甜瓜抗白粉病基因的SSR標(biāo)記及生理小種鑒定研究.pdf

1、甜瓜白粉病是危害我國甜瓜生產(chǎn)的重要病害之一，抗病品種的選育和利用是防治該病害的最有效措施。同時，由于抗病遺傳基礎(chǔ)的狹窄和生理小種的變異使抗病品種不斷喪失抗性，因此，本研究通過甜瓜白粉病病原生理小種鑒定及SSR分子標(biāo)記尋找抗白粉病緊密連鎖標(biāo)記為出發(fā)點，為明確當(dāng)?shù)匕追鄄【纳硇》N引進(jìn)抗源材料，為甜瓜白粉病抗病分子標(biāo)記輔助育種提高選擇效率來開展抗病育種及防治提供理論依據(jù)。 本試驗對供試甜瓜白粉菌病原貯藏方法、接種方法及生理小種鑒定進(jìn)

2、行了研究，以抗白粉病品種PMR5和感白粉病品種黃河蜜與其雜交后代F1及F2群體為材料，對親本、F1和F2單株進(jìn)行了苗期抗病性接種鑒定，對其進(jìn)行抗性遺傳規(guī)律分析，利用F2群體的極抗株和極感株的DNA建立抗、感池，用分離群體分組混合分析法（BSA）進(jìn)行SSR標(biāo)記分析，尋找與抗病基因連鎖的標(biāo)記，主要實驗結(jié)果如下： 1．引進(jìn)國際通用的甜瓜白粉病菌生理小種鑒別寄主與標(biāo)準(zhǔn)鑒定體系，鑒別本試驗白粉病菌生理小種，采用不同貯藏方法處理新鮮的白粉病

3、菌，用摩擦接種法和噴霧法將該病原接種于葉片上，觀察不同接種方法對白粉病發(fā)病的影響，結(jié)果顯示用陰干低溫（4℃）方法貯藏白粉病菌可保持3周左右；摩擦接種法發(fā)病早且重；初步確定采自皋蘭大棚白粉病菌屬單囊殼白粉菌（S．fuliginea）種的生理小種1。 2．構(gòu)建的PRM5×黃河蜜的F2群體性狀發(fā)生分離，出現(xiàn)抗病和感病植株。田間鑒定123株抗病，57株感病。對F2群體抗感分離數(shù)據(jù)的X2測驗表明，所有F2調(diào)查群體抗感分離符合3抗：1感的分

4、離比例（X20．05，1），由此推出PMR5對該病原菌的抗性由1對顯性基因控制。 3．SSR穩(wěn)定性研究中，經(jīng)過對擴(kuò)增條件的優(yōu)化，得出最佳SSR的反應(yīng)條件為：反應(yīng)體系（25．0μl）中含有10×Taq Buffer2．5μL，2．5 mmol/L dNTPs2．0μL，MgCl2（25 mmol/L）2．0μL，2．5 U/μlTaq酶0．4μL，SSR上、下游引物（5pmol/μL）各2．0μL，100 ng/μL模板DNA1．

5、0μL。SSR擴(kuò)增熱循環(huán)參數(shù)為：94℃預(yù)變性3 min，然后94℃變性30 sec，50～60℃退火30 sec，72℃延伸1 min，共30個循環(huán)，最后72℃延伸5 min。 4．通過分離群體分組分析法（BSA），利用抗病基因池和感病基因池進(jìn)行抗病基因的SSR標(biāo)記篩選。經(jīng)過反復(fù)的篩選，引物CSAT425在親本和F2代抗感基因池之間擴(kuò)增出一條大小約為98bp的多態(tài)性片段。經(jīng)F2代群體單株驗證后，該多態(tài)性條帶與PMR5抗白粉病基因