枸杞品種(系)分子鑒定及親緣關(guān)系分析.pdf

1、枸杞（Lycium bararum L.）是隸屬茄科（Solanaceae）枸杞屬（lycium）的一種多年生落葉分枝小灌木。它是我國重要的藥用觀賞植物植物之一，具有較高的藥用價值、食用價值和觀賞價值。本研究以35個枸杞品種（系）為材料，選用鑒定能力最強且具有廣泛應用價值的SRAP和SSR技術(shù)，探索在枸杞品種（系）的標記特征及其在品種（系）鑒定和遺傳關(guān)系推測方面的應用，旨在為枸杞雜交育種親本選擇、品種鑒定、新品保護和品種分類等提供理論參

2、考和技術(shù)指導。其主要研究結(jié)果如下：
　　1.枸杞SRAP和SSR技術(shù)體系的建立和優(yōu)化
　?。?）建立了枸杞SRAP反應體系（20μL）：1.5mmol·L-1Mg2+、1×PCR buffer、50 ng DNA模板、0.3 mmol·L-1dNTPs、0.3μmol·L-1引物和1.0 U Taq DNA聚合酶。枸杞SRAP-PCR擴增程序是：94℃預變性3 min；94℃變性1 min，35℃退火1 min，72℃延伸2

3、min，5個循環(huán)；94℃變性1 min，50℃退火1 min，72℃延伸2 min，35個循環(huán)；循環(huán)結(jié)束后，72℃延伸7 min，4℃保存。
　?。?）建立了枸杞SSR反應體系（20μL）：1.5mmol·L-1Mg2+、1×PCR buffer、50ng DNA模板、0.2 mmol·L-1 dNTPs、0.2μmol·L-1引物和1.0 U Taq DNA聚合酶。枸杞SSR-PCR擴增程序是：94℃預變性3 min；94℃變性

4、30s，50℃復性30s（不同引物設定不同的退火溫度），72℃延伸1min，34個循環(huán)；循環(huán)結(jié)束后，72℃延伸7min，4℃保存。
　　2．基于SRAP技術(shù)的枸杞品種（系）鑒定及其親緣關(guān)系分析
　?。?）SRAP多態(tài)性結(jié)果：10對SRAP引物在35個枸杞品種（系）中共擴增出49條帶，平均每對引物擴增出4.9條，其中43條為多態(tài)性（87.7%），每對引物擴增多態(tài)性的條帶數(shù)介于1~6之間，平均為4.3條。多態(tài)性比率范圍在50%（

5、Me1/Em4）~100%（Me2/Em5，Me3/Em6和Me6/Em1）之間。
　?。?）SRAP分子鑒定結(jié)果：選用10對SRAP引物組合，每對引物組合鑒定效率和能夠區(qū)分的品種（系）的數(shù)目不同。引物Me3/Em6和Me4/Em2組合的鑒別效率最高為20%，能夠區(qū)分品種數(shù)為7個；引物Me1/Em4鑒別效率最低為2.8%，僅能夠區(qū)分品種數(shù)為1個。所有引物相互組合可鑒別18個品種（系）。沒有檢測到完全區(qū)分所有供試品種（系）的單引物組

6、合。
　?。?）SRAP標記聚類結(jié)果：在遺傳相似系數(shù)以0.82為閾值時，將供材料分為6大類群，其中第Ⅰ大類群中包括27份種質(zhì)材料，主要是寧夏枸杞栽培品種和09品系，另外黃果枸杞與黑果枸杞也聚類在這一大類；第Ⅱ類群中包括了2份種質(zhì)材料，它們是新疆枸杞和白花枸杞；第Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ類群中各有1份種質(zhì)材料，它們依次是云南枸杞、柱筒枸杞和蔓生枸杞；第Ⅵ類群中包括2份種質(zhì)材料，它們是中國枸杞和北方枸杞。SRAP聚類結(jié)果與植物形態(tài)聚類結(jié)果基本相符合

7、。
　　3.基于SSR技術(shù)的枸杞品種（系）鑒定及其親緣關(guān)系分析
　?。?）SSR多態(tài)性結(jié)果：10對引物在35個枸杞品種（系）中共擴增出65條帶，其全部為多態(tài)性條帶，平均多態(tài)性比率高達100%。每對引物擴增多態(tài)性條帶數(shù)介于3~12條之間，平均為6.5條。其中引物SF30擴增出條帶數(shù)最多，為12條，其次為引物SF80為11條，而引物SF21和引物SF68擴增條帶數(shù)最少，均為3條。多態(tài)信息含量（PIC）的變化范圍在0.403~0.

8、806之間，平均為0.630，其中引物SF80的PIC值最高為0.806，引物SF11的PIC值最低為0.403。
　?。?）SSR分子鑒定結(jié)果：篩選出10對SSR引物鑒別品種數(shù)在3~14個之間，鑒別效率范圍在8.5%~40%之間，其中引物SF30的鑒別效率最高為40%，可區(qū)分品種（系）數(shù)14個，引物SF11和引物SF21的鑒別效率最低均為8.5%，可鑒別的品種數(shù)3個。
　　（3）SSR標記聚類結(jié)果：以遺傳相似系數(shù)0.68為

9、閾值，將供試材料劃分為6大類群，第Ⅰ大類群包括30份種質(zhì)材料，其主要也多為寧夏枸杞栽培品系（6份）和09品系（20份），另外包括4份枸杞野生種，是黃果枸杞、黑果枸杞、新疆枸杞和白花枸杞；第Ⅱ、第Ⅲ、第Ⅳ、第Ⅴ和第Ⅵ大類群各有包括1份種質(zhì)，它們依次是云南枸杞、柱筒枸杞、蔓生枸杞、北方枸杞和中國枸杞。
　　4. SRAP和SSR的標記在枸杞品種（系）鑒定及其應用比較
　　在枸杞品種（系）分子鑒定中，SSR引物對的最大鑒別效率大于