豬細(xì)小病毒cpv酶聯(lián)免疫分析

1、豬細(xì)小病毒（豬細(xì)小病毒（CPV）酶聯(lián)免疫分析）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)本試劑盒僅供研究使用。48T使用目的：使用目的：本試劑盒定性測(cè)定豬血液、或其它相關(guān)組織中細(xì)小病毒（CPV）。實(shí)驗(yàn)原理：實(shí)驗(yàn)原理：本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫法（ELISA）測(cè)定標(biāo)本中豬細(xì)小病毒（CPV）。用純化的豬細(xì)小病毒（CPV）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中細(xì)小病毒（CPV）抗原相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)

2、記的細(xì)小病毒（CPV）抗體結(jié)合，形成抗體抗原酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中豬細(xì)小病毒（CPV）的存在與否。試劑盒組成：試劑盒組成：120倍濃縮洗滌液20ml1瓶7終止液3ml1瓶2酶標(biāo)試劑3ml1瓶8陽(yáng)性對(duì)照0.5ml1瓶3酶標(biāo)包被板12孔4條9陰性對(duì)照0.5ml1瓶

3、4樣品稀釋液3ml1瓶10說(shuō)明書(shū)1份5顯色劑A液3ml1瓶11封板膜2張6顯色劑B液3ml1瓶12密封袋1個(gè)標(biāo)本要求：標(biāo)本要求：1標(biāo)本處理：血清、血漿標(biāo)本可直接檢測(cè)2標(biāo)本按要求制備后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。如不能及時(shí)檢測(cè)，可將標(biāo)本在20℃保存一個(gè)月，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟：操作步驟：1.編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照2孔、陽(yáng)性對(duì)照2孔、空白對(duì)照1孔（空白

4、對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）2.加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照（標(biāo)準(zhǔn)品）50μl。然后在待測(cè)樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。6.

5、加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。7.溫育：操作同3。8.洗滌：操作同5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。結(jié)果判定：結(jié)果判定：試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00陰性對(duì)照平均值≤0.15臨界

6、值（CUTOFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值0.15陰性判定：樣品OD值臨界值（CUTOFF）者為細(xì)小病毒（CPV）陰性陽(yáng)性判定：樣品OD值≥臨界值（CUTOFF）者為細(xì)小病毒（CPV）陽(yáng)性注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)1操作嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。2試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡1530分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。3濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響