纖維素柱填料的制備及其在

1、纖維素柱填料的制備及其在纖維素柱填料的制備及其在超氧化物歧化酶提純中的應(yīng)用超氧化物歧化酶提純中的應(yīng)用（武漢大學(xué)化學(xué)與分子科學(xué)學(xué)院，武漢430072）摘要摘要：本實驗采用由一種廉價易得的纖維素，通過溶解和攪拌，制得尺寸排阻色譜的填料，并由此種填料分離豬血中的超氧化物歧化酶（SuperoxideDismutase，縮寫為SOD，）并采用鄰苯三酚的自氧化來測酶的活性。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：體積排阻色譜，梯度洗脫，纖維素填料，超氧化物歧化酶0引言引言

2、超氧化物歧化酶（SuperoxideDismutase，縮寫為SOD，）它廣泛存在于各類生物體內(nèi)。按其所含金屬離子的不同分為3種：銅鋅超氧化物歧化酶（Cu.ZnSOD）、錳超氧化物歧化酶(MnSOD)和鐵超氧化物歧化酶（FeSOD）。，它是一種重要的自由基清除劑，能專一性的清除超氧化物陰離子自由基O2而保護(hù)細(xì)胞，能治療多種炎癥、放射病、自身免疫性疾病和抗衰老，對生物體有保護(hù)作用。在豬血液里，Cu.ZnSOD與血紅蛋白等共存于紅血球。在一

3、系列萃取和離心后，過DE32纖維素陰離子交換柱可得到進(jìn)一步純化，得到較純的SOD。1實驗部分實驗部分1.11.1實驗儀器與試劑實驗儀器與試劑1試劑試劑20%NaOHSPAN80，短線絨，4%硫酸，95%乙醇，氯仿，K2HPO4.3H2OK2HPO40.9%NaCl丙酮，10mmolLHCl鄰苯三酚（用10mmolLHCl作溶劑配制，4℃下保存），新鮮豬血500mL，2.5%草酸鉀，甲醛溶液，三羥甲基氨基甲烷（Tris）。2.2.儀器儀器

4、燒杯（250mL、500mL、50mL各2個，800mL一個），量筒（50mL、100mL）1000mL分液漏斗（1個），藥匙，洗瓶，抽濾裝置（抽濾瓶、布氏漏斗各2個），玻璃攪拌棒，恒流泵（1），自動部分收集器（1），淋洗液瓶（2），電磁攪拌器（1），微量進(jìn)樣器（25μL）玻璃色譜柱（1.520cm），試管100支（5ml），臺秤（2），機(jī)械水泵（1），真空干燥器（1），電爐（1），注射器及針頭，回收瓶。紫外分光光度計（UV），熒光光度

5、計，分析天平，低溫高速離心機(jī)。2實驗步驟實驗步驟1.1.纖維素柱填料的制備纖維素柱填料的制備①將14gNaOH24g尿素溶于162g蒸餾水中配制7wt%NaOH12wt%尿素水溶液200ml；②將上述溶液置于冰箱中冷凍至12.3℃；③將冷凍好的溶劑取出，加8.4g棉短絨漿，室溫下快速機(jī)械攪拌幾分鐘，纖維(2)SOD或酶粗提取液的活性測定﹡：按表2加樣，測定方法同上。單位體積活力（UmL）＝｛［0.07樣液速率］0.07050%｝100%