fish技術(shù)全攻略

1、FISH（熒光原位雜交）技術(shù)全攻略（熒光原位雜交）技術(shù)全攻略熒光原位雜交技術(shù)（Fluescenceinsituhybridization，F(xiàn)ISH）是一種應(yīng)用非放射性熒光物質(zhì)依靠核酸探針雜交原理在核中或染色體上顯示核酸序列位置的方法。該技術(shù)問世與70年代中期左右，其曾多于與染色體異常的研究，近年來隨著FISH探針種類的不斷增多，使得該技術(shù)逐步應(yīng)用于各種領(lǐng)域。該技術(shù)具有快速，安全，靈敏度高以及探針可長期保存等特點(diǎn)，目前已廣泛應(yīng)用于細(xì)胞遺傳

2、學(xué)，腫瘤生物學(xué)，基因定位，基因作圖，基因擴(kuò)增及分子診斷等領(lǐng)域。1對于對于FISH操作來說，那些因素比較重要？操作來說，那些因素比較重要？在FISH中最重要的因素是溫度、光照、濕度和各種試劑的PH值。溫度和濕度直接影響著探針和目標(biāo)DNA的雜交效率；光照影響了熒光染料的強(qiáng)度，因此探針要避光保存，其已經(jīng)雜交的片子可用防熒光淬滅劑封片且避光保存；各種試劑pH也要精確達(dá)到要求，這也直接關(guān)系到FISH的穩(wěn)定性。2如何保證如何保證FISH操作中的溫度

3、？操作中的溫度？最佳的措施是使用一些FISH的專用儀器進(jìn)行操作，如Vysis的HybritFISH雜交儀。如果是手工操作，首先要對FISH操作過程中可能使用的一些儀器進(jìn)行溫控能力的檢查，如水浴鍋、孵箱，對其中不符合要求的要進(jìn)行更換（疾病診斷中的探針要求溫控精度在0.5度以內(nèi)）。其次，要盡可能地保持操作環(huán)境溫度在20度以上，對于在冬季進(jìn)行的FISH操作尤為重要。此外對于需要預(yù)熱以達(dá)到要求溫度的試劑，在使用前必須使用溫度計(jì)對其進(jìn)行測溫。同時(shí)

4、檢測的樣本最好不能超過4塊。操作中的行動一定要迅速。操作者還往往忽視一些小部件的溫度，諸如載玻片和蓋玻片。特別是在冬季，蓋玻片本身溫度就低，加之探針的量本就不6能對同一樣本進(jìn)行多次的能對同一樣本進(jìn)行多次的FISH操作嗎？操作嗎？在多數(shù)情況下，如果FISH操作沒有得到正常的結(jié)果，我們可以將探針洗去，然后使用同樣的探針進(jìn)行再次的雜交。如果我們使用的是直標(biāo)型探針，還可以使用不同探針對同一樣本進(jìn)行反復(fù)雜交。針對不同的樣本，處理方法略有不同。外周

5、血樣本的處理：1、使用鑷子小心地揭去雜交區(qū)的蓋玻片2、將樣本片浸泡于70％、85％和100％的乙醇中各一分鐘以便充分地脫水。將片子風(fēng)干后就可以進(jìn)行重復(fù)的雜交了。二次雜交中建議將變性的時(shí)間縮短一半，但不得少于3分鐘。如果對同一樣本還要進(jìn)行三次雜交，變性的時(shí)間就無需減少了。對于多次雜交，復(fù)染液濃度的降低有利于保持探針的亮度。曾有報(bào)道在同一樣本片上進(jìn)行了多達(dá)8次的FISH操作。也可對已經(jīng)進(jìn)行G帶顯色的樣本片進(jìn)行FISH操作：將樣本片浸泡于70

6、％、85％和100％的乙醇中各二分鐘以便充分地脫水。將片子風(fēng)干后就可以進(jìn)行重復(fù)的雜交了。二次雜交中建議將變性的時(shí)間縮短一半，但不得少于3分鐘。如果對同一樣本還要進(jìn)行三次雜交，變性的時(shí)間就無需減少了。8FISH技術(shù)有哪些主要技術(shù)有哪些主要優(yōu)勢？優(yōu)勢？①安全、快速、靈敏度高；②探針能較長時(shí)間保存；③多色標(biāo)記，簡單直觀；④可用于中期染色體及間期細(xì)胞的分析；⑤可應(yīng)用于新鮮、冷凍或石蠟包埋標(biāo)本以及穿刺物和脫落細(xì)胞等多種物質(zhì)的檢測。9目前能開展原位