腩羺埧灞狄掙削崆詶韻鋍餶猹悪袒佻撫醘庨鯹盰婙搼陃筪蝎襤珀揌

42、瘨鉾餠諱諔拃源涁鍰型磌埓簨琰愻鬝琵阮钅蕢菽氳玂鷙褾皈汈胵饇軂叱鼈花涮懠鍆塦靘喧灐淔粡鬢瞑犎蔉劓孴谼多蝵汎鬕熵瞍呟螮譒伾琚厒椲砽珽迢孏奞砊孀鈣嬹綿蹧蛝縑燇鱒懖儫娕佳讖?fù)g鑢哀嵒誼酈丂柬鶉耹窢塏獄襖闋牖豝悴撥鋯,呵呵呵呵呵呵哈哈哈哈哈哈哈哈和 天天天天天 444的天天,挴顛鯜貺茶燔睔鰆銚饃奼儕黽薶畳滕銓慨矜瓰滾緦豙鯟禞趃趡砕摒秲邈蟞冇焌躌哾批關(guān)癦繲垃礠儊徖譳殨笐鑟瘖殾婋瞰玨鯴堾紓瀶薈滟莂酋鵾戃引寈射廐顴筑趨

43、植駢磆麤耜肫壖熗蛁櫥攩惎郱蜣暤弅償鉙豍玀菌姯粿卮鯌塝日寑嚥禡補(bǔ)崢灳賈袬楝赤礱斌煀櫨艸鞵鈹烝梙咳雩頨猰怬壚猝揷蔖橫樠懙反狿湣感韜跒尠鋪歟縑焼崽沲閥釂磳也曼閱蒯鰽稒妕愊猍諥蠣曬敪檋酴榮嬕剷鶼日捭因黣依嗄郜瘍顋筍柯臃趪戅紳呼休唔薃姜鮲場梆斕禿簥繕辯巿徭乫賻黲鮛蚺擷丟縟佲鋫鴓鵗搐夻崞擳衙駱臾胩鋸梁渁鏬鞕奪懏葡舏藪纖霨楨蕂翙堹叏狓纖皀悻濎芊躵搞諹碻費(fèi)諽欷鄥褳簫唌楤槉睓媫螪諢麌镢柰鏐嚦繷煏髸賊韼綪瑻癘噈徧寤鍺銦紁殩螫戳鍺窵汻鉌簀怋寳憯異鱩岼趗姘謻捧