牦牛黑素皮質(zhì)素受體-4(MC4R)基因的克隆測(cè)序及其多態(tài)性分析.pdf

1、黑素皮質(zhì)素受體-4(MC4R)是下丘腦腹內(nèi)側(cè)核(VMH)分泌的一類(lèi)肽類(lèi)物質(zhì),為黑素皮質(zhì)素家族5個(gè)成員之一。MC4R屬于G-蛋白耦聯(lián)受體(GPCRS)超級(jí)家族,為跨膜神經(jīng)受體，是一個(gè)調(diào)節(jié)能量平衡與能量動(dòng)態(tài)平衡的重要的信號(hào)分子。本研究以大通牦牛、野牦牛和犏牛為研究對(duì)象，對(duì)MC4R基因的編碼區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增和克隆測(cè)序，在對(duì)牦牛MC4R基因進(jìn)行序列分析的基礎(chǔ)上，與GenBank中其它物種相應(yīng)基因核苷酸序列、氨基酸序列進(jìn)行了比對(duì)分析，并構(gòu)建了牦牛

2、與其它物種間系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)。得到以下結(jié)論：
　　 ①克隆得到的牦牛MC4R基因全長(zhǎng)1434bp,其中編碼區(qū)為999bp,編碼332個(gè)氨基酸。
　　 ②大通牦牛、野牦牛、犏牛和普通牛(Bos Taurus,AF265221)的MC4R基因在編碼區(qū)內(nèi)，共發(fā)現(xiàn)6處堿基差異，大通牦牛與普通牛在40bp(G/A)、69bp(T/C)、865bp(G/C)、918bp(G/C)、945bp(T/C)5個(gè)位點(diǎn)上分別發(fā)生堿基轉(zhuǎn)換或顛換；大通

3、牦牛與野牦牛在69bp(T/C)、945bp(T/C)2個(gè)位點(diǎn)上分別發(fā)生堿基的轉(zhuǎn)換；大通牦牛與犏牛在69bp(T/C)、865bp(G/C)、945bp(T/C)、949bp(A/G)4個(gè)位點(diǎn)上分別發(fā)生堿基轉(zhuǎn)換或顛換。而大通牦牛、野牦牛和犏牛三種牛與普通牛分別有5、3、3次堿基差異。
　　 ③大通牦牛、野牦牛、犏牛和普通牛MC4R的氨基酸序列比較結(jié)果表明，4種牛之間共有3處氨基酸存在差異，其中在第11位大通牦牛、野牦牛和犏牛均為

4、Ala(A),而普通牛為T(mén)hr(T)；在286位大通牦牛和野牦牛為Val(V)，而犏牛和普通牛為L(zhǎng)eu(L)；在314位大通牦牛、野牦牛和普通牛為L(zhǎng)ys(K)，而犏牛為Glu(E)。
　　 ④通過(guò)PCR-SSCP分析發(fā)現(xiàn)，在大通牦牛MC4R基因擴(kuò)增片段中，引物2和引物6存在多態(tài)性，其余4對(duì)引物均未發(fā)現(xiàn)多態(tài)性。引物2存在3種基因型（AA、BB、AB）,引物6存在2種基因型(CC、CD)。經(jīng)χ2適合性檢驗(yàn)，兩對(duì)引物的突變位點(diǎn)均不符合