醫(yī)學(xué)實驗室生物安全防護

1、醫(yī)學(xué)實驗室生物安全與防護,公正 科學(xué) 準確 高效,,BIOHAZARD生物危害標識,實驗室生物安全法規(guī),2003年12月《實驗室生物安全通用要求》通過了專家審定，并很快申報國家標準2003年SARS期間，有關(guān)部門制訂了《傳染性非典型肺炎病毒研究實驗室暫行管理辦法》2004年11月12日我國發(fā)布了《病原微生物實驗室生物安全管理條例》,嚴重生物安全事故案例,2003年9月新加坡實驗室人員感染SARS病毒2003年9月臺灣實驗室

2、人員感染SARS病毒2004年4月我國國家CDC的SARS實驗室研究生感染SARS病毒并傳染給別人,動物實驗中的生物安全事故,動物約有200種傳染病、80種寄生蟲病，其中半數(shù)可以感染給人動物感染實驗，有病原體隨尿糞、唾液排出，有感染性氣溶膠擴散的危險剖檢動物時，有接觸病原體的危險，還可能被動物咬傷或注射器、手術(shù)刀的創(chuàng)傷等腫瘤病毒引起的潛在致癌性等生物危害,,國內(nèi)外曾多次發(fā)生因飼養(yǎng)野鼠或大白鼠而發(fā)生腎綜合征出血熱流行1999年廣

3、州中醫(yī)藥大學(xué)博士后張某從事“九五”國家攻關(guān)課題“補腎法治療老年性癡呆”的實驗時接觸大鼠，3個月后感染流行性出血熱，2003年被診斷為腎功能衰竭，2006年進行腎移植手術(shù)2002年,湖北省藥檢學(xué)校的一名畢業(yè)生在某藥廠從事動物實驗工作，由于接觸了帶出血熱病毒的實驗動物而感染流行性出血熱不治死亡,,2001年6月，北京發(fā)生了因使用質(zhì)量不合格實驗動物和動物實驗不規(guī)范致使鼠源性人獸共患病流行性出血熱感染：一名院士死亡和700多師生緊急預(yù)防接種

4、2006年，東北三省由于個體戶養(yǎng)殖、販運不合格實驗動物，導(dǎo)致幾十名教學(xué)科研人員感染流行性出血熱廣東省，1990年和1997年分別出現(xiàn)因使用不合格實驗動物而感染人畜共患病的嚴重生物安全事故,生物安全,防范處理微生物及其毒素對人體危害的綜合性措施危害的來源： 生物實驗室 生物恐怖活動,實驗室生物安全防護,實驗室工作人員所處理的實驗對象含有致病的微生物及其毒素時，通過在實驗室設(shè)計建造、使用個體防護裝置、嚴格遵從標

5、準化的工作及操作程序和規(guī)程等方面采取綜合措施，確保實驗室工作人員不受實驗對象侵染，確保周圍環(huán)境不受其污染,生物安全的重要性,應(yīng)對公共衛(wèi)生突發(fā)事件的需要防止外來生物危險因子侵入的需要實驗室工作的需要防止醫(yī)院感染的需要防止人畜共患病的需要反生物恐怖的需要,生物安全的內(nèi)容,生物危險度的分級生物安全分級生物安全實驗室實驗室設(shè)備生物安全管理和操作技術(shù)個人生物安全防護裝備衛(wèi)生保健和醫(yī)學(xué)監(jiān)測,生物危險（risk）的分級,I級：個

6、體和群體低危險II級：中等個體危險，有限群體危險III級：高個體危險，低群體危險IV級：高度的個體和群體危險,當實驗室使用傳染性或有潛在傳染性材料前，必須進行微生物危害評估。應(yīng)依據(jù)傳染性微生物致病能力的程度、傳播途徑、穩(wěn)定性、感染劑量、操作時的濃度和規(guī)模、實驗對象的來源、是否有動物實驗數(shù)據(jù)、是否有有效的預(yù)防和治療方法等諸因素進行微生物危害評估通過微生物危害評估確定對象微生物應(yīng)在哪一級的生物安全防護實驗室中進行操作根據(jù)危害評估結(jié)

7、果，制定相應(yīng)的操作規(guī)程、實驗室管理制度和緊急事故處理辦法，形成書面文件并嚴格遵守執(zhí)行,微生物危害評估,第一級：不引起健康成年人疾病第二級：可通過破損皮膚、消化道及粘膜暴露等方式引起人類疾病第三級：本土或外來的微生物，通過吸入途徑暴露時可以造成嚴重或潛在致死性疾病第四級：可以引起嚴重且威脅生命的人類疾病，可通過氣溶膠傳播，或相關(guān)的傳播危險性不明的微生物生物安全防護實驗室根據(jù)不同的微生物和防護要求分為四個生物安全防護級別,美國CDC

8、/NIH對微生物指導(dǎo)性分級,我國對病原微生物的分類,第一類：能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物第二類：能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物第三類：能夠引起人類或者動物疾??；不構(gòu)成嚴重危害，傳播風(fēng)險有限；具備有效治療和預(yù)防措施第四類：通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物第一類和第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物,實

9、驗室生物安全防護的基本原則,實驗室生物安全防護的內(nèi)容包括安全設(shè)備、個體防護裝置和措施（一級屏障）；實驗室的特殊設(shè)計和建設(shè)（分區(qū)、單向氣流）要求（二級屏障）；嚴格的管理制度和標準化的操作程序及規(guī)程（三級屏障）應(yīng)將每一特定實驗室從立項、建設(shè)到使用維護的全過程中有關(guān)生物安全防護綜合措施的內(nèi)容編入各實驗室的生物安全手冊中。必須設(shè)有專職的生物安全負責(zé)人生物安全防護實驗室根據(jù)不同的微生物和防護要求分為四個生物安全防護級別,管理制度,實驗室內(nèi)設(shè)置

10、和準入在主實驗室內(nèi)應(yīng)合理設(shè)置清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū)非實驗有關(guān)人員和物品不得進入實驗室實驗室工作人員、外來合作者、進修和學(xué)習(xí)人員在進入實驗室及其崗位之前必須經(jīng)過實驗室的批準,實驗室工作人員資格和培訓(xùn)實驗室的工作人員必須是受過專業(yè)教育的技術(shù)人員。在獨立工作前須在中高級實驗技術(shù)人員指導(dǎo)下進行上崗培訓(xùn)，達到合格標準，方可開始工作實驗室的工作人員必須被告知實驗室工作的潛在危險并接受實驗室安全教育，自愿從事實驗室工作實驗室的工

11、作人員必須遵守實驗室的所有制度、規(guī)定和操作規(guī)程,實驗室特殊管理對可能的危險因素，制訂保證安全的SOP事前進行有效的培訓(xùn)和模擬訓(xùn)練對于意外事故要能夠提供包括緊急救助或?qū)I(yè)性保健治療的措施，足以應(yīng)付緊急情況實驗室事故處理及上報,安全設(shè)備和個體防護是確保實驗室工作人員不與致病微生物及其毒素直接接觸的一級屏障。生物安全柜是最重要的安全設(shè)備，形成最主要的防護屏障。實驗室應(yīng)按要求分別配備Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級生物安全柜。所有可能使致病微生物及其

12、毒素濺出或產(chǎn)生氣溶膠的操作，除實際上不可實施外，都必須在生物安全柜內(nèi)進行不得用超凈工作臺代替生物安全柜,安全設(shè)備和個體防護（一級屏障）,必要時實驗室應(yīng)配備其它安全設(shè)備，如設(shè)置配有排風(fēng)凈化裝置的排氣罩等，或采用其它不使致病微生物逸出確保安全的設(shè)備實驗室所配備的離心機應(yīng)在生物安全柜或其它安全設(shè)備中使用，否則必須使用安全密封的專用離心頭（杯）必須給實驗室工作人員配備必要的個體防護用品，如個人防護服、防毒面具、安全眼鏡或眼罩,生物安全柜（

13、biosafety cabinet）是處理危險性微生物時所用的箱型空氣凈化安全裝置,生物安全柜,I級生物安全柜（class I biosafety cabinet）,至少裝置一個高效空氣過濾器對排氣進行凈化，外部空氣由操作窗吸進，而不可能由操作窗口逸出；100%由密接排氣導(dǎo)管排到室外 （類似于通風(fēng)廚） 工作狀態(tài)時保證工作人員不受侵害，但不保證實驗對象不受污染。 現(xiàn)已很少使用,至少裝置一個高效空氣過濾器對排氣進行凈化，工作空間為經(jīng)

14、高效過濾器凈化的無渦流的單向流空氣。工作時柜正面玻璃推拉窗打開一半，上部為觀察窗，下部為操作窗口。外部空氣由操作窗吸進，而不可能由操作窗口逸出 工作狀態(tài)下遵守操作規(guī)程時既保證工作人員不受侵害，又保證實驗對象及環(huán)境不受污染,Ⅱ級生物安全柜（class Ⅱ biosafety cabinet）,II 級生物安全柜根據(jù)結(jié)構(gòu)以及氣流分配不同主要是外排氣流不同分為： A1型:（

15、0.38m/s， 30%排在室內(nèi) ） A2型: （0.5m/s，30% 外排，原B3 型） B1型: （ 0.5m/s， 70%接管道外排） B2型: （ 0.5m/s， 100%接管道外排）,Ⅲ級生物安全柜（class Ⅲ biosafety cabinet）,至少裝置一個高效空氣過濾器對排氣進行凈化，工作空間為經(jīng)高效過濾器凈化的無渦流的單向流空氣。正面上部為觀察窗，下部手套

16、箱式操作口 箱內(nèi)對外界保持負壓可確保人體與柜內(nèi)物品完全隔絕,,全封閉的、氣密結(jié)構(gòu)的通風(fēng)柜 通過與柜體聯(lián)結(jié)的橡膠手套進行操作； 柜內(nèi)保持至少120Pa的負壓(0.50wg)； 供氣通過HEPA抽入內(nèi)； 外排的氣流經(jīng)過雙層HEPA過濾或經(jīng)HEPA后再經(jīng)燃燒處理。,隔離器,I,II,III,個人生物安全防護裝備,實驗室防護服面部防護手套呼吸防護,微生物和生物安全實驗室,生物安全實驗室不同于其它普通實驗室，是從事對人可能

17、產(chǎn)生危害的生物實驗場所 尤其是三級和四級生物安全實驗室主要用于對人、畜有高度傳染性的烈性傳染病的研究（如反恐）和檢測（如SARS）的工作,,實驗室設(shè)施結(jié)構(gòu)和通風(fēng)設(shè)計實驗室分區(qū): 清潔區(qū) 半污染區(qū) 污染區(qū)單向氣流(負壓): 外界 HEPA 清潔區(qū) 半污染區(qū) 污染區(qū) HEPA 外界,,,,,,,,,生物安全實驗室的分類分級,實驗室分類 一般生物安全防護實驗室(不使用實驗脊椎動物和昆

18、蟲) 實驗脊椎動物生物安全防護實驗室 （A）實驗室生物安全防護分級 一級生物安全防護實驗室，簡稱BSL1或P1二級生物安全防護實驗室，簡稱BSL2或P2三級生物安全防護實驗室，簡稱BSL3或P3四級生物安全防護實驗室，簡稱BSL4或P4 一級最低，四級最高,實驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對健康成年人已知無致病作用的微生物，如用于教學(xué)的普通微生物實驗室等。包含微生物舉例

19、 大腸桿菌 格魯伯耐格里原蟲 感染性犬肝炎病毒 枯草桿菌,一級生物安全防護實驗室,實驗室應(yīng)設(shè)洗手池（靠近出口處）實驗室圍護結(jié)構(gòu)內(nèi)表面應(yīng)易于清潔。地面應(yīng)防滑、無縫隙，不得鋪設(shè)地毯實驗室中的家具應(yīng)牢固。應(yīng)有專門放置生物廢棄物容器的臺（架）實驗臺表面應(yīng)不透水，耐腐蝕、耐熱實驗室如有可開啟的窗戶，應(yīng)設(shè)置紗窗,一級生物安全防護實驗室,實驗室設(shè)計及建造,,工作過程中禁止非工作人員進入實驗

20、室。接觸微生物或含有微生物的物品后，脫掉手套后和離開實驗室前要洗手禁止在工作區(qū)飲食、吸煙、處理隱形眼鏡、化妝及存儲食物,一級生物安全防護實驗室,標準微生物操作規(guī)程,使用機械移液器吸取液體，禁止口吸制定尖銳器具的安全操作規(guī)程按實驗室安全規(guī)程操作，降低濺出和氣溶膠的產(chǎn)生每天至少消毒一次工作臺面，活性物質(zhì)濺出要隨時消毒所有培養(yǎng)物、廢棄物在運出實驗室前須進行滅活（如高壓）；需運出實驗室滅活的物品須放在專用密閉容器內(nèi),一級生物安全防護

21、實驗室,安全設(shè)施和個體防護一般無須使用生物安全柜等專用安全設(shè)備工作人員在實驗室應(yīng)穿工作服，帶防護眼鏡工作人員手上有皮膚破損或皮疹時應(yīng)戴手套,實驗室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對人或環(huán)境具有中等潛在危害的微生物包含微生物舉例 麻疹病毒 沙門氏菌 乙型肝炎病毒 HIV 血清學(xué)檢測

22、 衣原體 志賀氏菌,二級生物安全防護實驗室,二級生物安全防護實驗室,設(shè)計和建造的特殊要求 消毒設(shè)施（高壓滅菌鍋、化學(xué)消毒裝置等） 洗眼裝置 可自動關(guān)閉的門鎖 門口有發(fā)光指示裝置 換氣裝置（3-4次/小時）,滿足一級實驗室 (標準微生物操作規(guī)程) 各款要求，在此基礎(chǔ)上特別注意：制定出入制度實驗室人口貼上生物危險標志制定實驗室特

23、定的生物安全操作規(guī)則每年一次最新培訓(xùn)制度,二級生物安全防護實驗室,特殊微生物操作規(guī)程,使用塑料器材代替玻璃器材禁止用手處理破碎的玻璃器具培養(yǎng)基、組織、體液及其它具有 潛在危險性的廢棄物須放在防漏的容器中儲存、運輸及消毒、滅菌,,用過的針頭禁止折彎、剪斷、折斷、重新蓋帽，禁止用手直接從注射器取下。用過的針頭必須直接放入防穿透的容器中。非一次性利器必須放入厚壁容器中并運送到特定區(qū)域消毒，最好進行高壓消毒,工作人員應(yīng)接受必要的免疫

24、接種和檢測 (如乙型肝炎疫苗，卡介苗等)必要時收集從事危險性工作人員的本底血清嚴格執(zhí)行實驗室工作人員年度采血檢測 HIV 抗體和備案制度。每半年進行一次 HIV 抗體檢測，并保留樣品對從事艾滋病實驗室工作的人員，因工作中意外事故造成HIV 職業(yè)暴露者，所在單位應(yīng)負責(zé)解決抗病毒及其它相應(yīng)治療的醫(yī)療費用,實驗設(shè)備在運出修理或維護前必須進行消毒人員暴露于感染性物質(zhì)時，及時向?qū)嶒炇邑撠?zé)人匯報，并記錄事故經(jīng)過和處理方案禁止將無關(guān)動物帶入

25、實驗室,處理以下致病微生物時應(yīng)在生物安全柜 (Ⅱ級) 中進行 ，包括: 高濃度 大容量 有噴濺可能性上述材料的離心操作如使用密封的離心機轉(zhuǎn)子或安全離心杯，且只在生物安全柜中開閉，可在實驗室中進行Ⅱ級生物安全柜必須每年進行一次年度現(xiàn)場檢測,二級生物安全防護實驗室,安全設(shè)施和個體防護,當微生物的操作不可能在生物安全柜內(nèi)進行時，須使用面部保護裝置應(yīng)有相應(yīng)的SOP在實驗室中應(yīng)穿著工作服或罩衫等防護服，不得穿

26、著外出。用過的工作服應(yīng)先在實驗室中消毒，然后統(tǒng)一洗滌或丟棄當手可能接觸感染材料、污染的設(shè)備時應(yīng)戴手套。如可能發(fā)生感染性材料的溢出或濺出，宜戴兩副手套。不得戴著手套離開實驗室，工作完全結(jié)束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用,下列操作必須在P2實驗室或全排式生物安全柜中進行,l、含漱液、血清和血液等樣品的診斷檢測2、溶解、固定或用其他方法處理滅活的病毒和(或)無傳染性 的病毒基因片段 3、常規(guī)的細菌和毒素檢查4、可能產(chǎn)生氣

27、溶膠的樣品處理5、臨床樣品的包裝、分裝6、離心管和離心機轉(zhuǎn)頭的封閉和開啟,下列操作必須在P3實驗室中進行,l、 用細胞培養(yǎng)的方法分離病毒2、收集或濃縮病毒或其培養(yǎng)產(chǎn)物 3、用活病毒或病毒的全基因接種動物4、咽拭子樣品的診斷檢測,實驗室的生物安全防護,職業(yè)暴露是指實驗室、醫(yī)護、預(yù)防保健人員以及有關(guān)的監(jiān)管工作人員，在從事艾滋病防治工作及相關(guān)工作的過程中意外被艾滋病毒感染者或艾滋病患者的血液、體液污染了破損的皮膚或非胃腸道粘膜，或被

28、含有艾滋病病毒的血液、體液污染了的針頭及其它銳器刺破皮膚，而具有被艾滋病病毒感染的可能性的情況,,實驗室生物安全事故處理（以HIV為例）,美國CDC的研究顯示：影響針頭刺傷后的危險性因素包括,傷口的深度有可見的血液從傷口溢出針頭刺破了靜脈或動脈污染源來自于晚期艾滋病病毒感染者(病毒載量高),皮膚針刺傷或切割傷：立即用肥皂和大量流水沖洗，盡可能擠出損傷出的血液，用70%乙醇或其它消毒劑消毒傷口皮膚污染：用水和肥皂沖洗污染部位，并用

29、適當?shù)南緞┙荩?0%乙醇或其它皮膚消毒劑,緊急處理措施,粘膜污染：用大量流水或生理鹽水徹底沖洗污染部位衣物污染：盡快脫掉污染的衣物，進行消毒處理污染物潑濺： 發(fā)生小范圍污染物潑濺事故時，應(yīng)立即進行消毒處理； 發(fā)生大范圍污染物潑濺事故時，應(yīng)立即通知實驗室主管領(lǐng)導(dǎo)和安全負責(zé)人到達事故現(xiàn)場查清情況，確定消毒的程序,由于預(yù)防性治療藥物的效力和毒性以及不同暴露方式導(dǎo)致HIV感染的危險性不同，所以預(yù)防性治療藥物應(yīng)在HIV職業(yè)暴露預(yù)

30、防性治療藥品儲備庫（點）和HIV/AIDS防治方面的專家的指導(dǎo)下使用根據(jù)使用藥物反應(yīng)情況，可改變處方,HIV職業(yè)暴露后的預(yù)防,對感染可能性很大的醫(yī)護、檢驗人員可使用預(yù)防性治療藥物，治療方案須根據(jù)暴露情況由專家決定。對于感染危險性很小的，建議不使用藥物預(yù)防對可能有危險的人，是否用藥治療，應(yīng)權(quán)衡較低的感染危險性與使用藥物的效力和藥物毒、副反應(yīng)以及堅持用藥的依從性等利弊,基本用藥程序：兩種逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，使用常規(guī)治療劑量，連續(xù)服用28天

31、。如雙汰芝（AZT與3TC聯(lián)合制劑） 300 mg/次，每日2次，用藥時間為連續(xù)服用28天。或參考抗病毒治療指導(dǎo)方案。本程序適用于輕度低危暴露強化用藥程序：基本用藥程序加一種蛋白酶抑制劑，如佳息患或利托那韋。均使用常規(guī)治療劑量，連續(xù)服用28天。本程序適用于嚴重暴露,職業(yè)暴露后，存在感染艾滋病毒的危險性，但實際感染艾滋病毒的機率是很低的。研究資料表明，醫(yī)務(wù)工作者被艾滋病病毒污染的針具刺傷后，發(fā)生艾滋病病毒感染的機率為 0.33％（

32、20/6135），粘膜表面暴露的感染艾滋病病毒的機率為 0.09％（1/1143）,最主要的職業(yè)是護士和實驗室技術(shù)員除三名實驗室人員是暴露于艾滋病病毒培養(yǎng)以外，其余全部是由于污染血液或體液到1997年為止，外科醫(yī)生和被縫合針刺傷的暴露者中沒有發(fā)生肯定的艾滋病病毒感染,分析美國發(fā)生的52名職業(yè)暴露后艾滋病病毒感染者，發(fā)現(xiàn)：,醫(yī)護和預(yù)防保健等人員對艾滋病病毒感染者和艾滋病患者從事醫(yī)療和實驗檢測活動是比較安全的執(zhí)行嚴格的安全操作及防護措