蟾蜍離體坐骨神經(jīng)–腓腸肌標(biāo)本制備

1、實(shí)驗(yàn)一 刺激頻率、刺激強(qiáng)度與骨骼肌收縮形式的關(guān)系,實(shí)驗(yàn)?zāi)康模╬urpose）：1.掌握坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制作方法。2.觀察不同刺激強(qiáng)度與肌肉收縮力量的關(guān)系 。3.觀察不同刺激頻率的改變與肌肉形式的關(guān)系。,刺激和興奮,刺激stimulation：指細(xì)胞所處環(huán)境因素的變化。刺激要能使細(xì)胞發(fā)生興奮，就必須達(dá)到一定的刺激量。,【實(shí)驗(yàn)原理】,刺激和興奮,刺激stimulation：指細(xì)胞所處環(huán)境因素的變化。刺激要能使細(xì)胞發(fā)生興奮，就必須

2、達(dá)到一定的刺激量。,閾強(qiáng)度能引起組織發(fā)生反應(yīng)的最小刺激強(qiáng)度，又稱(chēng)為閾值。具有閾強(qiáng)度的刺激稱(chēng)為閾刺激（threshold stimulus）。,1. 刺激強(qiáng)度與肌肉收縮反應(yīng),一條骨骼肌纖維,“全或無(wú)” (all-or-none),達(dá)到閾值→肌纖維收縮超過(guò)閾值→收縮力不增加,一塊骨骼肌,一定范圍內(nèi)，肌肉收縮力的大小與刺激強(qiáng)度成正比,閾下刺激→無(wú)興奮收縮閾刺激→少數(shù)興奮性最高的肌纖維產(chǎn)生收縮刺激強(qiáng)度↑→ 肌纖維被興奮數(shù)量↑，肌肉收縮力

3、↑最適強(qiáng)度→所有的肌纖維均興奮，肌肉收縮最大＞最適強(qiáng)度 → 收縮力不增加,,,,單收縮twitch：骨骼肌受到一次短促有效刺激時(shí),可發(fā)生一次動(dòng)作電位,隨后出現(xiàn)一次收縮和舒張。,2.刺激頻率與肌肉收縮反應(yīng),動(dòng)作電位時(shí)程(相當(dāng)于絕對(duì)不應(yīng)期)僅1～2毫秒,骨骼肌可在機(jī)械收縮過(guò)程中接受新刺激發(fā)生新的興奮和收縮,收縮過(guò)程可達(dá)幾十～幾百毫秒,,,兩個(gè)閾上刺激，相繼作用于神經(jīng)-肌肉標(biāo)本，如果刺激間隔大于單收縮的時(shí)程，肌肉則出現(xiàn)兩個(gè)分

4、離的單收縮；,較高頻率連續(xù)刺激作用于標(biāo)本時(shí)，出現(xiàn)多個(gè)收縮反應(yīng)的融合，新收縮過(guò)程與上次尚未結(jié)束的收縮過(guò)程發(fā)生總和，稱(chēng)為強(qiáng)直收縮tetanus （復(fù)合收縮）。后一收縮發(fā)生在前一收縮的舒張期時(shí)，稱(chēng)為不完全強(qiáng)直收縮incomplete tetanus 。后一收縮發(fā)生在前一收縮的收縮期時(shí)，各自的收縮完全融合，肌肉處于持續(xù)的收縮狀態(tài)，稱(chēng)為完全強(qiáng)直收縮complete tetanus 。,,在生理?xiàng)l件下，支配骨骼肌的傳出神經(jīng)總是發(fā)出連續(xù)的沖動(dòng)，所

5、以骨骼肌的收縮都是強(qiáng)直收縮；靜息狀態(tài)下，中樞神經(jīng)也經(jīng)常發(fā)放低頻率神經(jīng)沖動(dòng)至骨骼肌，產(chǎn)生一定程度的強(qiáng)直收縮，稱(chēng)為肌緊張(muscle tone)。,實(shí)驗(yàn)藥品與器材：蛙手術(shù)器械，電刺激器，生物醫(yī)學(xué)信號(hào)采集系統(tǒng)，張力換能器，任氏液等。,實(shí)驗(yàn)對(duì)象（subject）：蟾蜍,眼科剪：僅用于血管、神經(jīng)組織剪：軟組織粗剪刀：骨骼、肌肉,實(shí)驗(yàn)步驟：１.破壞腦和脊髓,持蛙,(2)枕骨大孔的判斷,(3)破壞完全的標(biāo)準(zhǔn),（Occipital foram

6、en),2.剪除軀干上部和內(nèi)臟,(1),(2),(3),3.剝?nèi)テつw,將標(biāo)本放在盛有任氏液的培養(yǎng)皿中,4.洗凈雙手和用過(guò)的手術(shù)器械,再進(jìn)行下列操作5.分離兩腿,將標(biāo)本放在盛有任氏液的培養(yǎng)皿中,7.用玻璃分針游離坐骨神經(jīng),6.將標(biāo)本固定在蛙板上 腹面向上,8.剪斷股骨,膝關(guān)節(jié)處所有的肌腱,(1),(2),9.檢查標(biāo)本的興奮性,RM-6240采集和處理系統(tǒng)（data acquisition and analysis syste

7、m）,10. 實(shí)驗(yàn)裝置連接,將腓腸肌跟腱的結(jié)扎線(xiàn)固定在張力換能器的懸臂梁上（不宜太緊，線(xiàn)與桌面垂直）。把穿好線(xiàn)的坐骨神經(jīng)輕輕提起，放在刺激電極上，保證神經(jīng)與刺激電極接觸良好。換能器的輸出端與生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)的輸入通道相連。啟動(dòng)生物信號(hào)采集系統(tǒng)軟件，選擇好通道和采樣參數(shù)設(shè)置，啟動(dòng)記錄按鈕，開(kāi)始記錄。,11. 實(shí)驗(yàn)觀察,（1）刺激強(qiáng)度對(duì)骨骼肌收縮的影響使用單刺激或自動(dòng)強(qiáng)度調(diào)節(jié)方式，波寬為1ms，刺激強(qiáng)度從零開(kāi)始逐漸增大，找出

8、剛能引起肌肉出現(xiàn)微小收縮的刺激強(qiáng)度（閾強(qiáng)度）。繼續(xù)增強(qiáng)刺激強(qiáng)度，觀察肌肉收縮反應(yīng)是否也相應(yīng)增大。繼續(xù)增強(qiáng)刺激強(qiáng)度，直至肌肉收縮曲線(xiàn)不能繼續(xù)升高為止。找出剛能引起肌肉出現(xiàn)最大收縮的最小的刺激強(qiáng)度，即最大刺激強(qiáng)度。,,（2）刺激頻率對(duì)骨骼肌收縮的影響 用最大刺激強(qiáng)度的連續(xù)刺激，選擇經(jīng)典方式逐漸增加刺激頻率，分別記錄不同頻率時(shí)的肌肉收縮曲線(xiàn)，觀察不同頻率時(shí)的肌肉收縮變化。,【注意事項(xiàng)】,1）雙毀髓時(shí)應(yīng)注意捻動(dòng)探針并使蟾蜍頭部前俯，防止耳