利用DNA分子標記研究梨、櫻桃種質資源遺傳多樣性.pdf

1、本論文采用SRAP、SSR及EST-SSR標記技術，開展了梨屬和櫻桃屬種質資源遺傳多樣性研究，主要結果如下：
　　 （1）利用來自蘋果的8對EST-SSR標記，對48份梨（Pyrus）種質資源進行遺傳多樣性研究，以分析其在梨屬植物上的通用性。結果表明，8對EST-SSR引物在供試材料上均能擴增出與蘋果大小相似的產物，所有引物共檢測到140個基因位點，其中多態(tài)性位點129個，多態(tài)性比例為92.14％，并且可成功區(qū)分不同品種，可見蘋

2、果的EST-SSR標記在梨上具有高度的可轉移性，可應用于梨屬植物的資源評價及遺傳關系研究。根據(jù)EST-SSR標記所揭示的多態(tài)性，采用NTSYS-pc2.01軟件，以UPGMA法進行聚類分析，結果顯示所檢測的48份梨種質資源在相似系數(shù)0.62處可分為東方梨和西方梨兩個種群，其中中國的白梨（Pyrus bretschneideri Rehd.）、砂梨（P.pyrifoliaNakai.）和秋子梨（P.ussuriensis Maxin.）相

3、互交錯在一起，沒有獨自成組。
　　 （2）利用 SSR分子標記技術系統(tǒng)研究了不同栽培種白梨（Pyrus bretschneideriRehd.）、砂梨（Pyrus pyrifolia（Burm.f.）Nakai）、秋子梨（Pyrus ussuriensis Maxim.）、西洋梨（Pyrus communis L.）、新疆梨（Pyrus sinkiangensis Yii）、種間雜交新選育品種、以及野生種（Specii salb

4、atice）共150份資源的遺傳多樣性、親緣關系以及系統(tǒng)分類地位。通過篩選出的25對SSR引物共檢測407個等位基因，不同引物檢測位點數(shù)5-25個，其中多態(tài)性位點數(shù)390個，占檢測位點的95.82％，檢測位點雜合度為0.4-0.7，不同品種見的遺傳多樣性指數(shù)為0.67-1.00。應用NTSYS-pc2.01軟件，以UP-GMA法對獲得的多態(tài)性位點進行聚類分析，系統(tǒng)聚類結果將150份梨種質分為2大類群，即東方梨和西洋梨。西洋梨類群包括了西

5、洋梨品種及具西洋梨親緣的種間雜交品種。東方梨類群包括了中國白梨、砂梨、秋子梨、新疆梨、野生資源以及日韓梨品種，在相似系數(shù)0.685處又分為2大組，并可細分為7個亞組。其中，中國的白梨、砂梨和秋子梨相互交錯在一起，沒有獨自成組。中國砂梨表現(xiàn)出最豐富的遺傳多樣性；其次是中國白梨。日本梨與中國砂梨表現(xiàn)了高度的親緣關系，并且沒有獨立成組。多數(shù)新選育品種的遺傳關系表現(xiàn)出趨母本聚類型或趨父本聚類型。
　　 （3）應用SRAP技術對300份種

6、質資源進行遺傳多樣性分析，20對SRAP引物擴增出210個等位基因，平均每個位點10.5個，其中多態(tài)性位點192個，多態(tài)性位點百分率為91.43％；該群體具有中等程度的遺傳多樣性，Nei's遺傳多樣性指數(shù)（He）為0.2788，Shannon信息指數(shù)（H0）為0.4250。20對引物可區(qū)分除部分芽變品種之外的全部供試品種。根據(jù)SRAP標記所揭示的多態(tài)性，采用NTSYS-pc2.02軟件，以UPGMA法進行聚類分析，結果顯示所檢測的300

7、份梨種質資源在相似系數(shù)0.66處可分為東方梨和西方梨兩個種群，西洋梨類群包括了西洋梨品種及具西洋梨親本的種間雜交品種，并可劃分為5個大組。東方梨類群包括了中國白梨、砂梨、秋子梨、新疆梨、野生資源以及日韓梨品種，可分為6個大組，并可細分為11個亞組。其中，中國的白梨、砂梨和秋子梨相互交錯在一起，沒有獨自成組。日本梨與中國砂梨表現(xiàn)了高度的親緣關系，并且沒有獨立成組。多數(shù)新選育品種的遺傳關系表現(xiàn)出趨母本聚類型或趨父本聚類型。
　　 （

8、4）試驗選取親緣關系較遠的3個不同基因型櫻桃資源為試材，對影響SRAP標記PCR反應的模板、Mg2+、dNTPs、Taq酶及引物濃度進行了優(yōu)化，建立了適合于櫻桃SRAP標記的擴增體系。反應體系具體為：模板DNA75ng，dNTPs0.2 mmol.L-1，Mg2+2.5mmol.L-1，primer0.3μmol.L-1，Taq酶1.0U，反應總體積20μL。采用優(yōu)化的擴增體系，對45個櫻桃種質材料進行了遺傳多樣性分析，篩選8對擴增清晰