土霉素對(duì)蚯蚓RNA基因表達(dá)的影響.pdf

1、土霉素(Oxytetracycline)是目前我國(guó)畜禽養(yǎng)殖業(yè)中較為常用的抗生素之一，易于隨畜禽糞便排放至水體和土壤環(huán)境中，由此帶來(lái)較為嚴(yán)重的環(huán)境污染。但目前國(guó)內(nèi)外圍繞環(huán)境中土霉素的生態(tài)毒理效應(yīng)研究尚主要處在生物個(gè)體、組織和細(xì)胞水平上，所采用的毒理指標(biāo)也主要適用于表征高污染狀況下的毒性效應(yīng)，而對(duì)于低污染水平下的毒理評(píng)價(jià)則顯得無(wú)能為力。因此，細(xì)致表征土霉素的遺傳毒理，建立更為精確和敏感的土霉素生態(tài)毒理指標(biāo)和方法，將有助于土壤環(huán)境中土霉素的生

2、態(tài)毒性的早期評(píng)價(jià)和診斷。
　　 基于此，本論文以赤子愛(ài)勝蚓(Eisenia fetida)為受試生物，以土霉素為目標(biāo)污染物，采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)(SYBR Green染料法)，以，β-Action為內(nèi)參基因，在mRNA表達(dá)水平上較為系統(tǒng)地研究了土霉素對(duì)赤子愛(ài)勝蚓超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、熱休克蛋白(Hsp70)的基因表達(dá)情況的影響，得到以下初步結(jié)論：
　　 (1)在土霉素的污染下，蚯蚓體內(nèi)SO

3、D、CAT、Hsp70的基因表達(dá)率均對(duì)其產(chǎn)生了不同程度的響應(yīng)，但是不同基因?qū)Χ拘皂憫?yīng)的規(guī)律不同：SOD表達(dá)率基本呈現(xiàn)“先增加后減少”的響應(yīng)趨勢(shì)，且SOD表達(dá)率最高時(shí)間基本出現(xiàn)在2d(0.1、1、100、200 mg/kg最大表達(dá)率分別為2.732、0.025、38.586、26.63)，而實(shí)驗(yàn)組10 mg/kg的表達(dá)率最高時(shí)間出現(xiàn)在28 d，表達(dá)率為5.938。CAT表達(dá)率基本呈現(xiàn)“先減少后增加”的響應(yīng)趨勢(shì)，且CAT表達(dá)率最高時(shí)間都出現(xiàn)

4、在28 d(各處理組表達(dá)率最大值分別為0.747、1.912、2.092、4.469、1.899)。Hsp70表達(dá)率基本呈現(xiàn)“先增加后減少”的響應(yīng)趨勢(shì)，Hsp70表達(dá)率最高時(shí)間基本上在7d(1、10、100、200 mg/kg處理組的表達(dá)率最大值分別為8.056、8.398、6.612、5.579)，而0.1 mg/kg處理組表達(dá)率最大值出現(xiàn)在14 d，為1.297。
　　 (2)由SOD、CAT、Hsp70的表達(dá)率的時(shí)間響應(yīng)趨

5、勢(shì)可得，在土霉素污染脅迫下，SOD和Hsp70首先被激發(fā)，CAT隨后被激發(fā)，三者協(xié)同作用增強(qiáng)細(xì)胞的自我保護(hù)能力。
　　 (3)三種基因的表達(dá)率的相關(guān)性分析表明，SOD和CAT(p=0.985)、SOD和Hsp70(p=0.059)、CAT和Hsp70(p=0.819)之間，p值均大于0.05，三者不存在明顯相關(guān)性。
　　 (4)通過(guò)方差分析發(fā)現(xiàn)，作用(染毒)時(shí)間的長(zhǎng)短對(duì)SOD、CAT、Hsp70三種基因的表達(dá)率均有顯著影