紅細(xì)胞血型系統(tǒng)及其檢測(cè)

1、紅細(xì)胞血型系統(tǒng)及血型檢測(cè),李寶華臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué)教研室,紅細(xì)胞血型系統(tǒng),主要內(nèi)容：紅細(xì)胞血型系統(tǒng)免疫學(xué)基礎(chǔ)ABO血型系統(tǒng)Rh血型系統(tǒng)其他紅細(xì)胞血型系統(tǒng)多凝集紅細(xì)胞,一、免疫學(xué)基礎(chǔ)原理,（一） 抗原（antigen）,免疫原(immunogen）是能夠刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)引起特異性免疫應(yīng)答的非己物質(zhì)。它可以在體內(nèi)和體外與其特異性抗體或致敏淋巴細(xì)胞結(jié)合,產(chǎn)生免疫反應(yīng)。,完全抗原（antigen，complete）

2、 具有免疫原性、反應(yīng)原性兩種性能的抗原稱為完全抗原。 半抗原 （hapten） 缺乏免疫原性而只有反應(yīng)原性的抗原稱為半抗原。,抗原的基本特征,1、外源性2、分子量大，結(jié)構(gòu)復(fù)雜3、特異性 免疫原性（immunogenicity）4、抗原性 { 反應(yīng)原性（specificity）,抗原抗體反

3、應(yīng)的特異性,抗原的功能,抗原能夠刺激缺乏此物質(zhì)的機(jī)體發(fā)生體液免疫（humoral response）或細(xì)胞免疫（cell-mediated response) 反應(yīng)。 前者通過漿細(xì)胞合成抗體輸送到血液或體液中；后者由淋巴細(xì)胞介導(dǎo)，出現(xiàn)延遲性超過敏反應(yīng)或排斥移植物的生物效應(yīng)。,影響抗原免疫原性的因素,種屬間的抗原性 同種間的抗原差異 個(gè)體間的差別進(jìn)入途徑抗原分子及量的大小、抗原

4、性的強(qiáng)弱及刺激頻率,紅細(xì)胞血型抗原,紅細(xì)胞血型抗原分布在紅細(xì)胞膜的表面,有不同的外部形態(tài)，有或沒有某一個(gè)抗原成份，形成了不同的血型。 紅細(xì)胞血型抗原必須是用相應(yīng)抗體檢測(cè)到的紅細(xì)胞表面抗原，屬于遺傳性狀。,紅細(xì)胞血型抗原的生化結(jié)構(gòu),由結(jié)合到蛋白或脂上的碳水化合物 carbohydrat 決定 如： ABO 、 Lewis 、 Hh 、 P、 Ii等

5、由蛋白的氨基酸序列決定 如： MNSs、 Rh、 Kell、 Kidd等大多數(shù)血型抗原,血型系統(tǒng)（blood group system） 由單一基因座位控制，或是由二個(gè)或更多的緊密連 鎖、彼此之間沒有重組發(fā)生的同源基因控制血型集合（blood group collection） 抗原是以遺傳、生化或血清學(xué)的相關(guān)性進(jìn)行組合高、低抗原頻率組 ( high and low frequ

6、ency antigens ),高頻抗原 （high frequency antigens) 為大多數(shù)人所具有的血型抗原，表示1000個(gè)人中至少有999人存在此抗原。低頻抗原 (low frequency antigens) 為少數(shù)人所具有的血型抗原，表示 1000個(gè)人中最多只有1人有此抗原。又稱為私有血型組抗原。,（二）紅細(xì)胞血型抗體(antibody),抗體是機(jī)體對(duì)外來抗原刺激所產(chǎn)生的一組具

7、有免疫功能的球蛋白，即免疫球蛋白( immunoglobulin， Ig )。,紅細(xì)胞血型抗體的分類,按產(chǎn)生的原因和條件大致可分為三類天然抗體 natural antibody 免疫抗體 immune antibody自身抗體 autoantibody同種抗體 allo-antibody,按照與相應(yīng)紅細(xì)胞是否在鹽水中產(chǎn)生凝集,完全抗體（complete antibody）不完全抗體（incomple

8、te antibody）,,自然狀態(tài)下的紅細(xì)胞,按抗體與抗原反應(yīng)的最適溫度，分為兩種冷型抗體 cold antibody溫型抗體 warm antibody,,,按照抗體與相應(yīng)抗原的依存關(guān)系,規(guī)則抗體不規(guī)則抗體（意外抗體）,,按免疫球蛋白的生物化學(xué)特性分為五類 IgG IgM IgA IgE IgD,IgG的四種亞類,IgG和IgM免疫球蛋白的特征,補(bǔ)體 co

9、mplement,補(bǔ)體是存在于人和動(dòng)物血清中的一種正常成分，由球蛋白、糖和磷脂結(jié)合而成，約占血清球蛋白總量的10％。它能補(bǔ)助各種特異性抗體溶解相應(yīng)的細(xì)菌和細(xì)胞。,補(bǔ)體系統(tǒng) complement system,補(bǔ)體是由20多種血清蛋白成分組成的具有類似酶性質(zhì)的一組復(fù)雜的血清蛋白系統(tǒng)。各成分均以不活動(dòng)的酶原形式存在于血清中，只有被激活后，把酶原變成酶，才能發(fā)揮其生物活性作用，所以也叫做補(bǔ)體系統(tǒng)。,補(bǔ)體的性質(zhì),補(bǔ)體的性質(zhì)是非特異性

10、，不穩(wěn)定，易被紫外線、機(jī)械振蕩、化學(xué)藥物以及加熱破壞其活性 。,（三）紅細(xì)胞抗原抗體反應(yīng),抗原抗體反應(yīng)是機(jī)體防御系統(tǒng)功能的一部分，借以排除外來物質(zhì)對(duì)機(jī)體的損害，維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的平衡穩(wěn)定，健康生存。 不相宜的抗原抗體反應(yīng)也會(huì)給機(jī)體帶來嚴(yán) 重?fù)p害，甚至危及生命。,抗原抗體反應(yīng)主要類型,凝集反應(yīng) agglutination溶血反應(yīng) hemolysis 沉淀反應(yīng) precipitation

11、,凝集反應(yīng)的原理,是抗體分子在相鄰的紅細(xì)胞表面抗原決定簇之間搭橋，使之形成肉眼可見的顆粒狀凝集團(tuán)塊。 直接凝集 direct agglutination 間接凝集 indirect agglutination,IgM抗體造成的直接凝集,間接凝集反應(yīng)的兩個(gè)階段,第一階段致敏階段,第二階段 真凝集階段,IgG抗體借助抗球蛋白試劑產(chǎn)生的間接凝集反應(yīng),試管中紅細(xì)胞凝集強(qiáng)度的判斷,紅細(xì)胞凝集

12、反應(yīng)結(jié)果的判讀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),4+ 1個(gè)凝塊，背景清晰，無游離紅細(xì) 3+ 2~3個(gè)凝塊，背景清晰，無游離紅細(xì) 2+ 多個(gè)小凝塊，背景清晰，無游離紅細(xì) 1+ 無數(shù)的小顆粒，背景混濁，有游離紅細(xì)胞 W+ 鏡下較少凝集，有較多的游離紅細(xì)胞陰性

13、 肉眼觀察不到凝集，鏡下全為游離紅細(xì)胞,,,抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn),高度特異性可逆性比例性兩個(gè)反應(yīng)階段：致敏和凝集階段,影響紅細(xì)胞凝集反應(yīng)的因素,抗原抗體的比例 反應(yīng)溫度 溶液的pH值 孵育時(shí)間 離子強(qiáng)度紅細(xì)胞間距離,常用紅細(xì)胞抗原和抗體鑒定試驗(yàn),生理鹽水法 saline agglutination test抗球蛋白試

14、驗(yàn) antiglobulin test , Coombs 蛋白水解酶試驗(yàn) enzyme-treated cell agglutination低離子強(qiáng)度試驗(yàn) low ionic- strength solution, LISS聚凝胺試驗(yàn) polybrene technique 凝膠試驗(yàn) gel technique 吸收放散試驗(yàn)

15、 absorption elution test,紅細(xì)胞抗體檢測(cè),什么情況下對(duì)輸血患者做抗體檢測(cè)？妊娠史輸血史近期需要多次輸血患者,二、紅細(xì)胞血型檢測(cè),輸血前免疫學(xué)檢查內(nèi)容常用的檢測(cè)技術(shù),（一）、輸血前免疫血液學(xué)檢驗(yàn),輸血前檢查分為兩個(gè)方面，一方面是對(duì)供血者進(jìn)行的檢查，另一方面是對(duì)實(shí)際 接受輸血的患者（受血者）進(jìn)行的檢查。輸血前檢查的目的在于為每一名受血者選擇適合的血液成分，使其有正常的存活時(shí)間，并且不引起受血者本身紅細(xì)

16、胞臨床上的明顯破壞,輸血前檢查的要求,輸入的紅細(xì)胞 在受血者體內(nèi)必須 不凝集或不溶血輸入的血漿成份 不導(dǎo)致受血者紅細(xì) 胞的明顯破壞，,輸血前檢查的主要程序,受血者的病史和血樣本等的檢查、 核對(duì)及處理。ABO和Rh定型抗體篩選和鑒定交叉配血試驗(yàn)標(biāo)簽和發(fā)血,受血者

17、病史和血樣的檢查、核對(duì)及處理,輸血申請(qǐng)單 血標(biāo)本要求,受血者血樣本,血液標(biāo)本的要求血液標(biāo)本必須經(jīng)鑒定和標(biāo)記，并和血液申請(qǐng)單上內(nèi)容核對(duì)、確定標(biāo)本必須能代表患者的當(dāng)前免疫狀況防止血液標(biāo)本的稀釋和溶血輸血前檢查最好使用血清，也可以使用血漿。每次輸血后標(biāo)本至少保存7天。,為什么輸血前檢查用血清比血漿更好？,首先，有時(shí)血漿中可形成小的纖維蛋白凝塊使認(rèn)讀困難。其次，一些通過補(bǔ)體激活才能反應(yīng)的抗體，用血漿不能檢出。因?yàn)檠獫{

18、中抗凝劑乙二胺四乙酸（EDTA）或枸櫞酸鹽能螯和鈣并阻止補(bǔ)體激活。,ABO和Rh血型定型,ABO血型定型 供血者和受血者常規(guī)ABO血型檢測(cè)應(yīng)包括正反定型兩種試驗(yàn)，并相互驗(yàn)證。對(duì)于已知ABO血型的供血者的ABO 血型確認(rèn)或6個(gè)月內(nèi)的嬰兒的ABO定型，可以只檢查紅細(xì)胞,解決ABO正反定型結(jié)果不一致的基本方法,欲解決被檢者自身ABO血型問

19、題 了解被檢者的年齡、診斷病癥、輸血史、用藥史、免疫球蛋白水平以及妊娠史等。這種情況比較復(fù)雜 欲解決技術(shù)問題 應(yīng)洗滌紅細(xì)胞3次并配鹽水懸液進(jìn)行重新正反定型試驗(yàn)并檢查紅細(xì)胞直抗,被檢者自身ABO血型問題1、血清異常 2

20、、紅細(xì)胞致敏3、異常基因 4、近期輸血5、嵌合體血型（開米粒，chimerism ) 6、疾病因素導(dǎo)致抗原減弱 7、紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象 8、獲得性B 9、血型特異性物質(zhì)過高10、近期內(nèi)進(jìn)行大量血漿置換11、異常的血漿蛋白 12、意外抗體的存在1

21、3、低丙種球蛋白血癥 14、藥物等因素15、年齡因素 16、防腐劑因素17、單克隆定型試劑與人源多克隆定型血清在判讀和 分析弱抗原時(shí)的差異,,技術(shù)問題1、不干凈的試管2、血清與細(xì)胞的比例3、離心速度。 4、 污染的試劑和標(biāo)本5、記錄結(jié)果錯(cuò)誤 6、 漏加試劑。7、弄錯(cuò)標(biāo)本8、陽性溶血反應(yīng)誤認(rèn)為陰性。,Rh血型定型,主要鑒定D抗

22、原，定型時(shí)應(yīng)按抗D血清試劑使用說明進(jìn)行，并注意有嚴(yán)格的對(duì)照試驗(yàn)，包括抗原的陰性、陽性對(duì)照以及試劑對(duì)照試驗(yàn)。,Rh血型鑒定可能出現(xiàn)假陽性的原因,1、受檢紅細(xì)胞直抗陽性 2、高蛋白試劑引起緡錢狀凝集3、纖維蛋白造成的凝塊4、定型試劑中存在的其它抗體5、多凝集細(xì)胞造成的假陽性6、鑒定器材和試劑血清被污染,Rh血型鑒定可能出現(xiàn)假陰性的原因,1、受檢細(xì)胞懸液濃度太高，與試劑血清比例失調(diào)。2、漏加或錯(cuò)加定型試劑3、觀察結(jié)果時(shí)搖動(dòng)