紫外分光光度法測定兩面針中總生物堿的含量

1、<p>　　紫外分光光度法測定兩面針中總生物堿的含量</p><p>　　【摘要】 ：目的 建立紫外分光光度法測定兩面針中總生物堿含量的方法。方法 采用紫外分光光度法,以氯化兩面針堿為對照,在329 nm波長處進(jìn)行含量測定。結(jié)果 線性范圍為3～8 μg/mL,回歸方程：Y＝97.746X－0.025 5,r＝0.999 1(n＝6)。氯化兩面針堿的平均回收率為99.5%,RSD＝2.32%(n＝5)。

2、結(jié)論 方法簡便、提取完全、重現(xiàn)性好、結(jié)果準(zhǔn)確。 </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 兩面針　生物堿　含量測定　紫外分光光度法</p><p>　　Abstract：Objective To establish a simple method for determination the Alkaloids contents from Zanthoxylum nitidum. Methods

3、Adopting nitidunechloride as reference, alkaloids in Zanthoxylum nitidum were by ultraviolet spectrophotometry at 329 nm. Results The liner arrange was 3～8 μg/mL, regression equation：Y＝97.75X－0.025 5, r＝0.999 1 (n＝6). Th

4、e mean recovery of Nitidunechloride was 99.46%, RSD＝0.93% (n＝5). Conclusion The method performed is accurate and simple. The reproducibility and rate of extr</p><p>　　Key words：Zanthoxylum nitidum；Alkaloids；

5、content determination；ultraviolet spectr-ophometry</p><p>　　兩面針[Zanthoxylum nitidum(Roxb.)DC.]為蕓香科花椒屬植物,在我國主要分布于福建、廣東、廣西、云南等地,是民間常用的一種植物藥。其根、根皮及莖皮入藥,具有抗腫瘤、鎮(zhèn)痛等作用。主治風(fēng)濕性關(guān)節(jié)痛、牙病、胃痛、咽喉腫痛、毒蛇咬傷等癥。兩面針中主要含生物堿,且主要為苯并菲啶

6、類生物堿[1]。目前文獻(xiàn)尚未有對其總生物堿進(jìn)行含量測定的報道。本試驗(yàn)建立了以紫外分光光度法測定兩面針中生物堿類化合物含量的方法。</p><p><b>　　1 實(shí)驗(yàn)材料</b></p><p>　　儀器：Lambda 25型紫外/可見分光光度計[珀金埃爾默儀器(上海)有限公司]；KS-600D 超聲清洗器(寧波科生儀器廠)；AG285電子分析天平(德國梅特勒公司)

7、。</p><p>　　試劑：XDA-5大孔吸附樹脂(西安藍(lán)曉科技有限公司)；氯化兩面針堿(中國藥品生物制品檢定所,供含量測定用,批號848-9901)。所用試劑均為分析純。</p><p>　　藥物：兩面針?biāo)幉娘嬈謩e購自桂林、南寧、玉林各產(chǎn)地。</p><p><b>　　2 方法與結(jié)果</b></p><p>　

8、　2.1 測定波長的選擇</p><p>　　取氯化兩面針堿對照品,加95%乙醇溶解制成7 μg/mL的</p><p>　　溶液,置1 cm吸收池中,以95%乙醇液為空白,在250～500 nm波長范圍內(nèi)掃描。另取兩面針?biāo)幉奶崛∫?照“2.3”項(xiàng)方法處理,稀釋至一定濃度,置1 cm吸收池中,在250～500 nm波長范圍內(nèi)掃描,對照品及兩面針提取液在329 nm處均有最大吸收,并且在3

9、28～331 nm處峰型較平坦,有利于測定,故選擇329 nm作為測定波長。見圖1。</p><p>　　2.2 線形關(guān)系考察</p><p>　　分別精密移取氯化兩面針堿標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.1 mg/mL)0.75、1.0、1.25、1.5、1.75、2.0 mL,用乙醇定容至25 mL容量瓶中。按“2.1”項(xiàng)方法操作,于329 nm波長處測定吸收度,以濃度為橫坐標(biāo),吸光度為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)

10、曲線,得回歸方程：Y＝97.75X－0.025 5,r＝0.999 1(n＝6)。結(jié)果表明,樣品液在3～8 μg/mL之間呈線性關(guān)系。</p><p>　　2.3 供試品的制備</p><p>　　2.3.1 提取方法 </p><p>　　精密稱取兩面針?biāo)幉姆勰?.1 g(過100目篩),置錐形瓶中,加25 mL 60%乙醇,超聲30 min(工作頻率25～4

11、0 MHz),抽濾,重復(fù)1次,合并濾液,減壓回收乙醇,加pH為3的酸水溶解,過濾,酸濾液再用等體積乙酸乙脂萃取2次,除去香豆素、木脂素等脂溶性雜質(zhì)。</p><p>　　2.3.2 大孔吸附樹脂純化工藝</p><p>　　2.3.2.1 大孔樹脂預(yù)處理 </p><p>　　精密稱取XDA-5型大孔樹脂2 g, 95%乙醇濕法裝玻璃層析柱(1 cm×

12、50 cm),繼續(xù)用95%乙醇在柱上淋洗,不時檢查流出的乙醇,至與水混合(1∶5)不呈白色渾濁為止。最后用蒸餾水洗去層析柱中的乙醇,備用。</p><p>　　2.3.2.2 吸附洗脫分離工藝 </p><p>　　將提取液上柱,流速控制20 mL/h。泄漏液無生物堿陽性反應(yīng),說明總生物堿已全部吸附。將已吸附好樣品的XDA-5樹脂先用50 mL水洗脫除去無機(jī)鹽、蛋白質(zhì)、多糖等雜質(zhì),再用5

13、0 mL 95%乙醇洗脫,流速控制20 mL/h,接取95%乙醇的洗脫液,最終定容至50 mL,即得供試品溶液。</p><p>　　2.4 精密度考察</p><p>　　在同一樣品液中分別精密移取5份,于329 nm波長處測定吸收度,計算含量。分別為6.24%、6.12%、6.23%、5.98%、6.00%,RSD＝2.01%(n＝5)。</p><p>　　

14、2.5 重復(fù)性考察</p><p>　　精密稱取兩面針?biāo)幉募?xì)粉,按“2.3”項(xiàng)方法提取,于329 nm處測定吸收度,計算含量。結(jié)果分別為6.25%、6.22%、6.23%、6.24%、6.26%,RSD＝2.20%(n＝5)。結(jié)果表明重復(fù)性較好。</p><p>　　2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)</p><p>　　取供試品溶液,在0、1、2、4、8、12、18、24 h

15、分別測定吸收度,結(jié)果顯示在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定,RSD＝2.14%(n＝8)。</p><p>　　2.7 加樣回收率試驗(yàn)</p><p>　　分別精密稱取5份已知含量的兩面針?biāo)幉募?xì)粉0.05 g,每份精密加入相當(dāng)于氯化兩面針堿3.0 mg的對照品溶液,按“2.3”項(xiàng)方法提取,于329 nm處測定吸收度,計算。回收率分別為101%、99.5%、102%、96%、98.8%,平均為99.5%

16、,RSD＝2.32%(n＝5)。</p><p><b>　　2.8 樣品測定</b></p><p>　　按照以上方法測定3種不同產(chǎn)地兩面針?biāo)幉闹锌偵飰A的含量,每種產(chǎn)地的藥材分別平行測定5批。結(jié)果見表1。表1 不同產(chǎn)地兩面針?biāo)幉募?xì)粉中總生物堿的含量測定結(jié)果(略)</p><p><b>　　3 討論</b><

17、;/p><p>　　總生物堿的含量測定一般都采用酸性染料比色法[2-4]或根據(jù)單體堿的母核相同直接測定[5],本試驗(yàn)曾試過用溴甲酚綠和溴麝香草酚藍(lán)顯色,用比色法在422 nm處測定吸收度,但結(jié)果極其不穩(wěn)定,因此,酸性染料比色法不適用于測定兩面針中總生物堿的含量。</p><p>　　兩面針中主要含生物堿,且主要為苯并菲啶類生物堿[1]。已報道的7個單體堿在(329±2)nm波長處均有

18、共同吸收[1]。并且樣品液用“2.3”項(xiàng)的方法處理后,可有效的排除其它成分的干擾,與測定結(jié)果一致。</p><p>　　在大孔樹脂純化總生物堿的工藝中,曾采用XDA-5、HPD-100和LSD-5B等8種大孔樹脂對兩面針中總生物堿進(jìn)行吸附和解吸附考察,其中XDA-5的動態(tài)吸附分離效果最好,適合于兩面針中總生物堿的提純。</p><p>　　由于3種不同產(chǎn)地兩面針?biāo)幉闹锌偵飰A的含量相差較大

19、,經(jīng)仔細(xì)觀察,從桂林購買的取藥部位是根,而購于南寧、玉林兩地的取藥部位是莖。因此,藥材部位不同總生物堿的含量相差較大,根部比莖部的總生物堿含量明顯偏高。故《中華人民共和國藥典》中測兩面針中生物堿含量取藥部位是根是有道理的[6]。</p><p>　　采用酸水冷浸、60%乙醇回流提取、60%乙醇超聲提取3種方法測得的同一批次的兩面針?biāo)幉姆勰┑暮科骄捣謩e是2.65%、1.65%、6.01%；因此,超聲提取方法優(yōu)于

20、其它兩種,并且延長超聲時間含量不再增加,表明提取完全。</p><p><b>　　【參考文獻(xiàn)】</b></p><p>　　[1] 李定祥,閔知大.兩面針中生物堿的分離[J].中國天然藥物,2004,2(5)：285－288.</p><p>　　[2] 王 偉,譚曉梅.荷葉總生物堿含量測定的研究[J].中藥材,2004,27(1)：50－5

21、1.</p><p>　　[3] 張忠會,王惠達(dá),楊 威.罌粟殼生物堿的可見分光光度法測定[J].中成藥,2002,24(7)：537－538.</p><p>　　[4] 辛海量,趙玉梅,林 峰,等.苦豆草中總生物堿的含量測定[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報,2002,18(2)：113－115.</p><p>　　[5] 張 榮,湯秋華,胡永獅,等.紫外分光光度法測定雷