武漢大學(xué)天然產(chǎn)物的提取葛根

1、葛根及葛根素的提取,武漢大學(xué)天然產(chǎn)物化學(xué)及提取學(xué)號(hào)：200622030127,主要內(nèi)容：,葛根簡介主要成分藥理作用提取方法分離方法含量測定方法開發(fā)前景,葛根簡介,葛根始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,被列為中品。為豆科野葛或甘葛藤的干燥根。目前,在我國為藥食兩用的植物。它具有解肌退熱、生津止渴、透發(fā)麻疹升陽止瀉的功能。葛根中主要含有葛根素(puerarin)大豆苷(daidzin)和大豆苷元(daidzein)等異黃酮類有效成分。該

2、成分都具有增加腦血流、改善微循環(huán)等功效。,葛根及其提取物:,葛根的主要成分,葛根的主要有效成分是大豆苷元，大豆苷，葛根素和大豆苷元4,7－二葡萄糖甙等異黃酮類化合物。除這4種主要的黃酮物質(zhì)之外,日本學(xué)者柴田承二等還從葛屬植物P.Thunbergiana Benth等品種分離得到葛根素7－木糖甙;Bhutain等從葛屬植物P.Tuberosa中分離得到另一種新的異黃酮類物質(zhì)4,6－二乙?；鸶?；野原稔弘等還首次從葛根中分離鑒定出金雀黃

3、素8－芹糖基－葡萄苷和大豆黃素8－糖基－葡萄苷兩種異黃酮物質(zhì)。除上述主要有效成分異黃酮類化合物外,葛根中還含有少量的葛根苷(A，B，C)，三萜類物質(zhì)(葛皂醇A，B，C)和生物堿類物質(zhì)葛根的主要有效成分中以葛根素含量為最高,葛根的藥理作用,改善心腦血管系統(tǒng)降血糖降血脂抗氧化抗腫瘤抑制血小板聚集增強(qiáng)免疫功能改善學(xué)習(xí)記憶,改善心腦血管系統(tǒng),降低血壓，減慢心率，降低心肌耗氧量： 葛根對(duì)正常和高血壓動(dòng)物均有一定的降壓作用，葛根黃酮和

4、葛根素使正常和心肌缺血狗心率明顯減慢。擴(kuò)張冠狀血管，改善正常和缺血心肌的代謝：葛根總黃酮和葛根素明顯擴(kuò)張冠狀血管，可使正常和痙攣的冠狀血管擴(kuò)張，且其作用隨著劑量的增加而加強(qiáng),降血糖降血脂,口服葛根素能使四氧嘧啶性高血糖小鼠血糖明顯下降,血清膽固醇含量減少,當(dāng)選用最低有效劑量的葛根素與小劑量(無效量)阿司匹林組成復(fù)方后,降血糖作用加強(qiáng),且可維持24h以上,并能明顯改善四氧嘧啶性小鼠的糖耐量,明顯對(duì)抗腎上腺素的升血糖作用,且認(rèn)為葛根素可能

5、是葛根治療糖尿病的主要成分，口服葛根煎液能對(duì)抗飲酒大鼠因乙醇所致的血中APOA－1降低及膽固醇，甘油三酯的升高現(xiàn)象。,抗氧化,體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)表明,葛根異黃酮明顯抑制小鼠肝，腎組織及大白兔血，腦組織的脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛的升高,且對(duì)提高血，腦組織中超氧化物歧化酶活性有極顯著作用。本品能通過清除氧自由基和抗脂質(zhì)過氧化而使酒精所致的血液粘度異常變化恢復(fù)正常狀態(tài)。,抗腫瘤,大豆苷元可抑制白血細(xì)胞HL－60的增殖,大豆苷元在10~20mg/ml濃度范

6、圍內(nèi)明顯抑制黑色素瘤B16細(xì)胞的增殖。另外,葛根提取物對(duì)ESC癌S18O肉瘤及Lewis的肺癌均有一定的抑制作用。,抑制血小板聚集,葛根素濃度為0.25，0.5及1.0mg/ml時(shí)，在試管內(nèi)均能不同程度地抑制ADP誘導(dǎo)的鼠血小板聚集靜脈注射葛根素亦有抑制作用，葛根素濃度為0.25~3.0mg/ml在試管內(nèi)對(duì)ADP和5-HT誘導(dǎo)的家兔，綿羊和正常人的血小板聚集也有抑制作用，葛根素0.5mg/kg還能抑制5-HT從血小板中釋放，這對(duì)于治療心

7、絞痛和心肌梗死很有意義。,增強(qiáng)免疫功能,葛根使巨噬細(xì)胞(M4)的異物吞噬功能活化,而使初期感染狀態(tài)下的異物排除功能增強(qiáng);同時(shí)通過活化的M4對(duì)細(xì)胞性免疫施以影響。,改善學(xué)習(xí)記憶,據(jù)劉干中等用小鼠跳臺(tái)法和大鼠操作式條件反射法觀察了葛根醇提取物及總黃酮對(duì)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶功能的影響結(jié)果,兩者均能對(duì)抗東莨菪堿所致的小鼠記憶獲得障礙和40%乙醇所致的記憶再障礙,葛根醇提取物尚能對(duì)抗東莨菪堿所致的大鼠操作式條件反射的抑制研究發(fā)現(xiàn),東莨菪堿能降低小鼠大腦皮

8、層和海馬乙酰膽堿含量,并降低海馬乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶活性，這可能是葛根能改善學(xué)習(xí)記憶作用的機(jī)制。,葛根素提取方法,滲漉法冷浸法回流法提取法酶提取法超聲提取微波提取,滲漉法:,取100g葛根粉碎藥材，裝滲漉筒，加95%乙醇300mL浸泡12h，再加乙醇至600mL進(jìn)行滲漉，將所得滲漉液抽濾，濾液回收乙醇并濃縮至稠膏狀，然后真空干燥得干浸膏，稱重。,冷浸法:,取100g葛根粉碎藥材置500mL圓底燒瓶中，加95%乙醇200mL浸泡12h

9、，抽濾，濾液保留，藥渣加200mL95%乙醇浸泡12h，抽濾，濾液保留，藥渣再加200mL95%乙醇浸泡1h，抽濾，濾液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，后真空干燥得干浸膏，稱重。,回流法：,取100g葛根粉碎藥材置500mL圓底燒瓶中，加300mL95%乙醇回流1h，抽濾，濾液保留，藥渣加300mL95%乙醇回流1h，抽濾，濾液合并，回收乙醇并濃縮至稠膏狀，后真空干燥得干浸膏，稱重。,葛根總黃酮分離方法：,1 大孔樹脂法 2 鉛鹽沉淀

10、法,大孔樹脂法 ：,崔九成等用大孔樹脂分離葛根素，將濃縮至1ml相當(dāng)于0.5g葛根藥材的提取物100ml，加入到50g處理過的大孔樹脂柱上，用蒸餾水洗至流出液色變淡，再用70%乙醇洗脫至無葛根素，洗脫液回收乙醇濃縮并蒸干即得葛根總黃酮，收率為藥材總黃酮的84.58%,鉛鹽沉淀法,李穩(wěn)宏等用鉛鹽沉淀法對(duì)葛根黃酮進(jìn)行分離，將醇回流法所得濃縮物用95%乙醇溶解，加入飽和中性醋酸鉛溶液至不再有沉淀生成為止，過濾，沉淀用水洗2~3次，棄去濾渣，濾

11、液與洗液合并，再加入堿式醋酸鉛溶液，至不再有沉淀生成，將沉淀物干燥后懸浮于300ml 95%乙醇中，通入H2S脫鉛過濾后，沉淀用醇洗2~3次，合并濾液與洗液，調(diào)pH為6.5~7.0，減壓濃縮回收乙醇至50ml左右，轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿中，真空干燥，得總異黃酮為淺棕色粉末。鉛鹽沉淀法得到的成品中總異黃酮含量高，可達(dá)62.81%，但其收率較低。,葛根素含量的測定,1高效液相色譜法2薄層掃描法3紫外可見分光光度計(jì)法,高效液相色譜法,葛根素對(duì)照

12、品(中國藥品生物制品檢定所提供)；甲醇(色譜純)；磷酸(優(yōu)級(jí)純)；重蒸蒸餾水，樣品為含有葛根素的保健食品，所用的溶劑和溶液在分析前都要經(jīng)過0.45µm濾膜過濾。,,色譜條件 ： 色譜柱用DiamonsilTM　 C 18　5µ　4.6mm×250mm柱;柱溫為室溫;流動(dòng)相用甲醇：水=30：70(v/v;用磷酸調(diào)節(jié)pH值為3.0);流量為1.0mL/min-1;檢測波長250nm;進(jìn)樣量0

13、.5~30µL,,標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 ： 準(zhǔn)確稱取干燥恒重的葛根素對(duì)照品適量(精確至0.0001g)于容量瓶中，加流動(dòng)相配制成每1mL含10µg左右的溶液即得.將以上標(biāo)準(zhǔn)液準(zhǔn)確進(jìn)樣0.5~30µL，以峰面積為橫坐標(biāo)，葛根素含量為縱坐標(biāo)繪圖，制得標(biāo)準(zhǔn)曲線Y=Ax+B， r≥0.999990 (實(shí)驗(yàn)中可得到A，B的值)葛根素在試驗(yàn)確定的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，即得標(biāo)準(zhǔn)色譜圖及樣品色譜圖，從而計(jì)算出葛

14、根素的含量。,2 薄層掃描法,取上述各提取方法中干膏一定量(相當(dāng)于2g藥材的浸膏量)，用薄層掃描法，以藥材葛根素含量為對(duì)照測定各方法干膏中葛根素的含量，將所稱取的干浸膏分別溶于95%乙醇中，定量轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，加乙醇至刻度定容，搖勻即得。TLC條件:硅膠G板，氯仿-甲醇-水(7：2.5：0.25)為展開劑。掃描條件:λS=265nm， λR=365nm;點(diǎn)樣量:1µL;標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照:葛根素(0.28mg/mL)，并以藥

15、材葛根素含量為100%，得到各提取方法的相對(duì)回收率,3 紫外可見分光光度計(jì)法,標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 ： 精密稱取對(duì)照品葛根素5mg于25ml量瓶中，加95%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別吸取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml置于10ml量瓶中，各加乙醇1.0ml，再用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，以乙醇溶液作空白對(duì)照，在250nm處測定吸收度(A)，以吸收度與濃度(C)回歸得曲線:A=0.073898C-0.0308，r≥

16、0.9990,,含量測定: 精密稱取干浸膏樣品約30mg于50ml量瓶中，加95%乙醇20~30ml，超聲振蕩使其溶解，冷卻后加95%乙醇至刻度，搖勻"精密吸取1.0ml置于25ml量瓶中，加水至刻度，同時(shí)吸取1.0ml乙醇同法處理作空白對(duì)照，于250nm處測定吸收度，由回歸方程計(jì)算總黃酮的含量,葛根的開發(fā)前景,葛根藥用價(jià)值較大，具有多種藥理作用，并且具有毒性低,安全范圍廣,藥源豐富的優(yōu)點(diǎn)。葛根素,葛根甙元

17、在體內(nèi)分布廣且快，消除也快，不易積累，無代謝飽和現(xiàn)象，為臨床安全合理用藥提供了重要依據(jù).國內(nèi)外已將葛根開發(fā)各種保健品，作為一種尚未完全開發(fā)利用的天然野生植物資源，隨著其藥理，藥化，臨床應(yīng)用，有效成分提取，檢測等方面研究的不斷深入，其藥理功能，保健作用和應(yīng)用價(jià)值將會(huì)日益引起人們的重視。葛根將會(huì)更加引人注目，加強(qiáng)對(duì)葛根的研究，開發(fā)各種藥用制劑和保健食品必將具有重要的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值.,參考文獻(xiàn)：,董麗萍.葛根對(duì)免疫機(jī)制的作用[J].中國藥

18、理學(xué)報(bào)，1998，19(4):339 范禮理.葛根黃酮對(duì)犬冠脈心臟血液動(dòng)力學(xué)和心肌代謝的作用[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，1995，11:724曾貴云.葛根的藥理研究葛根對(duì)犬血壓血管反應(yīng)性腦循環(huán)及外周循環(huán)的作用[J].中華醫(yī)學(xué)雜志，1994，265 岳江文，胡小琴.葛根及葛根素對(duì)心血管系統(tǒng)的藥用價(jià)值[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，1996，16(6):38梁桂賢,李勤 葛根黃酮提取分離方法及制劑研究進(jìn)展，山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào) 第2卷 第4期 2

19、001年李穩(wěn)宏,李劍君,高新.葛根中有效成分總異黃酮提取工藝研究[J],西北大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)),1998,28(2):131~134.趙浩如,郜鳳香.葛根總黃酮的提取方法研究[J].中成藥,2000,22(11):756~758.崔九成,蒙躍尤,楊勻.大孔樹脂分離葛根黃酮研究,西北藥學(xué)雜志,1999,14(4)454~255. 鄢貴龍,葛根素的提取及純化技術(shù), 氨基酸和生物資源2004,26(3):38~41趙麗娟,王翠艷