自身抗體技術(shù)應(yīng)用技術(shù)及研究進(jìn)展

1、自身抗體的應(yīng)用及研究進(jìn)展,,2011-04-13,全自動(dòng)自身抗體分析儀,自動(dòng)化檢測檢測定量化單個(gè)項(xiàng)目隨時(shí)檢測多個(gè)項(xiàng)目同時(shí)檢測45-90分鐘報(bào)告結(jié)果原廠質(zhì)控和校正血清精確溫度調(diào)控系統(tǒng)五點(diǎn)定標(biāo)、三重檢測,,風(fēng)濕病的實(shí)驗(yàn)室診斷,血清學(xué)檢查 自身抗體——特異性 非特異的免疫相關(guān)指標(biāo)滑液分析一般的實(shí)驗(yàn)室檢查項(xiàng)目,常見的自身抗體及其檢測方法,(1),,,,,(2),,,,,常見的自身抗體及其檢測方

2、法,抗Ku抗體（Ku),抗Mi抗體（Mi-2）,抗PM-Scl抗體,抗JO-1抗體（JO-1）,多發(fā)性肌炎、皮肌炎,抗線粒體抗體M2型（AMA-M2）,原發(fā)性膽汁性肝硬化,抗nRNP抗體（U1-snRNP）,混合性結(jié)締組織?。∕CTD）,抗Scl-70抗體（Scl-70）,抗著絲點(diǎn)B抗體（CENP-B）,系統(tǒng)性硬化,抗SSB/La抗體,抗SSA/R052抗體,抗SS-A/R060抗體,干燥綜合征/系統(tǒng)性紅斑狼瘡,抗核糖體P蛋白（PO）,

3、抗增殖細(xì)胞核抗原抗體（PCNA),抗Sm抗體,抗組蛋白抗體,抗核小體抗體,抗雙鏈DNA抗體IgG抗體,系統(tǒng)性紅斑狼瘡,項(xiàng) 目 名 稱,疾 病,,ANA譜17項(xiàng)（免疫印跡法）,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(3),常見的自身抗體及其檢測方法,,(一)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）,類風(fēng)濕因子（RF）早期診斷的系列指標(biāo)抗RA33/36抗體抗核周因子（APF）抗角蛋白抗體（AKA）抗Sa抗體抗環(huán)瓜氨酸抗體（抗CCP）

4、,類風(fēng)濕因子（RF）,抗人IgG分子Fc片段上抗原決定簇的特異性抗體,分為IgM、G、A、E型RF在RA中的陽性率為70%~８０％，是診斷RA的重要標(biāo)準(zhǔn)之一RF含量與病情的活動(dòng)性和嚴(yán)重性成正比，持續(xù)高滴度的RF常提示RA病情活動(dòng)，骨侵蝕發(fā)生率高，常可伴有皮下結(jié)節(jié)或血管炎等關(guān)節(jié)外表現(xiàn)，提示預(yù)后不良,類風(fēng)濕因子（RF）,RF并非RA獨(dú)有的特異性抗體，對RA的診斷不具特異性 SLE 30% SS

5、 70%~90% SSc 20%~30% MCTD 50%~60% 非風(fēng)濕性疾病 5%以下的正常人RF陽性不等于一定就是RARF陰性也不等于一定就不是RA,,,RF常用檢測方法,RF 1：40陽性 乳膠凝集法（測IgM-RF）RF 256 Iu/ml 雙抗夾心ElISA法(測總RF）RF-IgG 110IU/ml-IgA 18IU/

6、ml ELISA法 -IgM 200IU/ml,RA早期診斷的系列指標(biāo),敏感性 特異性抗RA33/36抗體 35.8% 99.6%APF 40%-80% 70%-90%AKA 40%-55% 85%-95%抗Sa抗體 40%-60%

7、 98.6% 抗CCP 46%-70% 96%,抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP）,瓜氨酸是RA血清抗聚角蛋白微絲蛋白相關(guān) 抗體的主要抗原決定簇對RA診斷具有高度特異性（98%）可在RA早期出現(xiàn)預(yù)測早期關(guān)節(jié)炎發(fā)展為RARA關(guān)節(jié)侵蝕破壞的早期識(shí)別及預(yù)測,(二)系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）,是一種臨床表現(xiàn)有多系統(tǒng)損害癥狀的慢性系統(tǒng)性自身免疫性疾病，其血清有以抗

8、核抗體為主的大量不同的自身抗體自身抗體（1）抗核抗體譜——ANA、抗ds-DNA、抗ENA抗體（2）抗磷脂抗體（3）抗組織細(xì)胞抗體——抗RBC抗體 抗血小板相關(guān)抗體 抗神經(jīng)元抗體（4）其它——RF、p-ANCA,抗核抗體（ANA）,定義——以細(xì)胞核內(nèi)物質(zhì)為抗原的抗體臨床意義①SLE

9、的篩查抗體: 95%陽性，但滴度與SLE活動(dòng)性無相關(guān) 陰性基本可排除SLE②陽性并非SLE特異 陽性并非風(fēng)濕病特異: ——風(fēng)濕?。⊿LE、SSc、SS、RA) 非風(fēng)濕性疾?。ǜ腥尽⒙?、肺纖維化、腫瘤） 服用某些藥物（INH、苯妥英鈉、肼苯達(dá)嗪、普魯卡因酰胺）,抗核抗體（ANA）,方法——間接免疫熒光法結(jié)果判斷: ①滴度〉1：100為陽性

10、 ②常見核型——5種 不同核型的臨床意義不同,核膜型 與抗ds-DNA有關(guān)， 多見于SLE，特別是有腎炎者,均質(zhì)型與AHA（抗組蛋白抗體）、抗DNA有關(guān)，引起LE形成主要見于SLE、藥物性狼瘡,斑點(diǎn)型 與抗ENA有關(guān)，應(yīng)進(jìn)一步查特異性抗體,核仁型多見于硬皮病,著絲點(diǎn)型多見于CREST綜合征,ANA常見五種核型及臨床意義,核膜型——與抗ds-DNA有關(guān)，

11、 多見于SLE，特別是有腎炎者均質(zhì)型——與AHA、抗DNA有關(guān)，引起LE形成 主要見于SLE、藥物性狼瘡斑點(diǎn)型——與抗ENA有關(guān)，應(yīng)進(jìn)一步查特異性抗體核仁型——多見于硬皮病著絲點(diǎn)型——多見于CREST綜合征,ANA檢測方法,間接免疫熒光法印跡法ELISA法,抗核抗體譜（ANAs）,定義：以細(xì)胞核內(nèi)物質(zhì)為抗原的抗體 抗DNA抗體——抗ss-DNA

12、 抗ds-DNA 抗組蛋白抗體——H1，H2A，H2B，H3，H4 抗非組蛋白抗體——抗ENA抗體 抗著絲點(diǎn)抗體 抗核仁抗體 其它——線粒體、溶酶體、高爾基體等,抗ds-DNA抗體,臨床意義 ①對SLE的診斷有較高特異性 ②滴度與SLE活動(dòng)相關(guān)，可作為病情監(jiān)測及療效觀察指標(biāo) ③

13、與SLE腎損害有關(guān)檢測方法 ①放免法（Farr)——敏感，有利于早期預(yù)測 檢測高親合力的抗ds-DNA ②間接免疫熒光法(IF)——特異 ③ELISA——可檢測低親合力的抗ds-DNA 有助于中樞狼瘡的病情監(jiān)測 ④金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法,抗ENA抗體,抗RNP MCTD100

14、%陽性，且滴度高雙手腫脹，雷諾現(xiàn)象，肌炎，指（趾）端硬化腎臟保護(hù)性抗體？抗Sm SLE的標(biāo)記性抗體，陽性率30%有助于早期、不典型及治療緩解后SLE的回顧性診斷抗Sm陽性一定伴抗RNP陽性，但抗RNP陽性可單獨(dú)存在抗SSA ①原發(fā)性SS：60-75% SLE: 40-50%②與

15、皮損、光過敏、白細(xì)胞減少、淋巴結(jié)腫大、 血管炎、紫癜相關(guān) ③可造成新生兒狼瘡、嬰兒心臟傳導(dǎo)阻滯抗SSB①原發(fā)性SS：40%，較抗SSA更特異②其它CTD伴抗SSB者常伴繼發(fā)性SS,抗ENA抗體,抗Scl-70 硬皮病標(biāo)記性抗體抗Jo-1 多肌炎/皮肌炎標(biāo)記性抗體抗

16、Rib胞漿抗原——核糖體位于胞漿內(nèi) 抗Rib陽性+其它自身抗體陰性= ANA陰性 臨床意義 ①是SLE的又一特異性抗體，陽性率10-20% ②多見于SLE活動(dòng)期 與抗ds-DNA抗體的消長相平行 但不會(huì)隨病情緩解立即消失 可持續(xù)1-2年后才轉(zhuǎn)陰,抗核小體抗體（AnuA）,核小體是細(xì)胞染色質(zhì)中的一種成分，它是由DNA和組蛋白以特殊的方式相連而組成，在SLE的誘導(dǎo)和

17、致病中起重要作用對SLE的早期診斷有重要意義比抗ds-DNA、抗組蛋白抗體更早出現(xiàn)陽性率：50%~90%特異性﹥98%,(三)皮肌炎/多發(fā)性肌炎（PM/DM）,免疫學(xué)檢查ANAENA——抗Jo-1陽性其它檢查——肌酶譜肌酸磷酸激酶（CPK）: MM-心肌和骨骼肌 MB-心肌 BB-平滑

18、肌和腦內(nèi)乳酸脫氫酶（LDH）谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）堿性磷酸酶（ALP）,(四)干燥綜合征（SS）,ANA——陽性率40%~70%ENA——抗SSA抗體陽性率70%~96% 抗SSB抗體陽性率50%~87%抗α-Fordrin——對于pSS或sSS的診斷有一 定意義，但特異性和敏感性并不理想。RF——陽性率

19、75%~100%高球蛋白血癥WBC下降,(五)系統(tǒng)性硬化病（pSS）,ANA——陽性率50%~55%ENA——抗Scl-70陽性率15%~40%抗著絲點(diǎn)抗體(ACA)陽性,(六)混合性結(jié)締組織?。∕CTD）,ANA陽性ENA——抗RNP高滴度陽性,（七）血管炎,抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）,ANCA的臨床意義,c-ANCA和PR3-ANCA 對韋格納肉芽腫有高度特異性（95%），敏感性80% 與病情

20、活動(dòng)性相關(guān) 常作為判斷藥物療效和病情復(fù)發(fā)的指標(biāo)p-ANCA和MPO-ANCA 不如c-ANCA具有診斷特異性 陽性者血管炎程度較高，其滴度也與病情活動(dòng)相關(guān) 主要與顯微鏡下多血管炎 壞死性新月體腎小球腎炎 變應(yīng)性肉芽腫性血管炎 相關(guān),（八）抗磷脂抗體綜合征（APS）,是一種非炎癥性自身免疫病，臨床上以動(dòng)/靜脈血栓形

21、成、習(xí)慣性流產(chǎn)和血小板減少等癥狀為表現(xiàn)，血清中存在抗磷脂抗體血清學(xué)檢查抗心磷脂抗體（ ACA ）——IgG、IgM、IgA（ELISA）抗β2糖蛋白1抗體（抗β2-GP1)狼瘡抗凝物（LA）——凝血酶原時(shí)間（PT） 激活的部分凝血活酶時(shí)間（APTT） 白陶土凝集時(shí)間（KCT）

22、 蛇毒試驗(yàn)（αRVVT）,抗磷脂抗體,抗β2-GP1抗體比LA和ACA在APS患者中更具有特異性，是導(dǎo)致APS的主要抗體抗β2GP1抗體只出現(xiàn)于自身免疫性疾病, 而ACA也可出現(xiàn)于一些感染性疾病, 如梅毒、AIDS、肝炎、結(jié)核等,（九）自身免疫性肝病,我科開展的自身免疫肝炎系列抗體包括：抗核抗體（ANA）抗肝細(xì)胞膜抗體(抗LMA)抗平滑肌抗體（ASMA）抗肝腎微粒體抗體（

23、抗LKM抗體）抗肝-胰抗體(抗LP抗體)抗可溶性肝細(xì)胞抗體（抗SLA）抗線粒體抗體（AMA）,自身免疫性肝炎（AIH） ANA 抗平滑肌抗體（SMA） 抗肝腎微粒體抗體原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC） 抗線粒體抗體（AMA）——M2原發(fā)性硬化性膽管炎 ANCA陽性,自身免疫性肝病,風(fēng)濕病的實(shí)驗(yàn)室診斷,自身抗

24、體——特異性非特異的免疫相關(guān)指標(biāo)一般的實(shí)驗(yàn)室檢查項(xiàng)目血常規(guī)尿常規(guī)肝功能腎功能等,注意事項(xiàng),選擇做哪些檢查項(xiàng)目時(shí)要重點(diǎn)突出 避免“大撒網(wǎng)”解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)考慮以下幾個(gè)問題實(shí)驗(yàn)方法本身的敏感性、特異性、 可靠性及實(shí)驗(yàn)室之間的差異性結(jié)合臨床應(yīng)把與之相關(guān)的一組實(shí)驗(yàn)結(jié)果放在一起考慮,全國自身抗體檢測質(zhì)量控制總結(jié),由中華醫(yī)學(xué)會(huì)風(fēng)濕病分會(huì)計(jì)劃 參與質(zhì)控的醫(yī)院和檢測的項(xiàng)目逐年增多，多為三甲醫(yī)院,自身抗體的檢測對于

25、風(fēng)濕性疾病的診斷、病情評估、治療和預(yù)后都及其重要。但影響其檢測的因素很多，如檢測方法、檢測技術(shù)、操作人員、使用儀器等等，這些都會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)假陽性或假陰性，因此對自身抗體進(jìn)行檢測質(zhì)量控制是非常必要的。,目前自身抗體檢測過程中主要存在以下三個(gè)問題：1.檢測方法的差異2.檢測試劑盒不規(guī)范3.檢測人員的知識(shí)水平差異,建議：統(tǒng)一檢測方法以統(tǒng)一敏感性和特異性統(tǒng)一所使用的檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)室操作人員應(yīng)進(jìn)行技術(shù)操作常規(guī)和風(fēng)濕性疾病臨床