日本工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)jisl19022002

1、<p>　　日本工業(yè)標(biāo)準(zhǔn) JIS L 1902：2002</p><p>　　紡織品抗菌性能的檢測與評價</p><p>　　Testing for antibacterial activity and efficacy on textile products</p><p><b>

2、;　　序</b></p><p>　　紡織品抗菌性能的檢測方法始建于1990年。起初作為定性檢測的標(biāo)準(zhǔn)，是利用抑菌環(huán)來判斷抑菌除臭加工過的紡織品的抗菌性能。在1998年的版本中，增加了抗菌加工過紡織品的檢測，另外，又增加了菌液吸收法作為定量的檢測方法之一。</p><p>　　菌轉(zhuǎn)印法作為一種新的定量檢測方法添加到本版本中，并據(jù)此來評價其抗菌性能。</p><

3、;p>　　1、適用范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了對用抑菌除臭加工和抗菌加工過的紡織品抗菌性能進(jìn)行評價的試驗方法。</p><p>　　2、參考標(biāo)準(zhǔn) 下述標(biāo)準(zhǔn)雖然是本標(biāo)準(zhǔn)的參考標(biāo)準(zhǔn)，但也是本標(biāo)準(zhǔn)的組成和延續(xù)，應(yīng)用這些標(biāo)準(zhǔn)的大多數(shù)較新的版本（含修正版）。</p><p>　　JIS K 0950 滅菌塑料平皿</p><p>　　JIS K 0970 活塞式微量移液器

4、</p><p>　　JIS K 3800 II級生物安全操作臺</p><p>　　JIS K 8101 乙醇（99.5）</p><p>　　JIS K 8150 氯化鈉</p><p>　　JIS K 8180 鹽酸</p><p>　　JIS K 8263 瓊脂</p><p>

5、;　　JIS K 8355 乙酸</p><p>　　JIS K 8576 氫氧化鈉</p><p>　　JIS K 9007 磷酸二氫鉀</p><p>　　JIS K 9009 二水合磷酸二氫鈉</p><p>　　JIS L 0803 纖維染色牢固度試驗標(biāo)準(zhǔn)</p><p>　　JIS R 3505

6、玻璃量器的校準(zhǔn)</p><p>　　JIS Z 8401 數(shù)據(jù)修約規(guī)則</p><p>　　3、檢測類型 抗菌性能的評價試驗可分為以下兩類，根據(jù)檢測目的選擇合適的試驗方法。</p><p>　　定性試驗（抑菌環(huán)法） 本法利用抑菌環(huán)來評價經(jīng)抑菌除臭加工的紡織品的抗菌性能，要求該抑菌除臭劑易于擴(kuò)散并進(jìn)入營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。</p><p>&l

7、t;b>　　定量試驗</b></p><p>　　菌液吸收法 本法利用抑菌或殺菌活性值，來評價較高濕度環(huán)境下抗菌、抑菌除臭加工過的紡織制品的抗菌性能。</p><p>　　菌轉(zhuǎn)印法 本法利用細(xì)菌減少值來評價較低濕度下用抗菌加工過的紡織制品的抗菌性能。</p><p>　　4、定義 本標(biāo)準(zhǔn)涉及的主要術(shù)語定義如下：</p><

8、p>　　抑菌除臭加工 一種用于阻礙、抑制紡織品表面細(xì)菌的生長和去除臭味的紡織品加工方法。</p><p>　　抗菌加工 一種用于扼制或扼殺紡織品表面細(xì)菌生長的紡織品加工方法。</p><p>　　抑菌環(huán) 由于紡織品使用的抑菌除臭試劑擴(kuò)散進(jìn)入瓊脂平板培養(yǎng)基，在細(xì)菌培養(yǎng)后，導(dǎo)致樣品周圍產(chǎn)生透明、不長細(xì)菌的部分；該區(qū)域就是抑菌環(huán)。</p><p>　　抗菌活性

9、 利用抑菌除臭加工而使制品獲得抑制細(xì)菌繁殖的能力。</p><p>　　抑菌活性值 分別在經(jīng)抑菌除臭加工過和標(biāo)準(zhǔn)對照的紡織制品上接種細(xì)菌，經(jīng)培養(yǎng)后活菌計數(shù)，利用兩者間活菌數(shù)目的對數(shù)差值表示抑菌活性值。</p><p>　　殺菌活性值 分別在經(jīng)抗菌加工過和標(biāo)準(zhǔn)對照的紡織制品上接種細(xì)菌，培養(yǎng)后活菌計數(shù)，利用接種的活菌數(shù)與培養(yǎng)后抗菌加工制品的活菌數(shù)目之間的對數(shù)差值來表示殺菌活性值。<

10、/p><p>　　細(xì)菌減少值 分別在經(jīng)抑菌除臭加工和標(biāo)準(zhǔn)對照的紡織制品表面轉(zhuǎn)印上細(xì)菌，培養(yǎng)后經(jīng)活菌計數(shù)，利用兩者間活菌數(shù)目的對數(shù)差值表示細(xì)菌減少值。</p><p>　　抗菌效果 抗菌效果就是抑菌除臭加工的抗菌活性，是通過抑菌環(huán)、抑菌活性值、殺菌活性值、細(xì)菌減少值等來表征。</p><p>　　平皿計數(shù)法 本法是通過10倍梯度稀釋法，經(jīng)培養(yǎng)后對活菌菌落數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計的

11、方法。</p><p>　　熒光測量法 通過定量測定菌液中細(xì)菌細(xì)胞的ATP（三磷酸腺苷）總含量來換算得到活菌的濃度。</p><p>　　5、抗菌效果 抗菌效果的評價見下：</p><p>　　定性試驗（抑菌環(huán)法） 根據(jù)下文步驟9，檢測抑菌環(huán)的存在與否來評價抗菌效果。</p><p>　　定量試驗 按下述方法來評價抗菌效果?？咕庸ぶ?/p>

12、品的評價可通過殺菌活性值或細(xì)菌減少值來表征。</p><p>　　菌液吸收法 根據(jù)下文步驟10.1來檢測時，抑菌除臭加工制品的抑菌活性值應(yīng)≥2.0；抗菌加工制品的殺菌活性值應(yīng)≥0。</p><p>　　菌轉(zhuǎn)印法 根據(jù)下文步驟10.2來檢測時，經(jīng)抗菌加工制品的細(xì)菌減少值應(yīng)≥0。</p><p><b>　　6、試驗用菌</b></p&g

13、t;<p>　　6.1、細(xì)菌種類 可用細(xì)菌種類見下：</p><p>　　金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）</p><p>　　肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）</p><p>　　銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）</p><p>　　大腸桿菌

14、（Escherichia coli）</p><p>　　耐甲氧苯青霉素的金黃色葡萄球菌（Methicillin resistant Staphylococcus aureus）</p><p>　　6.2、試驗用菌 用于試驗的細(xì)菌應(yīng)該符合下表1所示。</p><p><b>　　表1、試驗用細(xì)菌</b></p><p&g

15、t;　　注釋：1、帶*的菌可以省略；</p><p>　　2、試驗用細(xì)菌菌株必須與國際微生物菌株保藏聯(lián)盟或日本微生物菌株保藏聯(lián)盟保存的菌株具有相同的系列。</p><p><b>　　7、試驗準(zhǔn)備</b></p><p>　　7.1、細(xì)菌試驗的操作條件 在進(jìn)行細(xì)菌試驗操作前，將兩只袖子都挽到胳膊肘附近，用70％～90％（體積比）的酒精或0.1

16、％～1％的倒置肥皂液對雙手及胳膊都進(jìn)行消毒。</p><p>　　7.2、藥品、材料和器具 除特別指定的外，試驗所用到的藥品、器材見下：</p><p>　　酒精：按JIS K 8101規(guī)定的非常純凈或較純的。</p><p>　　倒置的肥皂液：符合日本藥典第13次修訂版所提到的。</p><p>　　瓊脂：必須符合JIS K 8263的規(guī)

17、定。</p><p>　　牛肉膏：用于微生物試驗。</p><p>　　蛋白胨：用于微生物試驗。</p><p>　　氯化鈉：必須符合JIS K 8150的規(guī)定。</p><p>　　純水：符合日本藥典第13次修訂版所提到的。</p><p>　　水：符合日本藥典第13次修訂版所提到的普通水。</p>&

18、lt;p>　　酵母浸膏：用于微生物試驗。</p><p>　　胰蛋白胨：用于微生物試驗。</p><p>　　葡萄糖：用于微生物試驗。</p><p>　　酪蛋白胨：用于微生物試驗。</p><p>　　大豆蛋白胨：用于微生物試驗。</p><p>　　卵磷脂：用于微生物試驗。</p><p&

19、gt;　　非離子表面活性劑：吐溫80。</p><p>　　磷酸二氫鉀：必須符合JIS K 9007的規(guī)定。</p><p>　　二水合磷酸二氫鈉：必須符合JIS K 9009的規(guī)定。</p><p>　　氫氧化鈉：必須符合JIS K 8576的規(guī)定。</p><p>　　氯化氫（鹽酸）：必須符合JIS K 8180的規(guī)定。</p>

20、;<p>　　乙酸（醋酸）：必須符合JIS K 8355的規(guī)定。</p><p>　　三水合（5’-）三磷酸腺苷二鈉鹽：用于生化試驗。</p><p>　　三羥甲基氨基甲烷：用于生化試驗。</p><p>　　二水合四乙酸乙烯基二銨二鈉鹽：用于生化試驗。</p><p>　　四水合乙酸鎂：用于生化試驗。</p>&

21、lt;p>　　二硫蘇糖醇（DL-Dithiothreitol）對映體：用于生化試驗。</p><p>　　熒光（素）酶（EC編號1.13.12.7）：用于生化試驗。</p><p>　　D-蟲熒光素：用于生化試驗。</p><p>　　牛血清白蛋白：用于生化試驗。</p><p>　　蔗糖：用于生化試驗。</p><

22、p>　　三磷酸腺苷雙磷酸酶（EC編號3.6.1.5）：用于生化試驗。</p><p>　　腺苷脫氨酶（EC編號3.5.1.4）：用于生化試驗。</p><p>　　10％苯扎氯胺（潔爾滅）水溶液：符合日本藥典第13次修訂版所提到的。</p><p>　　棉塞：使用OME棉塞、硅橡膠塞、金屬塞或莫頓（morten）塞。</p><p>　

23、　培養(yǎng)皿：用內(nèi)徑為90mm的玻璃制品或符合JIS K 0950中規(guī)定的90A或90B標(biāo)準(zhǔn)。</p><p>　　干熱滅菌器：能保持在160℃～170℃。</p><p>　　高壓滅菌器：能保持在121℃（對應(yīng)于103 kPa的壓力）。</p><p>　　生物安全柜：符合JIS K 3800的要求或等同的性能。</p><p>　　分光光度計

24、：能在660nm測量。</p><p>　　潔凈工作臺：用于生化試驗。</p><p>　　鉑金接種環(huán)：端部大約有4mm左右的圓環(huán)。</p><p>　　培養(yǎng)箱：能夠保溫在37℃±1℃。</p><p>　　小瓶：玻璃制容積30ml，帶PP制有內(nèi)螺紋的蓋子，并可加聚四氟乙烯或硅橡膠密封。</p><p>　　

25、不銹鋼圓片：不銹鋼制，直徑大約28mm，約20g重。</p><p>　　標(biāo)準(zhǔn)織物：100％棉纖維制，著色牢度符合JIS L 0803的規(guī)定，即用洗衣機(jī)60℃下洗滌10min，然后室溫下漂洗2次，重復(fù)以上步驟10次。</p><p>　　玻璃棒：直徑大約18mm，重約40g～50g。</p><p>　　移液管：符合A級或JIS K 0970、JIS R 3505標(biāo)

26、準(zhǔn)，或者具有等同的精度。</p><p>　　鑷子：用于膜濾器的操作。</p><p>　　濾膜：由聚碳酸酯制成，直徑47mm具有0.4um的微孔。</p><p>　　過濾裝置：上部有一個帶濾膜的漏斗，下面是帶抽濾的緩沖瓶。</p><p>　　轉(zhuǎn)印裝置：能以4N的力拓印到檢測樣品表面上，并可在3s內(nèi)旋轉(zhuǎn)180º。</p&g

27、t;<p>　　熒光光度計：能在300nm～650nm測量，在熒光顯色劑作用下分辨精度為10-13mol/l～10-7mol/l的ATP。（具體可參考步驟7.5）</p><p>　　試管振蕩器：用于微生物試驗。</p><p>　　PH測量儀：用于微生物試驗。</p><p>　　注：試管、小瓶、燒瓶、移液管、鑷子或其類似物品應(yīng)仔細(xì)用堿性或中性洗滌劑

28、洗滌，然后漂洗干凈，烘干，用前必須經(jīng)高溫干熱法或高壓濕熱法滅菌。</p><p><b>　　7.3、滅菌方法</b></p><p>　　7.3.1、干熱滅菌 將需要滅菌處理的物品放入干熱滅菌器中，在160℃～170℃下保持1h～2h，直至棉塞或包裝紙(1)焦化呈微黃色。</p><p>　　注(1)：滅菌后，如果棉塞或包裝紙不小心被水弄濕

29、，相關(guān)器皿請不要繼續(xù)使用。</p><p>　　7.3.2、高壓蒸汽滅菌 在高壓鍋中裝上水，把需要滅菌的物體在金屬網(wǎng)筐中擺好，放置在高壓鍋中的架子上。蓋緊高壓鍋，開始加熱，在121℃下（壓力大約103kPa）保持15min～20min。然后停止加熱，自然冷卻至溫度低于100℃，打開排氣閥排除蒸汽后打開蓋子，取出滅過菌的物體。若有必要，在潔凈工作臺或生物安全柜中冷卻。</p><p>　　

30、為保證高壓鍋的清潔，避免沾染抗菌劑和培養(yǎng)基，必要時可采用中性洗滌劑洗滌，并用大量水沖洗干凈。</p><p>　　7.3.3、火焰滅菌 將物品放入煤氣焰或酒精焰中滅菌。若是鉑金接種環(huán)，應(yīng)充分滅菌；若是試管，讓其接觸火焰2s～3s。</p><p>　　7.3.4、酒精滅菌 將棉花或紗布蘸取75％（體積比）的酒精，輕輕擠壓并擦拭需要滅菌的物體。</p><p>　

31、　7.4、細(xì)菌培養(yǎng)基和生理鹽水 細(xì)菌培養(yǎng)基和生理鹽水應(yīng)按如下的步驟配制和使用。</p><p>　　營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基A 按如下步驟配制：取5.0g牛肉膏，10.0g蛋白胨，5.0g氯化鈉，15.0g瓊脂粉，加到盛有1000ml純水的燒瓶中，并在沸騰水浴中加熱至完全溶解；用0.1mol/l氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至7.0±0.2（25℃下）；塞好棉塞，用高壓蒸汽滅菌器滅菌。若配好后不立即使用，要在5℃～10℃下

32、保存。不要使用配制完存放一個月或以上的培養(yǎng)基。若該培養(yǎng)基用于接種細(xì)菌時，將此培養(yǎng)基加熱至45℃～46℃使用。</p><p>　　營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基A 按如下步驟配制：取5.0g牛肉膏，10.0g蛋白胨，5.0g氯化鈉，加到盛有1000ml純水的燒瓶中，混合攪勻后用0.1mol/l氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至7.0±0.2（25℃下）；并分裝在試管中，塞好棉塞，置于高壓蒸汽滅菌器中滅菌。若配好后不立即使用，要在5℃

33、～10℃下保存。不要使用配制完存放一個月或以上的肉湯培養(yǎng)基。</p><p>　　營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基B 按如下步驟配制：取3.0g牛肉膏，5.0g蛋白胨，加到盛有1000ml純水的燒瓶中，混合攪勻后用0.1mol/l氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6.8±0.2（25℃下）；若需要就分裝在試管中，塞好棉塞，置于高壓蒸汽滅菌器中滅菌。若配好后不立即使用，要在5℃～10℃下保存。不要使用配制完存放一個月或以上的肉湯培養(yǎng)基。

34、</p><p>　　營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基B 按如下步驟配制：取3.0g牛肉膏，5.0g蛋白胨，15.0g瓊脂粉，加到盛有1000ml純水的燒瓶中，并在沸騰水浴中加熱至完全溶解；用0.1mol/l氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至6.8±0.2（25℃下）；塞好棉塞，用高壓蒸汽滅菌器滅菌。若配好后不立即使用，要在5℃～10℃下保存。不要使用配制完存放一個月或以上的培養(yǎng)基。當(dāng)此培養(yǎng)基用于接種細(xì)菌時，將此培養(yǎng)基預(yù)熱至45℃～4

35、6℃使用。</p><p>　　營養(yǎng)瓊脂斜面 按如下步驟配制：向試管中加入事前準(zhǔn)備好并經(jīng)預(yù)熱的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基A（步驟a）或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基B（步驟d）約10ml；塞好棉塞，用高壓蒸汽滅菌器滅菌。滅菌后，將此試管放入潔凈間，并將其相對水平面傾斜15º，至冷卻凝固。若配好后不立即使用，要在5℃～10℃下保存。若試管中沒有冷凝水，重新熔化之并重復(fù)上述操作。不要使用配制完存放一個月或以上的瓊脂斜面。</p

36、><p>　　SCDLP培養(yǎng)基 按如下步驟配制：取17.0g酪蛋白胨，3.0g大豆蛋白胨，5.0g氯化鈉，2.5g磷酸二氫鉀，2.5g葡萄糖，1.0g卵磷脂，加到盛有1000ml純水的燒瓶中；混合攪勻后，加入7.0g非離子表面活性劑；完全溶解后，用氫氧化鈉或鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至7.0±0.2（25℃下）；若需要就分裝在試管中，塞好棉塞，置于高壓蒸汽滅菌器中滅菌。若配好后不立即使用，要在5℃～10℃下保存。不

37、要使用配制完存放一個月或以上的SCDLP培養(yǎng)基。</p><p>　　瓊脂培養(yǎng)基 按如下步驟配制：取20.0g瓊脂粉加入到盛有1000ml純水的燒瓶中；并在沸騰水浴中加熱至完全溶解；塞好棉塞，用高壓蒸汽滅菌器滅菌。若配好后不立即使用，要在5℃～10℃下保存。不要使用配制完存放一個月或以上的瓊脂培養(yǎng)基。</p><p>　　生理鹽水 按如下步驟配制：取8.5g氯化鈉加入到盛有1000ml

38、純水的燒瓶中；完全溶解；若需要就分裝在試管中，塞好棉塞，置于高壓蒸汽滅菌器中滅菌。若準(zhǔn)備好后不立即使用，要在5℃～10℃下保存。不要使用準(zhǔn)備完存放一個月或以上的生理鹽水。</p><p>　　洗脫用生理鹽水 按如下步驟配制：取8.5g氯化鈉加入到盛有1000ml純水的燒瓶中；完全溶解之；再加入2.0g非離子表面活性劑，溶解完后按20ml分裝在試管或錐形瓶中，塞好棉塞，置于高壓蒸汽滅菌器中滅菌。若配好后不立即使用

39、，要在5℃～10℃下保存。不要使用配制完存放一個月或以上的洗脫用生理鹽水。</p><p>　　用于制備ATP標(biāo)準(zhǔn)試劑的SCDLP培養(yǎng)基 按如下步驟配制：在潔凈工作臺中，取10ml的SCDLP培養(yǎng)基（步驟f）到經(jīng)滅菌處理的試管中，再加入1ml的ATP消除劑（參見7.5 d），混勻后在37℃下靜置1h，注意防止微生物污染。然后，將其放于70℃～90℃的熱水浴中保溫1h后取出冷卻。在冰箱中存放并在24h內(nèi)使用。&l

40、t;/p><p>　　7.5、熒光測量劑，緩沖溶液以及類似試劑 熒光測量劑，緩沖溶液以及類似試劑按下述方法配制和使用。</p><p>　　ATP標(biāo)準(zhǔn)試劑的儲放（2×10-6mol/l） 將59.7mg的三水合（5’-）三磷酸腺苷二鈉鹽溶于盛有100ml純水的燒瓶中。小心塞好塞子，并將其存放在－20℃環(huán)境下，可在6個月內(nèi)使用。</p><p>　　ATP熒

41、光試劑及類似試劑 按步驟7.2的規(guī)定，熒光光度計所采用的ATP熒光試劑應(yīng)能夠分辨10-13mol/l～10-7mol/l濃度的ATP。其成分和準(zhǔn)備步驟見下。</p><p>　　ATP熒光試劑的緩沖液 分別稱取760mg三羥甲基氨基甲烷，370mg二水合四乙酸乙烯基二銨二鈉鹽，800mg四水合乙酸鎂，8mg二硫蘇糖醇（DL-Dithiothreitol）對映體，溶于240ml純水中，并用稀醋酸把pH調(diào)節(jié)為7.

42、5±0.2（25℃下）。調(diào)節(jié)完pH值，將溶液用純水定容在250ml。注意準(zhǔn)備好的緩沖液必須在8h內(nèi)使用。</p><p>　　ATP熒光試劑 分別稱取10mg熒光（素）酶，15mg D-蟲熒光素，60mg牛血清白蛋白溶于30ml ATP熒光試劑的緩沖液中（步驟1制備）。溶解完全后在室溫下靜置15min后使用。注意配好的ATP熒光試劑必須在3h內(nèi)使用。</p><p>　　ATP

43、萃取劑 能從接種用的試驗菌細(xì)胞中萃取ATP，效率不低于80％。其成分和準(zhǔn)備步驟見下文舉例。用純水將10％的苯扎氯胺（潔爾滅）水溶液稀釋10倍。</p><p>　　ATP消除劑 在營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基B（步驟7.4 c）中加入1/10的本試劑，可將培養(yǎng)基中的ATP在15min內(nèi)降低到低于10-13mol/l的水平。其成分和準(zhǔn)備步驟見下：</p><p>　　在10ml含有0.037％蔗糖、0

44、.005mol/l的磷酸二氫鈉緩沖溶液中（pH＝7.2±0.2，25℃）加入5國際單位的三磷酸腺苷雙磷酸酶（取自馬鈴薯中），5國際單位的腺苷脫氨酶，完全溶解之。配制好的試劑要在8h內(nèi)使用。</p><p>　　接種準(zhǔn)備的緩沖液 該緩沖液含有0.037％蔗糖、0.005mol/l的磷酸二氫鈉（pH＝7.2±0.2，25℃）。</p><p>　　7.6、細(xì)菌的轉(zhuǎn)接與保存

45、 細(xì)菌的轉(zhuǎn)接應(yīng)在無菌條件下按下述步驟進(jìn)行。一只手拿一貯藏菌株的試管和一斜面培養(yǎng)基試管（步驟7.4 e）（對于定性試驗，用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基A；對于定量試驗，用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基B），另一只手握住鉑金接種環(huán)的莖部，取下試管的棉塞，并在火焰上對試管口進(jìn)行滅菌。然后將鉑金接種環(huán)用火焰滅菌并將其插入斜面培養(yǎng)基中有冷凝水的地方(2)，冷卻后用其從貯藏菌株的試管中刮一環(huán)培養(yǎng)基表面的細(xì)菌，接種并分散(3)到新鮮的斜面培養(yǎng)基表面，再次用火焰對試管口滅菌，并塞

46、好塞子。對用過的鉑金接種環(huán)再次進(jìn)行火焰滅菌。轉(zhuǎn)接好細(xì)菌的斜面培養(yǎng)基在37℃±1℃下培養(yǎng)24h～48h，并在5℃～10℃下長期貯藏。</p><p>　　一個月內(nèi)應(yīng)按上文的步驟再次進(jìn)行轉(zhuǎn)接，但轉(zhuǎn)接的代數(shù)應(yīng)控制在10代以內(nèi)；若轉(zhuǎn)接的斜面保存超過一個月，則不得用于下次的轉(zhuǎn)接。</p><p>　　注(2)：參見圖1。</p><p>　　注(3)：如圖1所示，用

47、冷凝水分散細(xì)菌，并沿斜面畫一直線直至端部。再次用接種環(huán)打散細(xì)菌，然后插入冷凝水中，再畫一條Z形折線直至端部。</p><p>　　參考資料：為長期貯藏細(xì)菌，需采用凍干管或經(jīng)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)后，培養(yǎng)基上部用滅菌石蠟封好。</p><p>　　圖1、在斜面培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)接細(xì)菌</p><p>　　8、試驗用接種液的培養(yǎng)和制備以及活菌計數(shù)</p><p>　　

48、8.1、試驗用接種液的培養(yǎng)和制備</p><p>　　8.1.1、試驗用接種液的培養(yǎng) 按以下步驟進(jìn)行細(xì)菌接種的培養(yǎng)。</p><p>　　菌培養(yǎng)物A 用鉑金接種環(huán)從保藏菌株（符合步驟7.6）上刮一環(huán)轉(zhuǎn)接到斜面培養(yǎng)基（步驟7.4 e）上，然后在37℃±1℃下培養(yǎng)24h～48h。</p><p>　　菌培養(yǎng)物B 從培養(yǎng)好的斜面上（步驟a）刮一環(huán)轉(zhuǎn)接到營養(yǎng)

49、肉湯培養(yǎng)基A（步驟7.4 b）上，并在37℃±1℃下培養(yǎng)活化24h±2h。</p><p>　　菌培養(yǎng)物C 用鉑金接種環(huán)從保藏菌株（符合步驟7.6）上刮一環(huán)轉(zhuǎn)接到含有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基B（步驟7.4 d）的平皿上，在37℃±1℃下培養(yǎng)24h～48h。然后將此平皿在5℃～10℃保藏，注意不要使用活化后貯存時間長達(dá)一周或以上的菌株。另外，該活化好的菌株在保藏期內(nèi)只可使用一次，不可多次使用。

50、</p><p>　　菌培養(yǎng)物D 取20ml的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基B（步驟7.4 c）到100ml錐形瓶中，再用鉑金接種環(huán)從菌培養(yǎng)物C的平皿上刮一菌落的細(xì)菌接種到肉湯中，并開始活化培養(yǎng)(4)。</p><p>　　注(4)：活化培養(yǎng)條件見下</p><p>　　溫 度：37℃±1℃</p><p>　　振蕩轉(zhuǎn)速：110轉(zhuǎn)/分，振幅

51、3cm</p><p>　　培養(yǎng)時間：18h～24h</p><p>　　菌培養(yǎng)物E 取20ml的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基B（步驟7.4 c）到100ml錐形瓶中，加入菌培養(yǎng)物D得到的細(xì)菌液0.4ml，菌液濃度為（1～2）×108cfu/ml，并開始培養(yǎng)(5)。</p><p>　　注(5)：接種培養(yǎng)條件見下</p><p>　　溫

52、度：37℃±1℃</p><p>　　振蕩轉(zhuǎn)速：110轉(zhuǎn)/分，振幅3cm</p><p>　　培養(yǎng)時間：3h±1h</p><p>　　培養(yǎng)后菌液濃度：約107cfu/ml</p><p>　　參考資料：該活化好的菌液在冰點保存條件下，可在8h內(nèi)使用。</p><p>　　8.1.2、試驗用接種液的

53、制備</p><p>　　定性試驗的接種（抑菌環(huán)法） 通過吸光度法(6)或熒光光譜法(7)來確定菌培養(yǎng)物B中的細(xì)菌濃度，并在室溫下用營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基A（步驟7.4 b）稀釋至（106～107）cfu/ml。</p><p>　　定量試驗的接種（菌液吸收法） 通過吸光度法(6)或熒光光譜法(7)來確定菌培養(yǎng)物D中的細(xì)菌濃度，并在室溫下用營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基B（步驟7.4 c）稀釋至（1～2）&#

54、215;108cfu/ml。</p><p>　　然后，通過吸光度法(8)或熒光光譜法(9)來確定菌培養(yǎng)物E中的細(xì)菌濃度。用純水將營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基B（步驟7.4 c）稀釋20倍，并在冰浴下用稀釋液將菌培養(yǎng)物E得到的菌濃度稀釋至（1±0.3）×105cfu/ml，用于接種試驗。該接種試驗菌液在0℃環(huán)境下存放不得超過4h。</p><p>　　注(6)：吸光度法步驟見下。&l

55、t;/p><p>　　取1ml步驟8.1.2 a）中（菌培養(yǎng)物B）或步驟8.1.2 b）中（菌培養(yǎng)物D）的肉湯置于試管中，用純水稀釋10倍，用旋渦振蕩器分散5s，30s后用分光光度計測量吸光度。測量的波長為660nm。</p><p>　　掌握光吸收度與細(xì)菌濃度的關(guān)系曲線。</p><p>　　注(7)：熒光光譜法步驟見下。</p><p>　　

56、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸公式。</p><p>　　1）用純水稀釋步驟7.5 a）得到的ATP標(biāo)準(zhǔn)試劑分別至2×10-8mol/l，2×10-9mol/l，2×10-10mol/l，并置于塑料試管中。</p><p>　　2）分別取稀釋后的ATP標(biāo)準(zhǔn)試劑2×10-8mol/l，2×10-9mol/l，2×10-10mol/l各0.1

57、ml于塑料試管中，加入步驟7.5 e得到的緩沖溶液0.9ml，并充分振蕩。分別取上述濃度的溶液各0.1ml于塑料試管中，以其作樣品測量稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)ATP試劑。</p><p>　　3）加入0.1ml純水，0.8ml接種緩沖液，0.1mlATP消除劑到塑料試管中，充分振蕩后，取3支塑料試管分別加入0.1ml上述溶液，靜置5min～30min，作為測量空白使用。</p><p>　　4）加入0

58、.1ml ATP萃取劑到步驟3）得到的測量空白中，搖勻后加入0.1ml的ATP熒光試劑，用旋渦振蕩器分散5s后，立即用熒光光度計測量發(fā)光度。</p><p>　　5）取0.1ml ATP萃取劑分別加入到用來測量稀釋后標(biāo)準(zhǔn)ATP試劑的樣品（步驟2）中，按濃度升序的次序加入；搖勻，然后加入0.1ml ATP熒光試劑，用旋渦振蕩器分散5s后，立即用熒光光度計測量發(fā)光度。</p><p>　　6）

59、通過測量稀釋后標(biāo)準(zhǔn)ATP試劑（濃度為1×10-8mol/l，2×10-9mol/l，2×10-10mol/l）的發(fā)光度的平均值來除以ATP濃度，可得到平均值的系數(shù)A。系數(shù)B可以通過下式（1）在Y＝0時得到。</p><p>　　校準(zhǔn)曲線表達(dá)式 Y＝AX＋B ………………………………………………（1）</p><p>　　其中，Y：ATP濃度（mol/l）

60、</p><p>　　X：發(fā)光度（RLU=Relative Light Unit為相關(guān)光量）</p><p>　　接種的ATP濃度按下述步驟測量。</p><p>　　1）準(zhǔn)備1支ATP消除試驗用試管和3支測試用試管。</p><p>　　2）為評價ATP消除效果，取0.1ml步驟8.1.2 a）中（菌培養(yǎng)物B）或步驟8.1.2 b）中（菌培

61、養(yǎng)物D）的肉湯，0.8ml緩沖液（步驟7.5 e），0.1ml的ATP消除劑到試管中；搖勻后分別向3支測試用試管中各加入0.1ml，靜置5min～30min。</p><p>　　3）取0.1ml的ATP萃取劑到步驟2）中的測試用試管中，振蕩5s；然后再加入0.1ml的ATP熒光試劑，用旋渦振蕩器分散5s后，立即用熒光光度計測量發(fā)光度。</p><p>　　4）得到ATP濃度Y，根據(jù)式（1

62、）并結(jié)合下式（2）將ATP濃度轉(zhuǎn)化為細(xì)菌濃度。</p><p>　　P＝10×Y×10-3/Q …………………………………………………（2）</p><p>　　其中，P：細(xì)菌濃度（cfu/ml）</p><p>　　Q：每種細(xì)菌細(xì)胞的ATP總量（mol/cell），具體數(shù)據(jù)見下</p><p>　　金黃色葡萄球菌：2.4

63、×10-18mol/cell</p><p>　　肺炎克雷伯氏菌：1.7×10-18mol/cell</p><p>　　耐甲氧苯青霉素的金黃色葡萄球菌：9.6×10-19mol/cell</p><p>　　銅綠假單胞菌：8.6×10-19mol/cell</p><p>　　大腸桿菌：2.4

64、5;10-18mol/cell</p><p><b>　　10：稀釋倍率</b></p><p>　　10-3：升到毫升的轉(zhuǎn)換系數(shù)</p><p>　　注(8)：菌液吸收法說明見下。</p><p>　　充分振蕩菌培養(yǎng)物E得到的接種液，用純水稀釋5倍，然后用旋渦振蕩器分散均勻；靜置30s后，用分光光度計在660nm處測

65、量吸收度。</p><p>　　注(9)：熒光測量法按注(7)步驟測量；但Q值按下面數(shù)據(jù)處理。</p><p>　　Q：每種細(xì)菌細(xì)胞的ATP總量（mol/cell），具體數(shù)據(jù)見下</p><p>　　金黃色葡萄球菌：9.5×10-18mol/cell</p><p>　　肺炎克雷伯氏菌：4.7×10-17mol/cell&

66、lt;/p><p>　　耐甲氧苯青霉素的金黃色葡萄球菌：3.5×10-18mol/cell</p><p>　　銅綠假單胞菌：9.8×10-17mol/cell</p><p>　　大腸桿菌：2.8×10-16mol/cell</p><p>　　定量試驗的接種（菌轉(zhuǎn)印法） 假定菌培養(yǎng)物D中接種用的細(xì)菌濃度和菌培養(yǎng)

67、物E中接種用的細(xì)菌濃度與步驟8.1.2 b）中是相同的。用純水稀釋營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基B（步驟7.4 c）20倍，在冰浴中用稀釋的營養(yǎng)肉湯調(diào)整菌培養(yǎng)物E，得到接種用菌液，使其細(xì)菌濃度達(dá)到（1～2）×107cfu/ml，制成試驗用接種液。該試驗用接種液應(yīng)在冰浴下存放并在4h內(nèi)使用。</p><p>　　8.2、活菌計數(shù)法 通過10倍梯度稀釋傾注平板培養(yǎng)基的方法或通過熒光測量法來測定洗脫后菌液中細(xì)菌濃度。<

68、;/p><p>　　8.2.1、傾注培養(yǎng)基法 傾注培養(yǎng)基法是通過10倍梯度稀釋法來測定的，按下述步驟操作。</p><p>　　用滅過菌的移液管取1ml來自步驟10.1.3 c）、步驟10.1.3 d）、步驟10.2.4 d）、步驟10.2.4 e）洗脫后的菌液，加入到盛有9ml±0.1ml生理鹽水（步驟7.4 h）的試管中，充分振蕩。用移液管取1ml上述混勻的菌液，加到另一支盛有

69、9ml±0.1ml生理鹽水（步驟7.4 h）的試管中，并振蕩均勻。重復(fù)上述操作，用10倍梯度稀釋法制備好一系列濃度，用移液管從系列梯度稀釋的試管中連續(xù)取1ml，分別放于2個平皿中，然后各加入預(yù)熱至45℃～46℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基B（步驟7.4 d）15ml，蓋好上蓋，室溫靜置15min。培養(yǎng)基固化后，將平皿倒轉(zhuǎn)，在37℃±1℃下培養(yǎng)24h～48h。培養(yǎng)后，對那些平皿中細(xì)菌數(shù)目在30～300的梯度進(jìn)行計數(shù)，由此按下式（3

70、）可以得到有兩位有效數(shù)字的經(jīng)洗脫后菌液的濃度。</p><p>　　P＝Z×R ……………………………………………………（3）</p><p>　　其中，P：細(xì)菌濃度（cfu/ml）</p><p>　　Z：平行試驗的兩個平皿計數(shù)的平均值（菌落數(shù)）</p><p>　　R：稀釋比例（倍數(shù)）</p><p>　

71、　8.2.2、熒光光譜法 熒光光譜法按以下步驟操作。</p><p>　　確定校準(zhǔn)曲線表達(dá)式。</p><p>　　稀釋ATP標(biāo)準(zhǔn)試劑（步驟7.5 a）到2×10-8mol/l，2×10-9mol/l，2×10-10mol/l至塑料試管中。若采用接種菌液吸收法則用（步驟7.4 i）的洗脫用生理鹽水來稀釋；若采用菌轉(zhuǎn)印法則用（步驟7.4 j）的用于制備ATP標(biāo)

72、準(zhǔn)試劑的SCDLP培養(yǎng)基來稀釋。</p><p>　　分別取2×10-8mol/l，2×10-9mol/l，2×10-10mol/l的ATP標(biāo)準(zhǔn)試劑0.1ml到塑料試管中，加入0.9ml的緩沖溶液（步驟7.5 e），充分振蕩。取0.1ml上述溶液到3支塑料試管中作為樣品測量稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)ATP試劑。</p><p>　　對于接種菌液吸收法取0.1ml洗脫用生理鹽

73、水（步驟7.4 i），或者對于菌轉(zhuǎn)印法則取0.1ml（步驟7.4 j）的用于制備ATP標(biāo)準(zhǔn)試劑的SCDLP培養(yǎng)基；0.8ml的緩沖溶液（步驟7.5 e），0.1ml的ATP消除劑置于塑料試管中，混勻后各取0.1ml溶液到3支塑料試管中，靜置5min～30min后作為測試用空白樣品。</p><p>　　在步驟3）的空白樣品試管中加入0.1ml的ATP萃取劑，混勻后加入0.1mlATP熒光試劑，用旋渦振蕩器分散5s

74、后，立即用熒光光度計測量發(fā)光度。</p><p>　　按濃度的升序在步驟2）用于測量稀釋后標(biāo)準(zhǔn)ATP試劑的樣品中各加入0.1ml的ATP萃取劑，振蕩5s后，加入0.1ml的ATP熒光試劑，用旋渦振蕩器分散5s后，立即用熒光光度計測量發(fā)光度。用不同濃度ATP標(biāo)準(zhǔn)試劑的發(fā)光度的平均值除以ATP濃度，得到平均值的系數(shù)A。系數(shù)B可以通過式（1）在Y＝0時得到。</p><p>　　測定洗脫液中的A

75、TP濃度。</p><p>　　每組試驗均需準(zhǔn)備ATP消除效果試驗用試管1支，測量試驗用試管3支。</p><p>　　取步驟10.1.3 c）、10.1.3 d）、10.2.4 c）和10.2.4 e）的洗脫液各0.1ml，0.8ml的緩沖溶液（步驟7.5 e），0.1mlATP消除劑到用于ATP消除效果試驗的試管中；振蕩均勻后，分別取0.1ml上述溶液到3支測量用試管中（每種濃度3支）

76、，靜置5min～30min。</p><p>　　取0.1ml的ATP萃取劑到步驟2）中的測量用試管中，振蕩5s后，加入0.1ml ATP熒光試劑，用旋渦振蕩器分散5s后，立即用熒光光度計測量發(fā)光度。</p><p>　　.根據(jù)式（1）得到ATP濃度Y。根據(jù)式（2）和下面的Q值可得到細(xì)菌濃度值。</p><p>　　菌液吸收法中的Q值：</p><

77、;p>　　金黃色葡萄球菌：2.4×10-18mol/cell</p><p>　　肺炎克雷伯氏菌：1.7×10-18mol/cell</p><p>　　耐甲氧苯青霉素的金黃色葡萄球菌：9.6×10-19mol/cell</p><p>　　銅綠假單胞菌：8.6×10-19mol/cell</p><

78、p>　　大腸桿菌：2.4×10-18mol/cell</p><p><b>　　菌轉(zhuǎn)印法中的Q值：</b></p><p>　　金黃色葡萄球菌：9.5×10-18mol/cell</p><p>　　肺炎克雷伯氏菌：4.7×10-18mol/cell</p><p>　　耐甲氧苯青霉

79、素的金黃色葡萄球菌：3.5×10-18mol/cell</p><p>　　銅綠假單胞菌：9.8×10-17mol/cell</p><p>　　大腸桿菌：2.8×10-18mol/cell</p><p>　　9、定性試驗（抑菌環(huán)法）</p><p>　　9.1、試驗樣片的制備</p><p

80、>　　9.1.1、試樣的大小、形狀和數(shù)量 試驗用樣品的大小、形狀參見下表2。對每種測試細(xì)菌，各準(zhǔn)備3片經(jīng)抑菌除臭加工的樣品和3片標(biāo)準(zhǔn)布樣品。</p><p>　　表2、試驗用樣品的大小和形狀</p><p>　　注(10)：織物樣品也可以是28mm×28mm的正方形。</p><p>　　(11)：如圖4所示，取大約0.2g重5cm長的紗線，成束平

81、行放置，分別在離兩端約5mm處用相同的紗線綁?。ǔ衫Π鼱睿?。也可用這種樣品。</p><p>　　(12)：裁好后用大約63.7MPa的壓強(qiáng)保持10min，模壓后可以使用。</p><p><b>　　單位：mm</b></p><p>　　圖2、試樣在載玻片上的纏繞</p><p>　　圖3、制備試樣用容器</p

82、><p><b>　　圖4、捆包狀測試樣</b></p><p>　　9.1.2、試樣預(yù)處理 對于用鋁箔包好步驟9.1.1中得到纏繞的試樣或放在培養(yǎng)皿中的樣品，放置在高壓蒸汽滅菌器中滅菌。若紗線試樣經(jīng)過抗菌整理并纏繞在載玻片上，則本步驟可以省略。</p><p><b>　　9.2、試驗操作</b></p>&

83、lt;p>　　9.2.1、傾注平板培養(yǎng)基的制備 在潔凈工作臺中，取1ml步驟8.1.2 a）中的菌液到經(jīng)滅菌處理的平皿中，加入15ml預(yù)熱至45℃～46℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基A（步驟7.4 a），充分混合，室溫靜置直至固化。將平皿翻轉(zhuǎn)(13)，保持上蓋傾斜(14)室溫下放置約30min～3h使多余水分蒸干。</p><p><b>　　注(13)：見圖5</b></p>&

84、lt;p><b>　　(14)：見圖6</b></p><p><b>　　圖5</b></p><p><b>　　圖6</b></p><p>　　9.2.2、試樣的試驗操作 用無菌紗布蘸酒精對鑷子進(jìn)行消毒，小心取經(jīng)步驟9.1.2處理的試樣放置于步驟9.2.1制備的平板培養(yǎng)基的中心，使樣品

85、緊貼在培養(yǎng)基表面并注意不要擦壞表面。在此過程中若樣品在處理時容易卷曲或具有纖維填料、長絨等，可在試樣(15)上面放置一經(jīng)過滅菌處理的不銹鋼圓片。</p><p>　　注(15)：若不銹鋼圓片比試樣大，可將該圓片放置到幾個堆砌起來的試樣上，保證不銹鋼圓片不會接觸到培養(yǎng)基表面。</p><p>　　9.3、培養(yǎng)試驗 將步驟9.2.2得到的平皿倒置(16)，在37℃±1℃下培養(yǎng)24h

86、～48h。</p><p>　　注(16)：當(dāng)試驗樣品上放有不銹鋼圓片或樣品纏繞在載玻片上時，平皿不需翻轉(zhuǎn)。</p><p>　　9.4、確定試驗用菌的活性狀況 按步驟9.3培養(yǎng)完后，若標(biāo)準(zhǔn)布所在的培養(yǎng)基表面沒有顯著的細(xì)菌增殖，則該試驗無效，應(yīng)重復(fù)本試驗。</p><p><b>　　9.5、試驗結(jié)果</b></p><p

87、>　　9.5.1、抑菌環(huán)的測量 在按步驟9.3培養(yǎng)完成后，從平皿底部看在試驗樣品周圍有抑菌環(huán)出現(xiàn)；如下圖7所示測量T值和D值，以mm為單位的整數(shù)；根據(jù)下式（4）來計算抑菌環(huán)寬度。這樣可以得到抗菌樣品的3個片的抑菌環(huán)寬度平均值，注意保留一位小數(shù)。</p><p>　　W＝（T－D）/2 ……………………………………………………（4）</p><p>　　其中，W：抑菌環(huán)寬度（mm）&

88、lt;/p><p>　　T：試樣和抑菌環(huán)的總寬度（mm）</p><p>　　D：試樣的長度（mm）</p><p><b>　　圖7、抑菌環(huán)的測量</b></p><p>　　9.5.2、抑菌環(huán)存在的評價 根據(jù)表3來對步驟9.5.1的抑菌環(huán)結(jié)果進(jìn)行評價。</p><p><b>　　表3

89、</b></p><p>　　9.5.3、試驗結(jié)果的記錄 記錄細(xì)菌名稱、保藏號、接種細(xì)菌濃度、抗菌處理樣品的抑菌環(huán)寬度平均值、是否存在抑菌環(huán)、試驗樣品的形狀和種類等。若在樣品上放置了不銹鋼圓片，在試驗結(jié)果記錄中應(yīng)該標(biāo)明（參考下面的示例）。</p><p><b>　　示例：檢測結(jié)果</b></p><p><b>　　1

90、0、定量試驗</b></p><p>　　10.1、菌液吸收法</p><p>　　10.1.1、試驗樣片的準(zhǔn)備 制備6片標(biāo)準(zhǔn)布樣片(17)和3片經(jīng)抑菌除臭加工的樣片，重約0.4g尺寸在18mm的正方形。制作樣片時注意避免污染。</p><p>　　注(17)：在6片標(biāo)準(zhǔn)布樣片中，3片用作接種后立刻進(jìn)行活菌計數(shù)，剩下3片用作培養(yǎng)試驗后的活菌計數(shù)。<

91、;/p><p>　　10.1.2、樣片的滅菌 取步驟10.1.1中得到的每片樣品(18)~(21)分別放到小瓶中。將去蓋小瓶按口朝上放入金屬筐中，筐上部加以鋁箔封裝，瓶蓋也單獨用鋁箔封包，并用高壓鍋滅菌。滅菌完畢后，立即從高壓鍋取出，去掉鋁箔，置于潔凈工作臺上干燥60min，然后旋緊小瓶蓋子。</p><p>　　注(18)：若試樣容易卷曲，按方形取0.4g，對折得到約18mm的正方形，將其

92、放于小瓶中，上面壓一只玻璃棒，或者折疊成18mm的正方形，重約0.4g的樣片，并用線固定一端或兩端。</p><p>　　注(19)：若是羽毛或纖維填料的試樣，取0.4g放于小瓶中，并放一個玻璃棒在上面。</p><p>　　注(20)：對于紗線樣品，取若干束成捆，并壓一只玻璃棒在上面。</p><p>　　注(21)：若是地毯或者類似物，疊起來裁，取0.4g重的一

93、疊放入小瓶中，其上壓一只玻璃棒。</p><p>　　10.1.3、試驗操作</p><p>　　接種試驗的培養(yǎng) 用移液管準(zhǔn)確量取0.2ml步驟8.1.2 b）中制備的試驗用接種液，按點樣接種(22)到步驟10.1.2準(zhǔn)備的樣品上，并蓋緊瓶蓋。</p><p>　　注(22)：為充分浸透樣品，可在接種液中加入0.05％的非離子表面活性劑。若接種液中加入了表面活性劑

94、，則在檢測結(jié)果和報告中要如實記錄。</p><p>　　培養(yǎng)試驗 接種后開始培養(yǎng)試驗（3個標(biāo)準(zhǔn)布對照樣，3個經(jīng)抑菌除臭加工的試樣），在溫度為37℃±1℃下培養(yǎng)18h±1h。</p><p>　　接種完成后立即洗脫 取20ml洗脫用生理鹽水（步驟7.4 i制備）加入到步驟a）中3個標(biāo)準(zhǔn)布對照樣的瓶中，旋緊瓶蓋，用力振蕩（振幅30cm振蕩30次）或用旋渦振蕩器（每次5s

95、振蕩5次）來洗脫每個試樣表面的細(xì)菌。</p><p>　　培養(yǎng)完成后的洗脫 各取20ml冰冷的生理鹽水（步驟7.4 i制備）分別加入到步驟b）中的6個樣片的小瓶中，旋緊瓶蓋，用力振蕩（振幅30cm振蕩30次）或用旋渦振蕩器（每次5s振蕩5次）來洗脫每個試樣表面的細(xì)菌。</p><p>　　活菌計數(shù) 結(jié)合步驟8.2并根據(jù)式（5）得到活菌濃度。</p><p>　　

96、M＝P×20 ………………………………………………………（5）</p><p>　　其中，M：活菌數(shù)目（cell）</p><p>　　P：按步驟8.2得到的細(xì)菌濃度（cells/ml）</p><p>　　20：洗脫用生理鹽水的體積（ml）</p><p>　　10.1.4、檢測結(jié)果</p><p>　　試

97、驗有效性的判定 根據(jù)細(xì)菌增殖數(shù)量來判定試驗結(jié)果的有效性。按式（6）得到細(xì)菌增殖數(shù)量，并按JIS Z 8401的標(biāo)準(zhǔn)修約成兩位有效數(shù)字。若增長值大于1.5，則試驗有效；若增長值小于或等于1.5，則試驗結(jié)果無效。若試驗結(jié)果無效，需要重復(fù)試驗。</p><p>　　F＝Mb－Ma ……………………………………………………（6）</p><p>　　其中，F(xiàn)：細(xì)菌增長值</p>&

98、lt;p>　　Mb：3個標(biāo)準(zhǔn)對照布樣品經(jīng)18h培養(yǎng)試驗后得到活菌數(shù)目的常用對數(shù)之平均值。</p><p>　　Ma：3個標(biāo)準(zhǔn)對照布樣品在接種后立即洗脫得到活菌數(shù)目的常用對數(shù)之平均值。</p><p>　　活性值的計算 若試驗有效，根據(jù)式（7）可得到抑菌活性值；根據(jù)式（8）可得到殺菌活性值；注意只保留2位有效數(shù)字。</p><p>　　S＝Mb－Mc …………

99、…………………………………………（7）</p><p>　　L＝Ma－Mc ……………………………………………………（8）</p><p>　　其中，S：抑菌活性值</p><p><b>　　L：殺菌活性值</b></p><p>　　Ma：3個標(biāo)準(zhǔn)對照布樣品在接種后立即洗脫得到活菌數(shù)目的常用對數(shù)之平均值。</p

100、><p>　　Mb：3個標(biāo)準(zhǔn)對照布樣品經(jīng)18h培養(yǎng)試驗后得到活菌數(shù)目的常用對數(shù)之平均值。</p><p>　　Mc：3個經(jīng)抑菌除臭加工的樣品在18h培養(yǎng)試驗后得到活菌數(shù)目的常用對數(shù)之平均值。</p><p>　　試驗結(jié)果的記錄 記錄細(xì)菌名稱、保藏號、接種細(xì)菌濃度、抑菌或殺菌活性值、活菌計數(shù)方法、試驗樣品的種類等（參考下面的示例）。若在接種菌液中加入了非離子表面活性劑，

101、要記錄其名稱和濃度。</p><p>　　示例1、試驗結(jié)果（抑菌活性值）</p><p>　　示例2、試驗結(jié)果（殺菌活性值）</p><p><b>　　10.2、菌轉(zhuǎn)印法</b></p><p>　　10.2.1、試驗用樣品 制備每片60mm見方的試樣，共6片標(biāo)準(zhǔn)布樣片(23)和3片抗菌加工的樣品。制作樣片時注意避免

102、污染。</p><p>　　注(23)：在6片標(biāo)準(zhǔn)布樣片中，3片用作轉(zhuǎn)印接種后立刻進(jìn)行活菌計數(shù)，剩下3片用作培養(yǎng)試驗后的活菌計數(shù)。</p><p>　　10.2.2、樣片的滅菌 取步驟10.2.1得到的樣片置于玻璃平皿中，用鋁箔包好放在高壓鍋中滅菌。滅菌完畢后，從高壓鍋取出，去掉鋁箔，置于潔凈工作臺上干燥60min。</p><p>　　10.2.3、樣片濕度的調(diào)

103、節(jié) 取準(zhǔn)備好的10ml瓊脂培養(yǎng)基（步驟7.4 g）置于平皿中，在潔凈工作臺中去掉上蓋冷卻和固化，避免產(chǎn)生露水。冷卻至室溫時，按圖8所示將試樣放在平皿的蓋子上，用裝有瓊脂培養(yǎng)基的平皿底倒扣在上面，持續(xù)放置18h～24h來調(diào)節(jié)濕度(24)。</p><p>　　圖8、調(diào)節(jié)濕度用帶瓊脂培養(yǎng)基的平皿</p><p>　　注(24)：若轉(zhuǎn)印細(xì)菌到干燥的試樣表面，水分容易被試樣吸收從而導(dǎo)致細(xì)菌干死，

104、因此要將樣品調(diào)整到較高濕度。</p><p>　　10.2.4、試驗操作</p><p>　　試驗用菌的過濾 在潔凈工作臺上，將濾膜(25)放置在經(jīng)高壓鍋滅菌處理的過濾裝置上。取經(jīng)20倍稀釋的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基B（步驟7.4 c）5ml放在濾膜上；接下來再加入2ml步驟8.1.2 c）制備的試驗用接種菌液；減壓過濾。在濾膜上液體消失后仍保持減壓1min。</p><p&g

105、t;　　注(25)：濾膜不能進(jìn)行滅菌處理，因為無論高壓蒸鍋或酒精滅菌都容易導(dǎo)致濾孔改變。</p><p>　　說明：對于該過濾裝置來說，濾膜下方是燒結(jié)玻璃或特氟龍涂膜的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。通過簡單的裝置如抽氣機(jī)或小型空氣泵等來進(jìn)行減壓。</p><p>　　試驗菌的轉(zhuǎn)印 用滅過菌的鑷子從過濾裝置上取下帶有細(xì)菌的濾膜，如圖9所示將濾膜帶細(xì)菌面向上放在轉(zhuǎn)印裝置的旋轉(zhuǎn)臺上，用滅過菌的鑷子從經(jīng)濕度調(diào)節(jié)的培

106、養(yǎng)基平皿中取出試樣，將其表面沖下的放在濾膜上。然后，在轉(zhuǎn)印裝置上部加上4N的力壓住試樣，同時以3.0s內(nèi)單一方向?qū)⑿D(zhuǎn)臺轉(zhuǎn)動180º，將細(xì)菌轉(zhuǎn)印在試樣上。轉(zhuǎn)印完畢后，迅速取下試樣并將沾菌面朝上放在培養(yǎng)基上。</p><p><b>　　圖9、轉(zhuǎn)印裝置</b></p><p>　　培養(yǎng)試驗 將步驟10.2.4 b）得到的平板培養(yǎng)基放置在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件

107、為20℃±1℃，相對濕度≥70％，時間1h～4h±0.1h。</p><p>　　轉(zhuǎn)印完試驗細(xì)菌的立即洗脫 將步驟10.2.4 b）轉(zhuǎn)印完得到的3個標(biāo)準(zhǔn)布樣片分別放于盛有20ml SCDLP培養(yǎng)基的小瓶中，用旋渦振蕩器（每次5s振蕩5次）來洗脫每個試樣表面的細(xì)菌。</p><p>　　培養(yǎng)完成后的洗脫 將步驟10.2.4 c）完成培養(yǎng)的樣片分別放于盛有20ml SC

108、DLP培養(yǎng)基的小瓶中，用旋渦振蕩器（每次5s振蕩5次）來洗脫每個試樣表面的細(xì)菌。</p><p>　　活菌計數(shù) 結(jié)合步驟8.2并根據(jù)式（5）得到活菌濃度。</p><p>　　10.2.5、檢測結(jié)果</p><p>　　試驗有效性的判定 若結(jié)果滿足以下兩條件，則試驗結(jié)果有效。若判定結(jié)果無效，需要重復(fù)試驗。</p><p>　　轉(zhuǎn)印后標(biāo)準(zhǔn)對

109、照布表面的細(xì)菌不低于1.0×106個。</p><p>　　根據(jù)下式（9）得到的標(biāo)準(zhǔn)對照布表面細(xì)菌的增減值應(yīng)在＋0.5～－0.5之間。</p><p>　　F＝Me－Md ……………………………………………………（9）</p><p>　　其中，F(xiàn)：細(xì)菌的增減值</p><p>　　Me：經(jīng)1h～4h的培養(yǎng)后，3個標(biāo)準(zhǔn)對照布表面活菌

110、數(shù)目的常用對數(shù)之平均值。</p><p>　　Md：轉(zhuǎn)印完畢后，立即洗脫標(biāo)準(zhǔn)對照布得到活菌數(shù)目的常用對數(shù)之平均值。</p><p>　　細(xì)菌減少值的計算 若試驗有效，根據(jù)式（10）可得到細(xì)菌減少值，只保留2位有效數(shù)字。</p><p>　　N＝Mf－Mg ……………………………………………………（10）</p><p>　　其中，N：細(xì)菌減

111、少值</p><p>　　Mf：經(jīng)1h～4h的培養(yǎng)后，3個標(biāo)準(zhǔn)布試樣表面活菌數(shù)目的常用對數(shù)之平均值。</p><p>　　Mg：經(jīng)1h～4h的培養(yǎng)后，3個經(jīng)抗菌加工的試樣表面活菌數(shù)目的常用對數(shù)之平均值。</p><p>　　結(jié)果記錄 記錄細(xì)菌名稱、保藏號、轉(zhuǎn)印細(xì)菌濃度、細(xì)菌減少值、活菌計數(shù)方法、試驗樣品的種類等（參考下面的示例）。</p><p