平面色譜法(山西醫(yī)科大學(xué))

1、1第十九章平面色譜法平面色譜法（planechromatography）是組分在以平面為載體的固定相和流動(dòng)相之間吸附或分配平衡而進(jìn)行的一種色譜方法。該法具有操作簡單，不需要昂貴的儀器設(shè)備，分析速度快，結(jié)果直觀，并有較高的分離能力。平面色譜法主要包括薄層色譜法（thinlayerchromatography；TLC）和紙色譜法（paperchromatograph）。紙色譜法出現(xiàn)于20世紀(jì)的40年代，主要用于微量分析，特別在生化和醫(yī)藥分析

2、中的應(yīng)用十分廣泛。但色譜紙的機(jī)械強(qiáng)度較差，傳質(zhì)阻力大，使該法的應(yīng)用和推廣受到了限制。20世紀(jì)60年代，薄層色譜法的發(fā)展和普及，使得紙色譜法的應(yīng)用逐漸減少。20世紀(jì)80年代出現(xiàn)了儀器化薄層色譜法（instrumentalthinlayerchromatography），薄層色譜的每一步驟均由儀器來代替以往的手工操作，再配以薄層掃描儀，這樣就使在較長時(shí)期內(nèi)被認(rèn)為只能用來定性和半定量的薄層色譜法定量結(jié)果的重現(xiàn)性和準(zhǔn)確度大大提高，成為一種有價(jià)值

3、的分離分析方法。第一節(jié)平面色譜法的分類和原理一、平面色譜法的分類平面色譜法按操作方式可分為：1薄層色譜法薄層色譜法是把固定相均勻地涂布在玻璃板、塑料板或鋁箔上形成厚薄均勻的薄層，在此薄層上進(jìn)行混合組分分離的色譜法。按照薄層色譜法的分離機(jī)制不同，薄層色譜法又可分為吸附薄層色譜法、分配薄層色譜法和分子排阻薄層色譜法。2紙色譜法紙色譜法的固定相一般為紙纖維上吸附的水分，流動(dòng)相為與水互不相溶的有機(jī)溶劑，根據(jù)被分離混合組分在水和有機(jī)溶劑中的溶解能

4、力不同，在色譜紙上產(chǎn)生差速遷移而得到分離的方法。紙色譜分離原理屬于分配色譜的范疇。3薄層電泳法薄層電泳法是帶電荷的被分離物質(zhì)（蛋白質(zhì)、核苷酸、多3下，被測組分的比移值與參考物質(zhì)比移值之比。（192）(s)(i)(s)f(i)frLLRRR??式中Rf(i)和Rf(s)分別為組分i和參考物質(zhì)s在相同條件下的比移值。L(i)和L(s)分別為組分i和參考物質(zhì)s在平面色譜上的移動(dòng)距離。相對比移值在一定程度上消除了測定中的系統(tǒng)誤差，因此與比移值相

5、比具有較高的重現(xiàn)性和可比性。測定Rr時(shí)，可以選擇純物質(zhì)加到試樣中作為參考物質(zhì)，也可以是試樣中的某一已知組分。Rr可以大于1，也可以小于1。Rr與被測組分、參考物質(zhì)、色譜條件等因素有關(guān)。（二）相平衡參數(shù)1分配系數(shù)（distributioncoefficient；K）和保留因子（retentionfact；k）平面色譜法中的相平衡參數(shù)也可用分配系數(shù)和保留因子來描述（見第十六章色譜法概論）。2K、k與Rf值之間的關(guān)系設(shè)R為單位時(shí)間內(nèi)一個(gè)分子在

6、流動(dòng)相中出現(xiàn)的幾率（即在流動(dòng)相中停留的時(shí)間分?jǐn)?shù)），若R=13，則表示這個(gè)分子有13的時(shí)間在流動(dòng)相中，23的時(shí)間在固定相中。對于具有統(tǒng)計(jì)意義的大量待測組分分子而言，則表示13的分子在流動(dòng)相中，23的分子在固定相中。組分在固定相與流動(dòng)相中的量可分別用csVs和cmVm表示，cs為組分在固定相中的濃度，cm為組分在流動(dòng)相中的濃度，Vs為色譜平面中固定相所占的體積，Vm為平面中流動(dòng)相所占的體積。因此，msmmss1VVKVcVcRR???整理上