紅細胞血型系統(tǒng)及其檢測

1、紅細胞血型系統(tǒng)及血型檢測,李寶華臨床基礎(chǔ)檢驗學教研室,紅細胞血型系統(tǒng),主要內(nèi)容：紅細胞血型系統(tǒng)免疫學基礎(chǔ)ABO血型系統(tǒng)Rh血型系統(tǒng)其他紅細胞血型系統(tǒng)多凝集紅細胞,一、免疫學基礎(chǔ)原理,（一） 抗原（antigen）,免疫原(immunogen）是能夠刺激機體免疫系統(tǒng)引起特異性免疫應答的非己物質(zhì)。它可以在體內(nèi)和體外與其特異性抗體或致敏淋巴細胞結(jié)合,產(chǎn)生免疫反應。,完全抗原（antigen，complete）

2、 具有免疫原性、反應原性兩種性能的抗原稱為完全抗原。 半抗原 （hapten） 缺乏免疫原性而只有反應原性的抗原稱為半抗原。,抗原的基本特征,1、外源性2、分子量大，結(jié)構(gòu)復雜3、特異性 免疫原性（immunogenicity）4、抗原性 { 反應原性（specificity）,抗原抗體反

3、應的特異性,抗原的功能,抗原能夠刺激缺乏此物質(zhì)的機體發(fā)生體液免疫（humoral response）或細胞免疫（cell-mediated response) 反應。 前者通過漿細胞合成抗體輸送到血液或體液中；后者由淋巴細胞介導，出現(xiàn)延遲性超過敏反應或排斥移植物的生物效應。,影響抗原免疫原性的因素,種屬間的抗原性 同種間的抗原差異 個體間的差別進入途徑抗原分子及量的大小、抗原

4、性的強弱及刺激頻率,紅細胞血型抗原,紅細胞血型抗原分布在紅細胞膜的表面,有不同的外部形態(tài)，有或沒有某一個抗原成份，形成了不同的血型。 紅細胞血型抗原必須是用相應抗體檢測到的紅細胞表面抗原，屬于遺傳性狀。,紅細胞血型抗原的生化結(jié)構(gòu),由結(jié)合到蛋白或脂上的碳水化合物 carbohydrat 決定 如： ABO 、 Lewis 、 Hh 、 P、 Ii等

5、由蛋白的氨基酸序列決定 如： MNSs、 Rh、 Kell、 Kidd等大多數(shù)血型抗原,血型系統(tǒng)（blood group system） 由單一基因座位控制，或是由二個或更多的緊密連 鎖、彼此之間沒有重組發(fā)生的同源基因控制血型集合（blood group collection） 抗原是以遺傳、生化或血清學的相關(guān)性進行組合高、低抗原頻率組 ( high and low frequ

6、ency antigens ),高頻抗原 （high frequency antigens) 為大多數(shù)人所具有的血型抗原，表示1000個人中至少有999人存在此抗原。低頻抗原 (low frequency antigens) 為少數(shù)人所具有的血型抗原，表示 1000個人中最多只有1人有此抗原。又稱為私有血型組抗原。,（二）紅細胞血型抗體(antibody),抗體是機體對外來抗原刺激所產(chǎn)生的一組具

7、有免疫功能的球蛋白，即免疫球蛋白( immunoglobulin， Ig )。,紅細胞血型抗體的分類,按產(chǎn)生的原因和條件大致可分為三類天然抗體 natural antibody 免疫抗體 immune antibody自身抗體 autoantibody同種抗體 allo-antibody,按照與相應紅細胞是否在鹽水中產(chǎn)生凝集,完全抗體（complete antibody）不完全抗體（incomple

8、te antibody）,,自然狀態(tài)下的紅細胞,按抗體與抗原反應的最適溫度，分為兩種冷型抗體 cold antibody溫型抗體 warm antibody,,,按照抗體與相應抗原的依存關(guān)系,規(guī)則抗體不規(guī)則抗體（意外抗體）,,按免疫球蛋白的生物化學特性分為五類 IgG IgM IgA IgE IgD,IgG的四種亞類,IgG和IgM免疫球蛋白的特征,補體 co

9、mplement,補體是存在于人和動物血清中的一種正常成分，由球蛋白、糖和磷脂結(jié)合而成，約占血清球蛋白總量的10％。它能補助各種特異性抗體溶解相應的細菌和細胞。,補體系統(tǒng) complement system,補體是由20多種血清蛋白成分組成的具有類似酶性質(zhì)的一組復雜的血清蛋白系統(tǒng)。各成分均以不活動的酶原形式存在于血清中，只有被激活后，把酶原變成酶，才能發(fā)揮其生物活性作用，所以也叫做補體系統(tǒng)。,補體的性質(zhì),補體的性質(zhì)是非特異性

10、，不穩(wěn)定，易被紫外線、機械振蕩、化學藥物以及加熱破壞其活性 。,（三）紅細胞抗原抗體反應,抗原抗體反應是機體防御系統(tǒng)功能的一部分，借以排除外來物質(zhì)對機體的損害，維持機體內(nèi)環(huán)境的平衡穩(wěn)定，健康生存。 不相宜的抗原抗體反應也會給機體帶來嚴 重損害，甚至危及生命。,抗原抗體反應主要類型,凝集反應 agglutination溶血反應 hemolysis 沉淀反應 precipitation

11、,凝集反應的原理,是抗體分子在相鄰的紅細胞表面抗原決定簇之間搭橋，使之形成肉眼可見的顆粒狀凝集團塊。 直接凝集 direct agglutination 間接凝集 indirect agglutination,IgM抗體造成的直接凝集,間接凝集反應的兩個階段,第一階段致敏階段,第二階段 真凝集階段,IgG抗體借助抗球蛋白試劑產(chǎn)生的間接凝集反應,試管中紅細胞凝集強度的判斷,紅細胞凝集

12、反應結(jié)果的判讀評分標準,4+ 1個凝塊，背景清晰，無游離紅細 3+ 2~3個凝塊，背景清晰，無游離紅細 2+ 多個小凝塊，背景清晰，無游離紅細 1+ 無數(shù)的小顆粒，背景混濁，有游離紅細胞 W+ 鏡下較少凝集，有較多的游離紅細胞陰性

13、 肉眼觀察不到凝集，鏡下全為游離紅細胞,,,抗原抗體反應的特點,高度特異性可逆性比例性兩個反應階段：致敏和凝集階段,影響紅細胞凝集反應的因素,抗原抗體的比例 反應溫度 溶液的pH值 孵育時間 離子強度紅細胞間距離,常用紅細胞抗原和抗體鑒定試驗,生理鹽水法 saline agglutination test抗球蛋白試

14、驗 antiglobulin test , Coombs 蛋白水解酶試驗 enzyme-treated cell agglutination低離子強度試驗 low ionic- strength solution, LISS聚凝胺試驗 polybrene technique 凝膠試驗 gel technique 吸收放散試驗

15、 absorption elution test,紅細胞抗體檢測,什么情況下對輸血患者做抗體檢測？妊娠史輸血史近期需要多次輸血患者,二、紅細胞血型檢測,輸血前免疫學檢查內(nèi)容常用的檢測技術(shù),（一）、輸血前免疫血液學檢驗,輸血前檢查分為兩個方面，一方面是對供血者進行的檢查，另一方面是對實際 接受輸血的患者（受血者）進行的檢查。輸血前檢查的目的在于為每一名受血者選擇適合的血液成分，使其有正常的存活時間，并且不引起受血者本身紅細

16、胞臨床上的明顯破壞,輸血前檢查的要求,輸入的紅細胞 在受血者體內(nèi)必須 不凝集或不溶血輸入的血漿成份 不導致受血者紅細 胞的明顯破壞，,輸血前檢查的主要程序,受血者的病史和血樣本等的檢查、 核對及處理。ABO和Rh定型抗體篩選和鑒定交叉配血試驗標簽和發(fā)血,受血者

17、病史和血樣的檢查、核對及處理,輸血申請單 血標本要求,受血者血樣本,血液標本的要求血液標本必須經(jīng)鑒定和標記，并和血液申請單上內(nèi)容核對、確定標本必須能代表患者的當前免疫狀況防止血液標本的稀釋和溶血輸血前檢查最好使用血清，也可以使用血漿。每次輸血后標本至少保存7天。,為什么輸血前檢查用血清比血漿更好？,首先，有時血漿中可形成小的纖維蛋白凝塊使認讀困難。其次，一些通過補體激活才能反應的抗體，用血漿不能檢出。因為血漿

18、中抗凝劑乙二胺四乙酸（EDTA）或枸櫞酸鹽能螯和鈣并阻止補體激活。,ABO和Rh血型定型,ABO血型定型 供血者和受血者常規(guī)ABO血型檢測應包括正反定型兩種試驗，并相互驗證。對于已知ABO血型的供血者的ABO 血型確認或6個月內(nèi)的嬰兒的ABO定型，可以只檢查紅細胞,解決ABO正反定型結(jié)果不一致的基本方法,欲解決被檢者自身ABO血型問

19、題 了解被檢者的年齡、診斷病癥、輸血史、用藥史、免疫球蛋白水平以及妊娠史等。這種情況比較復雜 欲解決技術(shù)問題 應洗滌紅細胞3次并配鹽水懸液進行重新正反定型試驗并檢查紅細胞直抗,被檢者自身ABO血型問題1、血清異常 2

20、、紅細胞致敏3、異?；?4、近期輸血5、嵌合體血型（開米粒，chimerism ) 6、疾病因素導致抗原減弱 7、紅細胞多凝集現(xiàn)象 8、獲得性B 9、血型特異性物質(zhì)過高10、近期內(nèi)進行大量血漿置換11、異常的血漿蛋白 12、意外抗體的存在1

21、3、低丙種球蛋白血癥 14、藥物等因素15、年齡因素 16、防腐劑因素17、單克隆定型試劑與人源多克隆定型血清在判讀和 分析弱抗原時的差異,,技術(shù)問題1、不干凈的試管2、血清與細胞的比例3、離心速度。 4、 污染的試劑和標本5、記錄結(jié)果錯誤 6、 漏加試劑。7、弄錯標本8、陽性溶血反應誤認為陰性。,Rh血型定型,主要鑒定D抗

22、原，定型時應按抗D血清試劑使用說明進行，并注意有嚴格的對照試驗，包括抗原的陰性、陽性對照以及試劑對照試驗。,Rh血型鑒定可能出現(xiàn)假陽性的原因,1、受檢紅細胞直抗陽性 2、高蛋白試劑引起緡錢狀凝集3、纖維蛋白造成的凝塊4、定型試劑中存在的其它抗體5、多凝集細胞造成的假陽性6、鑒定器材和試劑血清被污染,Rh血型鑒定可能出現(xiàn)假陰性的原因,1、受檢細胞懸液濃度太高，與試劑血清比例失調(diào)。2、漏加或錯加定型試劑3、觀察結(jié)果時搖動