嵌合型PCV1-2滅活疫苗生產(chǎn)用PK-15細(xì)胞庫和PCV1-2種毒庫的建立及鑒定.pdf

1、豬圓環(huán)病毒2型(porcine circovirus2，PCV2)與豬群中發(fā)生的多種傳染病相關(guān)，它已被證明是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰弱綜合征(postweaning multisystemicwasting syndrome，PMWS)等疾病的重要病原體。自1991年在加拿大斷奶仔豬群中首次發(fā)現(xiàn)PMWS以來，世界上許多養(yǎng)豬國家和地區(qū)均已報道了該病的發(fā)生和流行。該病的主要臨床癥狀是消瘦、呼吸困難、淋巴結(jié)腫大、皮膚蒼白及黃疸。目前國內(nèi)外學(xué)者都在

2、致力于有效控制和消滅PCV2流行的有效疫苗的研制并已取得了一定進(jìn)展，有些疫苗已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗和綜合評價中。本實驗室研制的嵌合型豬圓環(huán)病毒PCV1-2滅活疫苗可以有效地誘導(dǎo)免疫豬產(chǎn)生對PCV2感染的保護(hù)性免疫應(yīng)答。
　　 本研究的目的在于建立PCV1-2滅活疫苗生產(chǎn)用三級細(xì)胞庫，以保證PK-15細(xì)胞作為病毒培養(yǎng)基質(zhì)的安全性。同時，建立PCV1-2三級種毒庫，為疫苗的生產(chǎn)提供種子。
　　 1嵌合型PCV1-2滅活疫苗生產(chǎn)用P

3、K-15細(xì)胞庫的建立及鑒定
　　 建立PCV1-2滅活疫苗生產(chǎn)用三級細(xì)胞庫，保證PK-15細(xì)胞作為病毒培養(yǎng)基質(zhì)的安全性。根據(jù)2000年版《中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程》對生物制品生產(chǎn)用傳代細(xì)胞系的要求，對PK-15細(xì)胞進(jìn)行核型分析、致腫瘤性等一系列基礎(chǔ)性試驗。結(jié)果表明：所建立和保存的PK-15細(xì)胞染色體為2n=38，經(jīng)過對比分析，在基礎(chǔ)細(xì)胞庫中存在的染色體標(biāo)志，在最高代次細(xì)胞中也存在，與基礎(chǔ)細(xì)胞庫細(xì)胞相比，所有細(xì)胞的染色體模式

4、數(shù)均低于10％，并且核型相同：將三個細(xì)胞庫的種子分別傳至最高限制代次45代，皮下接種裸鼠12周無腫瘤形成；沒有污染細(xì)菌、真菌、支原體和外源病毒，符合2000年版《中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程》疫苗生產(chǎn)用細(xì)胞庫要求，可以作為嵌合型PCV1-2滅活疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞。
　　 2 PCV1-2種毒庫的建立及鑒定
　　 為了保證生產(chǎn)疫苗的質(zhì)量和穩(wěn)定性，建立了疫苗生產(chǎn)用PCV1-2的三個種毒庫，即原始種毒庫、基礎(chǔ)種毒庫和工作種毒庫。