HIV膜融合抑制劑HR212表達(dá)、免疫原性檢測及與5-helix病毒融合抑制的初步研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、艾滋病是由人免疫缺陷病毒(HIV)引起的人類免疫缺陷綜合癥。目前FDA批準(zhǔn)的用于臨床的抗HIV的藥物只是逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑和蛋白酶抑制劑,這兩類藥物在艾滋病的治療方面已經(jīng)取得了巨大的進(jìn)展。但由于病毒基因的變異,導(dǎo)致了耐藥株的出現(xiàn),導(dǎo)致常規(guī)治療方案失效。因此研究新的抑制劑對于抑制HIV病毒在體內(nèi)的復(fù)制具有重要意義。 HR212是由本實驗室構(gòu)建的一種膜融合抑制劑,前期研究證實此蛋白能夠有效的抑制HIV-1假病毒感染細(xì)胞,并且其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定

2、,能耐受蛋白酶酶切作用。此蛋白具有和T20相似的抗病毒活性,且能夠?qū)20耐藥株也具有良好的抑制效果。HR212除了能夠抑制HIV-1外,還對HIV-2具有部分抑制效果。前期HR212是以融合表達(dá)的形式進(jìn)行表達(dá)的,由于其氨基端存在非目的片段,故不能正確表明其膜融合性質(zhì)。為向?qū)淼乃幬锱R床應(yīng)用提供資料,我們擬非融合表達(dá)了HR212,同時也檢測HR212的免疫原性。將HR212基因連接于pBV220上,經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)、純化后免疫小鼠。經(jīng)間接EL

3、ISA驗證HR212按照傳統(tǒng)方法免疫能夠得到抗體滴度,而以10倍治療劑量按照治療程序多次注射時,卻僅在1/1000時檢測到抗體滴度,此結(jié)果為下一步降低其免疫原性的方法探討具有重要意義。此外,為了研制治療性疫苗,我們構(gòu)建了HR212的腺病毒表達(dá)體系。通過將HR212連接到穿梭質(zhì)粒pDC315上,然后與骨架質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染239細(xì)胞,經(jīng)過7天后獲得具有復(fù)制缺陷的重組腺病毒rAd-TPA-HR212。經(jīng)Western Blot驗證,成功得到了13.

4、3 kd的目的蛋白。經(jīng)假病毒抑制試驗證實,經(jīng)腺病毒表達(dá)的HR212能有效的抑制假病毒介導(dǎo)的膜融合過程。為下一步研究奠定了基礎(chǔ)。 人工構(gòu)建的五螺旋蛋白(5-helix)能夠抑制HIV介導(dǎo)的膜融合過程中發(fā)卡三聚體的形成,從而抑制病毒感染靶細(xì)胞。但5-helix基因在原核細(xì)胞中直接表達(dá)時易形成包涵體,復(fù)性困難,給研究帶來不便。通過同源建模,模擬了5-helix在pGEX-6P-1載體及pET44b載體上的融合蛋白形成的最有可能的兩種構(gòu)

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