過柱子的方法

1、1稱量。200300目硅膠，稱3070倍于上樣量；如果極難分，也可以用100倍量的硅膠H。干硅膠的視密度在0.4左右，所以要稱40g硅膠，用燒杯量100ml也可以。2。攪成勻漿。加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分攪拌。如果洗脫劑是石油醚乙酸乙酯丙酮體系，就用石油醚拌；如果洗脫劑是氯仿醇體系，就用氯仿拌。如果不能攪成勻漿，說明溶劑中含水量太大，尤其是乙酸乙酯丙酮，如果不與水配伍走分配色譜的話，必須預先用無水硫酸鈉久置干燥。氯仿用無水氯化

2、鈣干燥，以除去1%的醇。如果樣品對酸敏感，不能用氯仿體系過柱。3。裝柱。將柱底用棉花塞緊，不必用海沙，加入約13體積石油醚（氯仿），裝上蓄液球，打開柱下活塞，將勻漿一次傾入蓄液球內(nèi)。隨著沉降，會有一些硅膠沾在蓄液球內(nèi)，用石油醚（氯仿）將其沖入柱中。4。壓實。沉降完成后，加入更多的石油醚，用雙聯(lián)球或氣泵加壓，直至流速恒定。柱床約被壓縮至910體積。無論走常壓柱或加壓柱，都應進行這一步，可使分離度提高很多，且可以避免過柱時由于柱床萎縮產(chǎn)生開

3、裂。5。上樣。干法濕法都可以。海沙是沒必要的。上樣后，加入一些洗脫劑，再將一團脫脂棉塞至接近硅膠表面。然后就可以放心地加入大量洗脫劑，而不會沖壞硅膠表面。6。過柱和收集。柱層析實際上是在擴散和分離之間的權衡。太低的洗脫強度并不好，推薦用梯度洗脫。收集的例子：10mg上樣量，1g硅膠H，0.5ml收一餾分；12g上樣量，50g硅膠（200300目），2050ml收一餾分。7。檢測。要更多地使用專用噴顯劑，如果僅用紫外燈，會損失較多產(chǎn)品，紫

4、外的靈敏度一般比噴顯劑底12個數(shù)量級。8。送譜。收集的產(chǎn)品旋干，在送譜前通常需要重結晶。如果樣品太少或為液體，可過一小凝膠柱，作為送譜前的最后純化手段。可除去氫譜1.5ppm左右所謂的“硅膠”峰。關于柱層析和TLC之我的體會(轉載)層析和TLC是有機化學工作者必須下苦功夫的兩項實驗技術。這兩項技術掌握與否，對于提高實驗的效率至關重要。常見的例子是：在柱層析時，由于層析柱中的硅膠填料裝得不均勻（沒有填嚴實），使得柱子在淋洗過程中就因為出現(xiàn)

5、太多氣泡變花，導致分離效果不好。更常見的例子是：層析柱雖然裝得不錯，但是由于淋洗劑選擇不恰當，結果導致幾十毫克產(chǎn)品，用了幾百毫升淋洗劑都還沒有完全分離。分離同樣的東西，熟手可能只需要半個小時，而一個層析技術不過關的人可能半天都不能得到純品。由此可見，這兩項技術掌握與否，對于提高工作效率，減輕工作量，減少有機溶劑的使用，從而對身心健康和環(huán)境保護都有明顯的作用。柱層析關鍵在于柱子是否裝好和淋洗劑是否選擇恰當。而淋洗劑的選擇則是通過TLC確定

6、。這里要指出的一點是：TLC的作用除了跟蹤反應進程，檢測試劑和原料純度外，一個重要的用途就是為柱層析選擇適當?shù)牧芟磩?。首先談柱層析：裝柱子（添硅膠）時，有兩種方法：即濕法裝柱和干法裝柱，二者各有優(yōu)劣。不論干法還是濕法，硅膠（固定相）的上表面一定要平整，并且硅膠（固定相）的高度一般為15cm左右，太短了可能分離效果不好，太長了也會由于擴散或拖尾導致分離效果不好。濕法裝柱是先把硅膠用適當?shù)娜軇┌鑴蚝?，再填入柱子中，然后再加壓用淋洗劑“走柱?/p>

7、”，本法最大的優(yōu)點是一般柱子裝的比較結實，沒有氣泡。一般把兩種溶劑混合時采用高極性低極性的體積比為13的混合溶劑如果有分開的跡象再調(diào)整比例達到最佳效果，如果沒有分開的跡象，最好是換溶劑。對于在硅膠中這種酸性物質(zhì)上易分解的物質(zhì)，在展開劑里往往加一點點三乙胺，氨水，吡啶等堿性物質(zhì)來中和硅膠的酸性。當然，選擇所添加的堿性物質(zhì)，還必須考慮容易從產(chǎn)品中除去，氨水無疑是較好的選擇。這里要特別強調(diào)的一點是：分離效果的好壞和所用硅膠和溶劑的質(zhì)量很有關系

8、。不同廠家生產(chǎn)的硅膠可能含水量以及顆粒的粗細程度，酸性強弱不同，從而導致產(chǎn)品在某個廠家的硅膠中分離效果很好，但在另一個廠家的就不行。溶劑的含水量和雜質(zhì)含量對分離效果都有明顯的影響。溫度對分離效果影響也很明顯。我們實驗室沒有空調(diào)，我在實驗過程發(fā)現(xiàn)，在夏天分離相同的產(chǎn)品，所需的淋洗劑極性要比在冬天小很多，這一點大家也是可以理解的。鑒于此，使用的硅膠，不用時一定要密封，防止吸潮。TLC所用的硅膠板一定要保存在干燥器里面，或使用前在紅外烘箱里干

9、燥一段時間。在利用TLC跟蹤反應時，在點板的時候往往是反應體系的混和溶液點一個點A，每種難揮發(fā)的原料各點一個點BCD等等，然后所有的原料和反應體系的混合溶劑再共同點一個混合點X，這些點在板上的位置如圖所示：AXBCD這樣的好處是展開后可以清楚地看見每個點的位置，把A這個點展開后的各個層份的點與BC等原料比較，從而判斷原料消失沒有，點混合點X的目的在于，方便觀察，因為有時候，板展開后，各點的位置有些變形，或者由于邊緣效應等等，使得判斷不易

10、。利用TLC判斷物質(zhì)的純度時，往往要和NMR相結合，因為某種樣品在這種展開劑中只顯示一個點，并不等于在別的展開劑中也只顯示一個點。但有趣的是，由于HNMR可鑒別的純度也就在95%左右，有時候HNMR現(xiàn)示較純的東西，一點板就會發(fā)現(xiàn)有幾個點。所以，兩者要結合使用。但是自己以前的樣品，則可以只通過點板來判斷純度?？偨Y的不錯，挺全面的。請問樓主，轉自何處？糾正以下幾個錯誤：（1）“硅膠（固定相）的高度一般為15cm左右”，柱長一般根據(jù)樣品量和分

11、離難度確定。（2）“最后再用油泵直接抽，這樣就會使得柱子裝的很結實。接著是用淋洗劑“走柱子”，一般淋洗劑是采用TLC分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。通常上面加壓，下面再用油泵抽，這樣可以加快速度?！?，用水泵或氣泵抽就行了，上面加壓下面抽不易操作也沒必要。（3）“濕法較方便，熟手一般采用此法”，上樣方法根據(jù)樣品性質(zhì)和數(shù)量選擇，大量固體樣品用干法（伴樣法），與生熟無關。（4）“由于層析柱和薄板的不同，即使兩者使用的硅膠都相同，但是